При измерении индивидуальных различий в циркадных сроках, предпочтениях и поведении существует непоследовательная терминология и методология. Этот протокол сочетает в себе методы золотого стандарта для классификации циркадных фенотипов и проведения диурнал-тестирования производительности. Ну, главное преимущество этого протокола в том, что мы можем точно оценить циркадные фенотипы, глядя как на циркадную фазу, так и на поведение сна, и это можно сделать с людьми в их домашней среде.
Демонстрацией процесса участника будет Шерил Ишервуд из Университета Суррея. Пригласите участников, которые отвечают критериям включения, принять участие в первом собрании. И получить письменное информированное согласие от всех участников, заинтересованных в участии в эксперименте.
Попросите участников заполнить анкету Munich ChronoType, в которой оцениваются индивидуальные различия во сне, переменных пробуждения и освещенности на работе и в свободные дни. Для физиологического сбора образцов предварительно маркировать семимилитровые полипропиленые трубки сбора с идентификационный номер участника, утром или вечером, а затем индивидуальный номер выборки. Различные цветные этикетки также могут быть использованы для утренних и вечерних пробных трубок, чтобы помочь различать образцы.
Подготовь лист записей о сборе проб как для утренних, так и для вечерних протоколов, чтобы позволить участникам приутомить образцы после их взятия, включая идентификационный номер участника, дату получения сезонной информации и место для расчета периода фотографии. Крайне важно, чтобы универсальное время использовалось для обеспечения того, чтобы не было .m и .m.
коды времени. Продемонстрируйте, как собрать образцы слюны, информируя участников о том, что необходимо приобрести утренние образцы сразу после пробуждения перед вставать с постели, и что вечерние образцы должны быть приобретены в тусклом свете, предпочтительно, красный свет. Исследователи должны измерить это, если это возможно.
Поручите участнику собрать образцы в свободный день, когда он сможет лечь спать и проснуться в предпочтительное время, без необходимости сигнализации. Дайте каждому участнику монитор активности запястья, или актиграф, носить, по крайней мере две недели, чтобы собрать отдыха и активности моделей, и световые данные в течение всего периода исследования. Установите каждый актиграф для сбора данных актиграфии для анализа отдыха и активности, устанавливая параметры в соответствии с тем, что требуется.
Проинструктируйте участников, как использовать актиграфы, гарантируя, что они носят его на не доминирующем запястье, и предотвращая рукава от покрытия устройства, чтобы световые данные, которые будут собраны. В сочетании с актиграфией, и для облегчения сна, после анализа, полученных из актиграфических данных, дать каждому участнику дневник сна, который будет завершен на ежедневной основе. Для кортизола пробуждения ответ утром выборки сбора, участники собирают образцы после пробуждения в то же время в постели в надлежащим помечены проб трубы, каждые 15 минут в течение первого часа, и оценка каждые 30 минут в течение следующих одного-двух часов.
Когда все образцы были собраны, участники должны хранить свои образцы в морозильной камере при температуре минус 20 градусов по Цельсию до их сбора исследовательской группой. Для тусклого света мелатонина начала, участник должен сидеть в помещении при тусклом свете, и собирать образцы слюны в соответствующем флаконе каждые 30 минут от трех до четырех часов до обычного сна до одного-двух часов после обычного сна. Участник должен также зафиксировать время, затхаемое на каждый образец.
Там, где это возможно, исследователи должны измерять условия освещения для мониторинга интенсивности и спектрального состава. Для вечернего отбора проб важно, чтобы участники понимали важность сохранения сидячих помещений в условиях тусклого света. Участники могут пользоваться туалетом или употреблять напиток без кофеина между образцами, если они снова сидят в течение 15 минут до того, как будет собран следующий образец.
Убедитесь, что все остальные комнаты имеют одинаковые условия освещения, так что участник остается в тусклом свете, предпочтительно красный свет, в течение периода отбора проб. Если пища потребляется между образцами, участники должны вымыть рот водой за 15 минут до сбора следующего образца. После того, как все образцы были собраны, участники должны хранить свои образцы в морозильной камере при температуре минус 20 градусов по Цельсию до их сбора исследовательской группой.
Диурнал производительность тестирование может быть проведено в домашних условиях или в лаборатории, и должны быть организованы в соответствии с гипотезой исследования на основе количества точек времени, исследуемых в определенное время. После извлечения образцов слюны и дневника сна, извлечь ежедневное время сна и просыпаться раз из дневников сна, и ввести эти данные в программное обеспечение производителя для получения актиграфических переменных, имеющих отношение к исследованию. Чтобы определить концентрацию мелатонина и кортизола в образцах слюны участников в каждый момент времени, выполните радио иммуноанализ с образцами каждого участника в соответствии со стандартными протоколами.
Рассчитайте отдельные DLMOs как точки времени, в которых концентрации мелатонина превышают два стандартных отклонения от трех базовых первоначальных коллекций слюны. Рассчитайте пик кортизола как время самой высокой концентрации кортизола, зарегистрированной во время утренней реакции пробуждения кортизола. Переменная должна быть выделена как нулевая, если она находится в ранней категории циркадного фенотипа, одна, если она находится в промежуточной категории циркадного фенотипа, и две, если она находится в поздней категории циркадного фенотипа.
Рассчитайте общий циркадный балл фенотипа из пяти собранных переменных. На основе этого балла можно также определить подкатеголии, указанные в таблице. Все участники, классифицированные как ранние циркадные фенотипы, имели оценку от нуля до одного.
И все поздние участники циркадного фенотипа имели баллы от восьми до 10. Чтобы подтвердить результаты этого репрезентативного эксперимента, средние показатели группы были сопоставлены для каждой циркадной переменной фенотипа. Другие переменные сна, включая продолжительность сна, эффективность и задержку, не сильно отличались между группами.
Исправленный средний сон в свободные дни был значительно коррелирует с тусклого света мелатонина начала, пиковое время кортизола пробуждения ответ, начало сна, и время пробуждения. Эти данные свидетельствуют о том, что различные группы циркадных фенотипов продемонстрировали явные различия в начале сна, компенсированном времени, а также в их физиологических переменных. Значительные дивральные вариации наблюдались на уровне всей группы для Каролинской шкалы сонливости и задачи психомоторной бдительности.
Когда каждая группа была проанализирована отдельно, субъективная сонливость показала значительные дивральные вариации, с ECPs отчетности высокой сонливости в вечернее время, и LCPs'highest сонливость в первой половине дня. Для психомоторной бдительности производительность, значительные дивральные изменения были найдены в LCPs, но не в ECPs. Важно четко объяснить каждый шаг протокола и убедиться, что участник понимает во время собеседования по настройке, чтобы максимизировать соответствие требованиям исследования.
После того, как участники классифицируются на циркадные фенотипы, элемент тестирования производительности может быть изменен, изменение сроков, масштабирование за счет увеличения точек времени, или изменены, с помощью различных задач, в зависимости от целей исследования. Этот протокол может быть использован в любом исследовании, требующем точной и тщательной оценки циркадного фенотипа в качестве инструмента скрининга для включения и исключения критериев, а также для контроля циркадного фенотипа во время чувствительных к времени исследований. Этот подход обеспечивает подробный метод для объединения золотого стандарта биологических маркеров фазы с объективными и субъективными сна для определения отдельных циркадных фенотипов.
