Этот протокол является надежной и воспроизводимой моделью эндотоксемии, в которой физиологические и молекулярные параметры могут быть оценены многократно. Этот подход может помочь ответить на вопросы в исследованиях сепсиса. Хотя наша модель не заменяет эксперименты на животных, она уточняет модели сепсиса путем непрерывной седации и уменьшает количество животных путем повторного отбора проб.
Новички могут бороться с введением артериальных и венозных катетеров, но для освоения этих методов требуется лишь ограниченная подготовка. Визуализация всей экспериментальной установки облегчает исследователям настройку или адаптацию своих моделей, чтобы более точно имитировать ситуацию в отделении интенсивной терапии. Начните с переноса обезболенного животного на нагревательный коврик.
Поддержание температуры тела между 36,5 и 37 градусами Цельсия. Убедитесь, что животное самопроизвольно дышит, обеспечив кислород носовым конусом. Подтверждают уровень анестезии отсутствием рефлекса защемления пальца ноги перед установкой трахеостомии и артериальных и венозных катетеров.
Используйте мазь для защиты глаз. Подготовьте стерильные хирургические инструменты и катетеры вместе с контролем давления и насыщения кислородом для достаточной оксигенации. Наложите жгут на проксимальный хвост крысы, чтобы облегчить венозный доступ и трижды продезинфицируйте хвост спиртом.
Введите внутривенный катетер 26-го калибра в одну из двух боковых хвостовых вен, избегая инъекции воздуха. Развяжите жгут после установки внутривенного катетера и зафиксируйте внутривенный катетер на месте с помощью клейкой ленты. Подключите шприцевые насосы с трехходовыми запорными кранами к внутривенному доступу для непрерывного применения жидкости и лекарств.
Начните трахеостомию с бритья передней области шеи животного, а затем трижды продезинфицируйте бритую кожу раствором повидон йода. Выполните двухсантиметровый продольный разрез с помощью лезвия скальпеля No 10. Втягивайте кожу 2-0 шелковыми швами.
Затем тупо подготовили гортань и трахею к вскрытию хирургическими ножницами. Вставьте стерильную канюлю трахеи в трахею, стараясь не проникать слишком глубоко, чтобы избежать односторонней вентиляции. Закрепите канюлю на месте с помощью шелкового шва 2-O, а затем подключите канюлю к вентилятору для вентиляции под давлением или объемом.
Определите протоколы замены жидкости, протоколы применения сосудосуживающих средств и критерии аборта перед началом эксперимента. Продезинфицируйте хвост крысы три раза раствором повидона йода, а затем срежьте кожный круг на один сантиметр продольно с вентральной стороны с помощью скальпеля, следя за тем, чтобы не разрезать слишком глубоко, чтобы избежать травмы хвостовой артерии. Используйте хирургический микроскоп, чтобы тщательно обнажить артерию.
Срежьте фасцию, окружающую артерию, хирургическими микроножами. Затем обложите дистальную часть артерии, выполнив проксимальный 6-0 шелковый шов, но не затягивайте шелк. Введите катетер 26-го калибра в артерию между дистальным и проксимальным шелковым швом, а затем затяните проксимальный шелковый шов, чтобы зафиксировать катетер на месте.
Подключите катетер к датчику давления, чтобы обеспечить непрерывное измерение артериального давления. Кроме того, поместите трехсторонний запорный кран между катетером, подключенным к датчику давления, и катетером 26-го калибра для забора артериальной крови. После того, как животное достигло устойчивого состояния, индуцируется сепсис путем инъекции ЛПС и сбора образцов крови.
Замените потерю жидкости из образцов крови раствором Рингера в соотношении один к четырем, избегая инъекции воздуха в любое время, чтобы предотвратить воздушную эмболию. Среднее артериальное давление остается стабильным у животных со стимуляцией ЛПС и без нее. У животных, получавших ЛПС, развиваются характеристики сепсиса, такие как избыток отрицательного основания.
У животных, получавших ЛПС, также развилась сильная воспалительная реакция, которая измерялась цитокинами плазмы, такими как хемоаттрактант-белок-1, моноцитарный хемоаттрактант-белок-1 и интерлейкин-6. При попытке этого протокола не забудьте предварительно определить схемы жидкости и вазопрессора, а также определить критерии прекращения, чтобы получить надежные и воспроизводимые данные исследований. Этот протокол может быть адаптирован к другим моделям сепсиса.
Таким образом, на исследовательский вопрос дается ответ с наиболее подходящим подходом и в соответствии с принципами снижения, уточнения, замены благополучия животных.
