Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области легочных исследований, таких как те, которые связаны с терапией острой и хронической конечной стадии заболевания легких. Основным преимуществом этой методики является то, что она облегчает запуск молекулярных и патологических механизмов повреждения мультиохоных органов при длительной экстракорпоральную мембранную оксигенацию в качестве спасительной процедуры. В чистых, нестерильных условиях используйте хирургическое лезвие и рассеченный микроскоп, чтобы ввести три фенестрации в дистальную треть двух французских полиуретановых катетеров под 16-х увеличением.
Затем поместите канюлю оттока в грунтовочное раствор, включите перистальтический насос для заполнения экстракорпоральной мембранной оксигенации, или ECMO-машины, для грунтовки цепи со скоростью одного миллиметра в минуту. Через 30 минут добавьте 0,5 литра в минуту 100%-ного кислорода к оксигенатору и подтвердите отсутствие реакции на щепотку ноша в обезболивающей взрослой мыши. После нанесения мази на глаза животного сделайте четырехмиллиметровый боковой разрез кожи на левой стороне шеи, чтобы визуализировать яремную вену, и используйте микро-миппы и ватные тампоны для дальнейшего разоблачения сосуда.
Используйте 8-0 шелковый шов, чтобы ligate дистальный конец открытой вены, и место скольжения узел на проксимальной конце. Инсизовать переднюю стенку вены с микросхемами, и вводить 2,5 международных единиц на грамм гепарина в яремной вены через 26-го калибра бранулы, поднимая головной конец хирургической площадки на 30 градусов, чтобы избежать чрезмерной потери крови во время вставки. Аккуратно вставьте фенестированные две французские полиуретановые канюли в проксимальный конец яремной вены, слегка вращая канюлю, при нажатии канюли на четырехсантиметровую глубину, чтобы достичь иллюзорной бифуркации нижней полы вены.
Важно, чтобы нажать канюлю очень мягко, но непрерывно без использования дополнительной силы. Если сопротивление встречается, потяните канюлю назад и вставьте ее снова. Защищить канюлю 8-0 шелковые узлы, и подвергать правой яремной вены, как только что продемонстрировали.
Cannulate правой яремной вены с одной французской полиуретановой канюли, мягко перемещая канюлю пять миллиметров к правому атриуму, и обеспечить канюлю с 8-0 шелковые узлы. Катетеризация левой бедренной артерии с другой французской полиуретановой канюлей для инвазивного мониторинга давления и анализа газа крови, а также вставка электрокардиограммы иглы, подключенные к устройству получения данных подкожно в обе конечности, и в левую грудную стенку. Затем вставьте ректальный термометр, подключенный к устройству сбора данных.
Чтобы инициировать вено-венозную экстракорпоральную мембранную оксигенацию, включите насос до начальной скорости потока 0,1 миллилитра в минуту. Через две минуты отрегулируйте скорость потока до трех-пяти миллилитров в минуту. При стабильном потоке следите за жизненными параметрами с помощью устройства сбора данных в режиме реального времени, непрерывно проверяя задний поток от венозного дренажа и отслеживая уровень крови в резервуаре для захвата воздуха.
Используйте один миллилитровый шприц, оснащенный 24-калиберной бранулой, чтобы собрать утечку крови и вернуть кровь в схему ECMO через резервуар для захвата воздуха. Для анализа газа крови, через 10 минут после начала ЭКМО, используйте картридж для отбора проб крови, чтобы собрать около 75 микролитров артериальной крови из нижней кавы вены перед оксигенатором, непосредственно после оксигенатора, и из бедренной артерии. Через 30 и 60 минут после начала ЭКМО, собирать кровь из бедренной артерии только.
Через 45 и 90 минут после инициации ввишите 0,1 миллилитра грунтового раствора, чтобы компенсировать интравазаловые потери жидкости через воздухоулавлитель. Через два часа после начала, собирать кровь из оксигенатора, нижней вены кавы, и бедренной артерии. После последнего сбора крови, уменьшить скорость потока на насосе в течение пяти минут, тем самым останавливая ECMO, продолжая записывать жизненно важные параметры в течение еще 10 минут.
В типичном эксперименте физиологические параметры животного регистрируются каждые 10 минут. В этом репрезентативном эксперименте гематологические параметры продемонстрировали соответствующую гемодилуцию во время ЭКМО, хотя для компенсации умеренной анемии не требовалось переливание крови. Параметры оксигенации показали надлежащую производительность оксигенатора в кислородной воздушной смеси на долю вдохновенного кислорода 1.0.
Кроме того, метаболические изменения во время ЭКМО включали респираторный алкалоз в начале и в конце эксперимента. Никакой дополнительной буферизации крови не проводилось. Важно использовать правильную технику каннюляции, чтобы поглощать потоки крови через схему ECMO, контролировать параметры оксигенации с помощью анализа газа крови, и заменить любую кровопотерю, вызванную анализом крови, дополнительным раствором грунтовки.
Этот метод прокладывает путь для исследователей в области болезней легких, чтобы значительно улучшить протоколы для спасения жизни лечения с помощью более 80 доступных нокаут-в, нокаут мыши моделей.
