pdECM биоинк может обеспечить полезную микроокнивиатуру для островков поджелудочной железы с использованием тканевых компонентов и архитектуры и имеет оптимальные неврологические свойства, которые снижают смертность клеток и увеличивают их печатаемость. Основным преимуществом этой техники является то, что ткани конкретных состав может быть сохранен в pdECM биоинк содействия конструктивному перекрестного стебля между 3D поджелудочной ткани конструкций и инкапсулированных островков. Развитие инкапсуляции островков в pdECM bioink может быть применено к изготовлению трансплантируемых конструкций ткани поджелудочной железы для лечения диабета типа 1.
Это биоинк может быть использовано для расширения применения трансплантируемых конструкций, а также моделей тканей in vitro для лечения диабета, связанных с диабетом осложнений и рака поджелудочной железы. Для децеллюляризации образца ткани замороженной свиной поджелудочной железы используйте терку, чтобы нарезать замороженную поджелудочную железу толщиной в один миллиметр и перенести 50 граммов нарезанной ткани в пластиковый контейнер на 500 миллилитров. Вымойте ткань 300 миллилитров дистиллированной воды при четырех градусах Цельсия на цифровом орбитальном шейкере при 150 вращениях в минуту в течение примерно 12 часов.
Когда мутная вода исчезнет, замените воду 400 миллилитров 1%Triton-X 100 в PBS в течение 84 часов. В конце моющего средства лечения, инкубировать ткани с 400 миллилитров изопропанола в течение двух часов, чтобы удалить оставшийся жир из поджелудочной железы, а затем 24-часовой мыть в 400 миллилитров PBS. В конце стирки, стерилизовать децеллюляризованной ткани с 400 миллилитров 0,1% перакетической кислоты в 4%ethanol в течение двух часов до мытья образца с 400 миллилитров свежего PBS в течение шести часов, чтобы удалить любые остаточные моющего средства.
В конце стирки используйте типсы для переноса кусочков ткани в 50-миллилитровую коническую трубку и заморозить образец при температуре минус 80 градусов по Цельсию в течение одного часа. Затем накройте коническую трубку салфеткой без ворса, закрепленной резинкой, и олиофилизируйте децеллюляризованную ткань при температуре минус 50 градусов по Цельсию в течение четырех дней. Чтобы подготовить биоинк, перенесите 200 миллиграммов лиофилизированных pdECM в новую 50 миллилитровую коническую трубку и добавьте 20 миллиграммов пепсина и 8,4 миллилитров 0,5 молярной уксусной кислоты в образец ткани.
Затем поместите магнитный бар перемешать в трубку в течение 96-часового перемешивания инкубации на 300 оборотов в минуту. В конце инкубации используйте 40-метровый клеточный ситечко и трубку с положительным смещением, чтобы отфильтровать раствор в новую трубку на льду, чтобы отфильтровать любые непереваренные частицы и добавить в трубку один миллилитр 10X PBS. После вихревого использования гидроксида натрия для регулировки рН раствора до семи.
Чтобы подготовить биоинк для 3D-клеточной печати конструкции поджелудочной железы с узорчатой структурой, испачкать одну алицит биоинку pdECM с 0,4%Trypan Blue и одну алицит с раствором Rose Bengal в соотношении 1 к 20. Затем используйте пипетку положительного смещения, чтобы аккуратно смешать каждый раствор биоинка со средним раствором подвесного островка в соотношении три к одному с окончательной концентрацией 1,5%биоинка и плотностью клеток в три раза от 10 до трех островковых эквивалентов на миллилитр. Для 3D-клеточной печати конструкций ткани поджелудочной железы на основе нордиорий, загрузите каждую смесь островков биоинка в отдельные стерилизованные шприцы, оснащенные 25 калибровочных соплами и 3D печатью, каждая биоинка при оптимизированных условиях печати при 18 градусах Цельсия в виде решетки с чередующимися линиями синего и красного.
Чтобы связать биоинк, поместите печатную конструкцию в инкубатор культуры 37 градусов по Цельсию и 5%carbon dioxide cell culture в течение 30 минут. Затем погрузите печатную конструкцию в RPMI 1640 средний дополнен 10%fetal бычьей сыворотки и 100 единиц на миллилитр пенициллина и стрептомицина. После процесса децеллюляризации удаляется 97,3% двухместной ДНК, а репрезентативные внеклеточные матричные компоненты, такие как коллаген и гликозаминогликаны, остаются на уровне 1278,1% и 96,9% по сравнению с родной ткани поджелудочной железы соответственно.
В этом репрезентативном анализе, pdECM bioink выставлены стрижки истончение поведение со значением около 10 паскаль в секунду при скорости стрижки один в секунду, указывая, что биоинк продемонстрировали соответствующие реологические характеристики для экструзии через сопло. Кроме того, сложный модуль биоинки начал увеличиваться, когда температура достигла 15 градусов по Цельсию и быстро увеличилась, когда температура была сохранена на 37 градусов по Цельсию, что указывает на переход раствора. Динамический G prime и G двойной премьер pdECM bioink были исследованы при физиологически соответствующих температурах, чтобы обеспечить его стабильность после процесса печати, что привело к достижению стабильного модульного под условием развертки частоты.
Используя многоголовую систему печати, различные типы 3D конструкций могут быть изготовлены, как попродемонстрировано с помощью разработанного pdECM, демонстрирующего универсальность pdECM с целью 3D биопечати для гармонизации двух или более типов живых тканей в тканевой договоренности. Будьте нежны при смешивании биоинк с клетками, чтобы избежать гибели клеток и образования пузырьков, как наличие пузырьков снижает разрешение печати и снижает жизнеспособность клеток. Функциональность инкапсулированных островков поджелудочной железы в конструкциях 3D-ткани поджелудочной железы может быть оценена с помощью окрашивания иммунофторесценции или теста на толерантность к глюкозе.
Этот метод биоинтринка pdECM и 3D биопечати потенциально может быть использован для развития функциональных конструкций тканей поджелудочной железы в области тканевой инженерии. Исследователи должны носить соответствующее средства индивидуальной защиты для предотвращения травм при обращении с острой терке и реагентами.
