Наша установка сосудистой манжеты обеспечивает ламинарный кровоток, и мы используем большую манжету для легочной артерии донора, чтобы обеспечить достаточный возврат крови к реципиентам. Эти модификации, используемые в этом протоколе, уменьшают вероятность турбулентного кровотока и образования тромбов и приводят к улучшению показателей выживаемости. Этот метод дает ценную информацию для изучения иммунных реакций после трансплантации, таких как реперфузионное повреждение ишемии и отторжение трансплантата.
Кроме того, наша методика позволяет упростить посттрансплантатный мониторинг или повторную трансплантацию. Продемонстрировать эту процедуру будет доктор Вэнь Цзюнь Ли, эксперт-микрохирург в нашей лаборатории, который разработал эту технику. Подготовьте хирургическую область, сбрив волосы с груди и живота с помощью электрической бритвы.
Введите 100 единиц гепарина внутривенно в вену полового члена для мужчин или наружную яремную вену для мужчин и женщин. Поместите мышей в лежачее положение с передними конечностями над головой. Закрепите передние и задние конечности хирургическим скотчем и продезинфицируйте кожу 0,75% йода и 70% этанола.
Выполняют разрез для срединной лапаростернотомии от пупка до грудинного угла с последующим двусторонней торакотомией вдоль каждого реберного края. Сложите переднюю грудную стенку над шеей для полного обнажения средостения. Иссечение тимуса и обнажение внутригрудной нижней полой вены.
Для ретроградной перфузии вводят 1,5 миллилитра четырех градусов Цельсия в внутригрудную нижнюю полую вену с иглой, ориентированной преимущественно на трансплантат. Лигайте верхнюю полую вену со счетом 8-0 шелк накладывают шов и делят дистально. Повторите ретроградную перфузию, введя еще 1,5 миллилитра четырех градусов Цельсия через нижнюю полую вену.
Лигат нижней полой вены с помощью 8-0 шелк накладывают шов и делят дистально. Рассекать дугу аорты и ствол легочной артерии для сбора трансплантата и транссектировать обе дистально. Разложите легочные вены на задней поверхности сердца с помощью шелкового шва 6-0 и разделите дистально.
Выполните подготовку трансплантата, удалив донорское сердце из грудной полости. Поместите иссеченное сердце в пластиковый контейнер, наполненный гепаринизированным физиологическим раствором с четырьмя градусами Цельсия, на одну-две минуты. Переложите трансплантат на стерильную пластиковую колбу, наполненную льдом, для размещения манжеты.
Поместите манжету ангиокатетера длиной один миллиметр 20 калибра над легочной артерией для манжеты донора. Используя тонкие щипцы, аккуратно сложите края артерии обратно над манжетой. Закрепите сложенный сосуд на манжете с помощью нейлоновой завязки 10-0.
Храните донорское сердце в гепаринизированном физиологическом растворе или другом консервационном растворе при четырех градусах Цельсия. Подготовьте хирургическую область, сбрив волосы из шейной области с помощью электрической бритвы. Наносите стерильную немедикаментозную офтальмологическую мазь на глаза для предотвращения высыхания роговицы.
Поместите животное в лежачее положение с передними конечностями, прилегающими к телу, и головой, слегка повернутой влево. Закрепите передние и задние конечности хирургическим скотчем. Дезинфицируйте кожу 0,75% йода и 70% этанола.
Сделав узи средней линии шейки матки от нижней нижней челюсти к грудине, переремонтируйте правую грудино-ключично-сосцевидную мышцу. Иссечь правую долю подчелюстной железы, чтобы создать пространство для имплантации трансплантата. Завяжите скользящий узел над проксимальной наружной яремной веной с помощью шелкового шва 6-0.
Лигировать дистальную наружную яремную вену и прилегающие ветви с помощью 8-0 шелковый шов. Зашить под вену и накрыть марлей. Сделайте поперечный разрез через переднюю стенку наружной яремной вены.
Поместите нейлоновый шов 10-0 через край проксимальной наружной яремной вены и подлежащую ткань, чтобы закрепить вену во время введения манжеты. Лигат дистальной правой общей сонной артерии с помощью 8-0 шелковый шов просто уступает каротидному бифуркации. Завяжите скользящий узел над проксимальной общей сонной артерией с помощью шелкового шва 6-0.
Трансекция артерии дистально между швами. Затем поместите манжету ангиокатетера длиной 0,6 миллилитра 24 калибра над правой общей сонной артерией реципиента. Используя тонкие щипцы, аккуратно сложите края артерии обратно над манжетой.
Закрепите сложенный сосуд на манжете с помощью нейлоновой завязки 10-0. Поместите донорское сердце выше правой шейной области. Капайте холодный физиологический раствор на сердечный трансплантат каждые несколько минут во время имплантации.
Поместите нейлоновый шов 10-0 через край донорской аорты и через поверхностный прикус подлежащей ткани, чтобы закрепить трансплантат на месте. Промыть донорскую аорту 0,5 миллилитрами 0,9% гепаринизированного физиологического раствора. Вставьте общую манжету сонной артерии реципиента в донорскую аорту.
Обезопасьте анастомоз со счетом 8-0 шелковый галстук. Снимите анкерный шов аорты. Обезвреживание наружной яремной вены путем промывки наружной яремной вены реципиента 0,5 миллилитрами 0,9% гепаринизированного физиологического раствора.
Выполните анастомоз легочной артерии, вставив манжету легочной артерии донора в наружную яремную вену реципиента и закрепив 8-0 шелковый галстук. Снимите шов якоря наружной яремной вены и перерезайте оставшуюся заднюю стенку наружной яремной вены, чтобы освободить трансплантат от подлежащей ткани. Убедитесь, что трансплантат правильно ориентирован без изгиба или скручивания анастомоза.
Отпустите скользящие узелки на внешней яремной вене реципиента, а затем на общей сонной артерии, чтобы инициировать реперфузию сердечного трансплантата. Метод, продемонстрированный в этом протоколе, показал выживаемость примерно 97% Это потенциально может быть связано с более крупной манжетой 20 калибра, размещенной на легочной артерии донора, чтобы обеспечить достаточный возврат кровотока к реципиенту. Кроме того, выравнивание кровотока с размещением манжет в настоящей технике сводит к минимуму риск тромбоза и анастомотической турбулентности.
Среднее время работы реципиента составило примерно 37 минут при среднем времени холодовой ишемии 20 минут. Для исследований выживаемости сердечные трансплантаты оценивались ежедневно путем прямой визуализации и цифровой пальпации сердцебиения. Прижизненная двухфотонная визуализация была выполнена на ранней стадии после трансплантации для оценки трафика лейкоцитов.
Важно проверить, что трансплантат правильно расположен и ориентирован перед закрытием кожи, чтобы предотвратить скручивание. Этот метод может быть использован в моделях повторной трансплантации для идентификации резидентных иммунных клеток в трансплантатированных трансплантатах, которые опосредуют аллоиммунные реакции.
