Подход к моделированию инсульта фототромбоза может подходить для клеточных и молекулярных исследований кортикальной пластичности из-за ограниченных границ и гибкости для индуцирования травмы в различных областях коры. Три принципиальных преимущества отличают модель фототромбоза от других моделей инсульта: возможность направить поражение в нужную область, его высокая воспроизводимость и низкая смертность. Правильное дозирование бенгальской розы имеет решающее значение для успеха и стабильности модели.
Результаты зависят от технических характеристик, таких как мощность лазера, время перекрестного применения и оптический шиллинг незатронутой коры. Начинают с растворения бенгальской розы в 0,9% физиологическом растворе для конечной концентрации 10 миллиграмм на миллилитр. Тщательно стерилизуйте все инструменты с помощью горячего свинцового стерилизатора и дезинфицируйте все поверхности до и после операции с помощью микробного дезинфицирующего спрея.
Подготовьте шприц, наполненный физиологическим раствором, чтобы сохранить область операции гидратированной, и подготовьте анестезионный газ. Измерьте массу тела мыши, чтобы скорректировать дозу бенгальской розы, которую нужно вводить. Установите связанную с обратной связью управляемую грелку для поддержания температуры тела мыши.
После того, как мышь будет полностью обезболена и зафиксирована в стереотаксической рамке, осторожно вставьте ректальный зонд, чтобы контролировать температуру тела мыши на протяжении всей хирургической процедуры. Нанесите глазную мазь Dex panthenol на оба глаза и очистите кожу и окружающий мех дезинфицирующим средством. Используйте ножницы, чтобы сделать один продольный разрез длиной от двух до двух с половиной сантиметров и втянуть, чтобы обнажить череп.
Используйте вату, чтобы аккуратно удалить позузу и найти корональные швы. Наденьте защитные очки при включении 561-нанометрового лазера и отметьте плюс три миллиметра влево, затем выключите лазер и зацепите наклейку с отверстием диаметром четыре миллиметра в отмеченных координатах. Вводят мыши внутрипарименную розу бенгальскую.
Поместите лазерный луч на расстояние от четырех до пяти сантиметров от черепа. Включите лазер и осветите череп в течение 20 минут. Регидратировать череп, применяя две капли 0,9% физиологического раствора.
После наложения швов на рану поместите мышь в восстановительную камеру при 37 градусах Цельсия, чтобы восстановиться после анестезии. Через час поместите мышь обратно в клетку в комнату с контролируемой температурой. Кристаллическое фиолетовое пятно для последовательных корональных участков мозга использовалось для анализа входа в объем инфаркта после 24 часов индукции инсульта.
Изменчивость этой модели инсульта была низкой, а средний объем инфаркта составлял 29,3 кубических миллиметра, что составляет 23% одного полушария мозга. Поражение фототромбоза вызвало умеренное и долгосрочное сенсорно-моторное нарушение, обозначенное композитной нейробаллойтом. У животных, перенесших инсульт, произошло значительное изменение нейробиологических показателей через 24 часа после операции.
Несмотря на то, что различия сохранялись, мышей с инсультом со временем улучшались. У мышей, подвергаемых розовой бенгальской плюс освещению, масса тела и температура тела снизились через 24 часа после операции. Однако в течение трех дней после операции наблюдалось восстановление.
Ишемические изменения были подтверждены с помощью лазерной визуализации. Результаты показали, что роза бенгальская или лазерное освещение сами по себе не вызывали поражения, в то время как одновременное применение обоих генерировало круглую гипоперфузированную область, окруженную узкой олигомерной зоной. Кристаллическое фиолетовое и туннельное окрашивание для оценки объема инфаркта через 24 часа после операции не выявило повреждения тканей ни при операции розовой бенгалии, ни при операциях лазерного освещения.
С другой стороны, роза бенгальская плюс лазерное освещение генерировали хорошо разграниченное поражение. Важно измерить массу тела животного, чтобы скорректировать инъекцию бенгальской розы. Правильное состояние коронерных переключателей важно для того, чтобы вызвать постоянное поражение между животными.
Поскольку этот протокол оставляет череп нетронутым и может даже выполняться через краниальные окна, его можно комбинировать с широкоугольной или многофотонной визуализацией in vivo.
