Мы реализуем microCT с фосфотунгоновой кислотой для повышения контрастности мягких тканей в неинвазивном расследовании человеческой orbicularis сохраняя связки, деликатная структура в области орбиты. Этот протокол был оптимизирован, чтобы помочь исследователям в неинвазивном расследовании мягких тканей человека и прост в работе с разумной суммой расходов. Чтобы получить образцы, сначала используйте цветной карандаш, чтобы указать область резки на коже для сбора образцов.
Подтвердите, что отмеченная линия распространяется medially на медиальный кампус, боковой к боковому кампусу, выше к превосходной границе нижнего века, и низко на один сантиметр ниже линии от орбитального обода. Далее, используйте лезвие, чтобы сократить ткани лица вдоль отмеченной линии, убедившись, что разрез достаточно глубок для кончика лезвия, чтобы коснуться кости. Собранный образец должен включать кожу, подкожные ткани, мышцы, жир и периостеум.
После сбора, немедленно исправить образец в 10%формалин в течение пяти-семи дней при комнатной температуре. В конце периода фиксации нарежьте образец на три пяти-семимиллиметровые кусочки толщиной. Используйте иглу и черную нить, чтобы сшить суперолатерную сторону каждого образца таким образом, чтобы направление образца можно было определить в более поздних точках времени.
Обезвоживаемый образец в восходящей серии концентрации этанола в течение одного дня за концентрацию, оставляя образцы в 70%этанола раствора, пока они не окрашивания. За неделю до запланированного микрокомпьютерного томографии добавьте 2,1 грамма ПТА в 210 миллилитров 70%этанола и поместите раствор на шейкер при 55-60 вращениях в минуту. Приготовьте три 70-миллилитровых пластиковых контейнера для каждого нарезанного куска.
Когда краситель растворился в спиртовом растворе, заполните контейнеры раствором. Поместите один образец в каждый контейнер 1%PTA, и встряхните образцы на 55 до 60 вращений в минуту в течение пяти-семи дней. Когда окрашивание завершено, хранить образцы в свежем 70% этанола в течение одной недели, чтобы подготовиться к сканированию.
Для сканирования microCT оберните образцы в Parafilm, чтобы предотвратить высыхание и поместите образец на поднос сканера. Установите напряжение источника сканера до 70 киловольт, исходный ток до 114 микроампер, алюминиевый фильтр до 0,5 миллиметра, размер пикселя изображения до 20 квадратных микрометров, пиксели до 2, 240 на 2 240, воздействие 500 миллисекунд и шаг вращения до 0,3 градуса. Затем инициируем сканирование.
Когда сканирование завершено, откройте программное обеспечение для реконструкции и выберите Действия и Открытый набор данных для запуска отсканированных файлов. Выберите вкладку «Настройки» и установите уменьшение артефактов кольца до семи и коррекцию затвердевания луча. Чтобы начать реконструкцию, выберите Старт.
Окончательные данные будут храниться в назначенной папке. В конце реконструкции откройте программное обеспечение для рестимизации файлов и выберите набор исходных данных для запуска восстановленных файлов. Выберите jpg на вкладке набор данных Destination и выберите опцию 1/2 Resizing с параметром качества No interpolation Затем отрегулируйте слайд-бар до 100 в вкладке сжатия изображения и начните преобразование.
Для 3D-реконструкции откройте программное обеспечение для рендеринга громкости 3D и выберите данные об объемах действий и нагрузки. Чтобы настроить уровень яркости и контрастности, измените функцию передачи формы в гистограмме во вкладке Редактор функций передачи. Далее выберите параметры и освещение, а также выберите значки Shadows и Surface Lighting для достижения реалистичного тональности моделирования.
Нажмите и перетащите, и правой кнопкой мыши и перетащить, чтобы переместить и повернуть 3D-изображение, чтобы найти лучшее представление, прокрутки, чтобы увеличить или выйти по желанию. Нажмите Shift и перетащите, чтобы сдвиньте место для просмотра секционных изображений. Включите значок Света и отрегулируйте планку показаний освещения, чтобы найти лучшее освещение для просмотра, затем выключите значок Light и закройте вкладку Lighting.
Во вкладке Параметры выберите Show и Clipping Box, чтобы скрыть поле для окончательного изображения. Затем выберите Действия и сохранить изображение для хранения изображения. Эта детальная реконструкция ORL была достигнута microCT с подготовкой PTA, как попродемонстрировано, что позволяет визуализировать связки фибромосудистой структуры, простирающейся косо между дермой и периостеем.
В корональной зрения, количество и сложность волокон увеличивается с боковой стороны. В горизонтальном виде наблюдается сложная сетка с беседчатым образованием. В сагиттальной точки зрения толщина волокон ORL уменьшается ниже.
В целом, это многонаправлениюное наблюдение доказывает, что ORL состоит из многослойной сетки непрерывных пластин с вариациями в количестве и толщине волокон в зависимости от их расположения. Когда продолжительность окрашивания недостаточна по сравнению с объемом образца, окончательное изображение может включать пустое отверстие в центральной области образца. Другие агенты, кроме PTA могут быть использованы и различные агенты имеют различные достоинства или окрашивания особенности интересов.
Таким образом, полезно оптимизировать область окрашивания в соответствии с вашим экспериментом.
