A regurgitação mitral é uma doença comum da válvula que leva à insuficiência cardíaca. Este modelo de MR de rato pode ajudar a aprofundar nossa compreensão dos mecanismos subjacentes da insuficiência cardíaca. Este modelo pode ser usado para induzir mr em um coração batendo imitando a hemodinâmica observada em pacientes com esta lesão da válvula e tornando este modelo clinicamente relevante.
A experiência de microcirurgia e manuseio ajudará na replicação deste protocolo e familiaridade com imagens ecocardiográficas e interpretação de imagem são aspectos fundamentais para a colocação bem sucedida da agulha. Por se trata de uma técnica guiada por imagens, a demonstração visual dos métodos pode auxiliar na compreensão do procedimento. Depois de realizar uma toracotomia esquerda de acordo com os protocolos padrão em um rato sprague-Dawley adulto de 350 a 400 gramas, use uma sutura PROLENE 6-0 e um suporte de microagulé para colocar uma sutura de corda de bolsa no ápice do ventrículo esquerdo.
Amarre suavemente a sutura apical para estabilizar o ápice e insira uma agulha de calibre 23 lavada com soro fisiológico e com uma torneira na extremidade distal no centro da sutura de corda e na cavidade ventricular esquerda. Usando uma mão para guiar a agulha, use a outra mão para manipular simultaneamente a sonda transesofágica de eco para obter uma visão de eco ideal para visualizar a agulha. Usando orientação de ultrassom em tempo real, avance a agulha em direção ao lado ventricular do folheto mitral anterior.
Uma vez confirmada a posição da agulha, avance a agulha em um movimento fino através do folheto da válvula. Uma vez através do folheto, retire a agulha na câmara ventricular esquerda longe da válvula mitral e tenha um assistente ligando a imagem do Doppler colorida para confirmar o sr ajustado da sonda de eco conforme necessário para obter uma melhor visão. Uma vez confirmado o MR, retraia totalmente a agulha da cavidade ventricular esquerda e amarre suavemente a sutura de corda de bolsa.
Em seguida, use uma gaze estéril para absorver qualquer sangue no ápice e na cavidade torácica. Após cinco a 10 minutos de função cardíaca estável, use uma sutura vicríl interrompida 4-0 para aproximar as costelas enquanto reduz a isofluree para 2%Em seguida, insira um tubo torácico no sexto espaço intercostal e fixe o tubo nas cortinas estéreis para evitar o avanço inadvertido do tubo na cavidade torácica, em seguida, finalize aproximando as costelas. Use uma sutura contínua para fechar a camada muscular com a isoflurano a 1,5% e a camada de pele com o isoflurane a 1%Conecte uma seringa de bloqueio de 10 mililitros de luter inclinada ao tubo torácico e drene de 10 a 12 mililitros de ar da cavidade torácica antes de remover o tubo.
Uma vez que o tubo é removido, administre uma dose subcutânea final de Carprofen. Depois de desligar o isoflurano, continue a ventilação mecânica enquanto o rato desmamaia da anestesia monitorando os sinais vitais. No início da respiração espontânea, desligue a ventilação para testar a capacidade do rato de manter tal respiração e uma boa saturação de oxigênio da cavidade periférica.
Uma vez que o rato é capaz de manter os níveis de saturação de oxigênio capilar periférico sem a ventilação, corte as suturas de ancoragem para o tubo endotraqueal e extubar o animal. Quando o rato estiver ambulatorial, transfira o animal para uma gaiola limpa com roupas de cama mínimas e continue monitorando os sinais vitais com um monitor de saturação de oxigênio capilar periférico portátil. Três horas depois de acordar, administre buprenorfina.
Duas semanas após a cirurgia, coloque o rato anestesiado na posição de decúbito direito e insira uma sonda de ultrassom intracardiac de oito mega-hertz 8-francês com uma pequena quantidade de gel aplicada na ponta no esôfago do animal. Utilizando imagens doppler coloridas na visão de duas câmaras, visualize o ventrículo esquerdo e o átrio esquerdo e meça a área do átrio esquerdo e do jato MR para permitir o cálculo da fração da área do jato MR, conforme indicado. Para aproximar a área do orifício regurgitante, use o diâmetro externo da agulha para calcular a área de agulha de calibre 23 utilizando a fórmula.
Obtenha imagens de doppler de onda contínua com o portão Doppler no orifício do jato regurgitante e rastreie a forma de onda para calcular o tempo de velocidade integral do jato regurgitante. Use a fórmula para estimar o volume mr. Em seguida, gire a sonda eco lateralmente no sentido horário para obter a imagem do Doppler da veia pulmonar e meça as velocidades de onda sistólica e diastólica usando a equação para calcular a razão.
Nestas imagens, pode-se observar a direção da agulha ao ser inserida na válvula mitral. Aqui, o orifício deixado no folheto da válvula mitral em um rato representativo explantado duas semanas após o procedimento é mostrado. Em duas semanas após a cirurgia, os corações de ratos com Mr são esféricos e severamente dilatados e um jato mr vívido é aparente com uma área média de cerca de 21 milímetros quadrados e um tempo médio de velocidade integral de cerca de 40 centímetros.
A fração de MR normalizada é tipicamente de cerca de 42%, o que é considerado grave de acordo com as diretrizes da Sociedade Americana de Ecocardiografia. A gravidade do MR é adequada para induzir a reversão do fluxo pulmonar com uma diminuição na relação sistólica/diastólica de cerca de 0,9 na linha de base para aproximadamente menos 0,7 em duas semanas. A imagem em tempo real com ecocardiografia transesofágica e a introdução de uma agulha no coração batendo para perfurar o folheto mitral é um procedimento cirúrgico viável que pode ser ensinado.
Nosso modelo pode ser combinado com cardiomiopatias ventriculares para estudar a remodelagem cardíaca e facilita a investigação do impacto do início precoce versus início tardio do MR na remodelagem cardíaca.
