pdECM bioink יכול לספק microenvironment מועיל עבור איים בלבלב באמצעות רכיבים ספציפיים לרקמות וארכיטקטורה ויש לו תכונות נוירולוגיות אופטימליות להפחית מקרי מוות של תאים ולהגדיל את יכולת ההדפסה שלהם. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי הרכב ספציפי לרקמות ניתן לשמר בתוך bioink pdECM קידום crosstalk בונה בין מבני רקמת הלבלב 3D ואיונים אנקפסולציה. הפיתוח של אנקפסולציה איון ביונק pdECM ניתן להחיל על ייצור של מבנים רקמת הלבלב להשתלה לטיפול בסוכרת מסוג אחד.
Bioink זה יכול לשמש כדי להרחיב את היישום של מבנים להשתלה, כמו גם מודלים רקמת במבחנה לסוכרת, סיבוכים הקשורים לסוכרת וסרטן הלבלב. לדקלולריזציה של דגימת רקמת לבלב פורצ'ין קפואה, השתמש במגררת כדי לחתוך את הלבלב הקפוא לחתיכות בעובי מילימטר אחד ולהעביר 50 גרם של הרקמה הפרוסה למיכל פלסטיק 500 מיליליטר. לשטוף את הרקמה עם 300 מיליליטר של מים מזוקקים בארבע מעלות צלזיוס על שייקר מסלולית דיגיטלית ב 150 סיבובים לדקה במשך כ 12 שעות.
כאשר המים מעוננים נעלמים, להחליף את המים עם 400 מיליליטר של 1% טריטון-X 100 ב PBS במשך 84 שעות. בסוף הטיפול בחומרי ניקוי, דגירה הרקמה עם 400 מיליליטר של isopropanol במשך שעתיים כדי להסיר את השומן הנותר מן הלבלב, ואחריו לשטוף 24 שעות ב 400 מיליליטר של PBS. בסוף הכביסה, חיטוי הרקמה decellularized עם 400 מיליליטר של 0.1% חומצה peracetic ב 4%אתנול במשך שעתיים לפני שטיפת המדגם עם 400 מיליליטר של PBS טרי במשך שש שעות כדי להסיר כל חומר ניקוי שיורית.
בסוף הכביסה, השתמש במטליות כדי להעביר את חתיכות הרקמה לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר ולהפשיר את המדגם במינוס 80 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת. לאחר מכן מכסים את הצינור חרוט עם לנגב ללא מוך קבוע עם גומייה lyophilize את הרקמה decellularized במינוס 50 מעלות צלזיוס במשך ארבעה ימים. כדי להכין את bioink, להעביר 200 מיליגרם של pdECM מיובש הקפאה לתוך צינור חרוט חדש 50 מיליליטר ולהוסיף 20 מיליגרם של פפסין ו 8.4 מיליליטר של 0.5 חומצה אצטית טוחנת לדגימה רקמה.
לאחר מכן מניחים בר ערבוב מגנטי לתוך הצינור עבור דגירה ערבוב 96 שעות ב 300 סיבובים לדקה. בסוף הדגירה, השתמש מסננת תאים 40 מיקרומטר פיפטה תזוזה חיובית כדי לסנן את הפתרון לתוך צינור חדש על הקרח כדי לסנן את כל החלקיקים מעוכל ולהוסיף מיליליטר אחד של 10X PBS לצינור. לאחר מערבולת, השתמש נתרן הידרוקסיד כדי להתאים את ה- pH של הפתרון לשבע.
כדי להכין את הביוינק להדפסת תא תלת-ממדי של מבנה לבלב עם מבנה בדוגמת, הכתם עליקוט אחד של ביונק pdECM עם 0.4% טריפאן כחול ואליקוט אחד עם פתרון רוז בנגל ביחס של 1 עד 20. לאחר מכן השתמשו בפיגטת תזוזה חיובית כדי לערבב בעדינות כל תסיסה ביו-ינקית עם תסיסה בינונית של איון מושעה ביחס של 3 ל-1 לריכוז ביו-ינק סופי של 1.5% וצפיפות תאים של פי 3 פי 10 לשלושת איון שווה ערך למיליליטר. להדפסת תאים תלת-ממדיים של מבני רקמת לבלב רב-חומרית, טען כל תערובת איון ביו-ינק למזרקים מעורקים בודדים המצוידים בזריריים של 25 מד והדפס תלת-ממדי כל ביו-ינק בתנאי הדפסה אופטימליים ב-18 מעלות צלזיוס בצורת סריג עם קווים לסירוגין של כחול ואדום.
כדי להצליב את הביו-ינק, הנח את המבנה המודפס ב-37 מעלות צלזיוס ובאינקובטור לתרבות תאים דו-חמצניים של 5% במשך 30 דקות. לאחר מכן לטבול את המבנה המודפס לתוך RPMI 1640 בינוני בתוספת 10% סרום שור עוברי ו 100 יחידות למיליליטר של פניצילין וסטרפטומיצין. לאחר תהליך הדקלולריזציה, 97.3% מהדנ"א הדו-גדילי מוסר ורכיבי המטריצה החוץ-תאית הייצוגיים כגון קולגן וגליקוזמינוגליקנים נשארים ב-1278.1% וב-96.9% בהשוואה לזה של רקמת הלבלב המקומית בהתאמה.
בניתוח מייצג זה, bioink pdECM הפגין התנהגות דילול רזה עם ערך של כ 10 פסקל לשנייה בקצב הגימה של אחד לשנייה המציין כי bioink הדגים את המאפיינים הרולוגיים המתאימים עבור שאקסטרוזה דרך חריר. יתר על כן, המודולוס המורכב של הביונק החל לעלות כאשר הטמפרטורה הגיעה ל -15 מעלות צלזיוס ועלתה במהירות כאשר הטמפרטורה נשמרה ב 37 מעלות צלזיוס המציין את המעבר סול ג'ל של הפתרון. פריים G דינמי G ו G פריים כפול של bioink pdECM נחקרו בטמפרטורות רלוונטיות מבחינה פיזיולוגית כדי להבטיח את יציבותה לאחר תהליך ההדפסה וכתוצאה מכך השגת מודולוס יציב תחת מצב לטאטא את התדירות.
באמצעות מערכת הדפסה מרובת ראשים, סוגים שונים של מבנים תלת-ממדיים יכולים להיות מפוברקים כפי שהוכח באמצעות pdECM המפותח המדגים את הרבגוניות של pdECM לצורך הדפסה ביולוגית תלת-ממדית כדי ליצור הרמוניה בין שני סוגים או יותר של רקמות חיים בסידור דמוי רקמות. להיות עדין בעת ערבוב bioink עם התאים, כדי למנוע מוות של תאים היווצרות בועה כמו נוכחות של בועות מוריד את רזולוציית ההדפסה ומפחית את הכדאיות התא. הפונקציונליות של איי הלבלב אנקפסולציה בתוך מבני רקמת הלבלב 3D ניתן להעריך על ידי כתמי immunofluorescence או בדיקת סובלנות גלוקוז.
זה bioink pdECM וטכניקת הדפסה ביולוגית 3D יכול לשמש פוטנציאל לפיתוח של מבנים רקמת הלבלב תפקודית בתחום של הנדסת רקמות. החוקרים צריכים ללבוש את ציוד המגן האישי המתאים כדי למנוע פציעות בעת טיפול מגררת חדה רייגנטים.
