Os métodos tradicionais de transferência manual de reagentes a granel em placas de microtítiter são lentos e propensos a erros humanos. Essa tecnologia mais do que dobra a eficiência do processo e ajuda a eliminar esse erro. Essa técnica pode ajudar os usuários a entender operações realizadas em microplacões, reduzir oportunidades de erros e aumentar a eficiência do usuário durante operações manuais de tubulação.
Essa técnica impactará positivamente os resultados em ambientes pré-clínicos e clínicos, removendo e reduzindo erros que podem ser caros e até mesmo fatais se não forem corrigidos. Este sistema de código aberto pode ser facilmente adaptado para outras aplicações, como inspeções de cópia de microplacas, para eliminar inconsistências na colocação de compostos ou bioensadores, para necessidades químicas e biológicas. Demonstrando o procedimento de transferência de amostras estará Lina Deluca, gerente composta do laboratório de identificação de chumbo.
Para configurar uma transferência semi-automatizada de amostras de placa a placa, use um aplicativo de edição de planilha para gerar um arquivo CSV contendo placas de origem e destino, rotulando o código de barras de origem das colunas, código de barras de destino, poço de origem, bem de destino e volume de transferência. Sob as colunas, inclua uma linha no arquivo para cada operação de pipetação desejada indicando o código de barras alfa-numérico da mircopla de origem, se houver um, o código de barras alfa-numérico da microplaca de destino, se houver um, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser tubos da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser tubos da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado na placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-num , e o volume a ser transferido do poço de origem na coluna de código de barras de origem, para o destino bem no código de barras de destino. Abra o Programa guia de luz para abrir o aplicativo de interface de usuário gráfico de tubulação de luz de tubulação de microplaca e clique em Selecionar arquivo cherrypick.
Na janela do navegador de arquivos, abra o arquivo CSV. O aplicativo analisará a primeira linha do arquivo CSV e iluminará os poços correspondentes nas placas de origem e destino. Use os botões "e o poço Anterior" e o próximo para atravessar o arquivo CSV conforme desejado.
A interface gráfica do usuário destacará em cinza todas as linhas que tenham sido previamente iluminadas e destaque, em marrom, as linhas atualmente ativas. Realize as operações de tubulação conforme necessário para transferir amostras entre o poço de origem da placa de origem, para o bem de destino da placa de destino. Além da interface do usuário, os códigos de barras da placa podem ser verificados através dos displays LCD ligados aos painéis de iluminação.
Em seguida, clique em "Next well" para continuar até que o final do arquivo CSV seja alcançado. Para carregar um novo arquivo CSV, clique em Selecionar arquivo cherrypick"a qualquer momento. Para sair do programa, clique no X vermelho no canto superior direito da interface.
Para iluminação multi-bem, abra o aplicativo de diluição serial do emissor de luz de tubulação de tubulação de microplacar e especifique o modo de titulação desejado, a densidade da placa e as linhas ou colunas de partida. Use os botões Next"and Previous' para navegar pelas linhas ou colunas em sequência desde a linha inicial inicial ou coluna, até a última linha ou coluna na placa. Cada vez que o botão Next"ou Previous"é clicado, o painel de luz iluminará os LEDs correspondentes sobre a microplaca.
Continue até o final da sequência de titulação antes de sair do programa. Para simular visualmente um ensaio, coloque uma microplacão no guia de luz portátil. O guia de luz contém uma bateria e todos os eletrônicos necessários para serem usados independentemente de um computador para permitir que o guia seja usado em um modo portátil que pode ser controlado com botões embutidos para alternar entre os modos de demonstração.
Use o interruptor de interruptor de energia no compartimento de guia de luz portátil para ligar o sistema e selecione o modo de guia de luz portátil apropriado para o experimento. No modo de demonstração de triagem de alto rendimento, use o interruptor de botão direito na parte superior do guia de luz portátil para alternar os padrões de iluminação da amostra. Os poços iluminados com cor vermelha simulam a dispensa do reagente de um ensaio, por exemplo, células suspensas na mídia.
Os poços iluminados com a cor amarela simulam a adição de reagente de detecção. Em seguida, uma fonte de luz de excitação é simulada com todos os poços ficando azuis, seguidos pela simulação de luz emitida. A primeira e última coluna de poços são iluminadas em verde, e as colunas de campo de amostra média são iluminadas em azul para indicar a placa sendo lida em um leitor de microplatos.
Poços aleatórios no campo de amostra também terão cor verde de intensidade variada para representar hits. Para alternar o guia de luz entre o modo de demonstração de exibição de alto throughput e o modo de demonstração de titulação, pressione o interruptor de botão esquerdo. Quando o guia de luz entrar no modo de demonstração de titulação, todos os poços das colunas três e 13 serão iluminados com a cor amarela.
Pressionar o interruptor de botão mais à direita iluminará as colunas subsequentes em sequência. Quando o botão é pressionado após as colunas 12 e 22 serem atingidas, os poços nas colunas quatro a 12 e 13 a 22 serão iluminados em uma intensidade decrescente de amarelo para representar a titulação. Para a iluminação do artefato, coloque a microplacão no guia de luz portátil e pressione o interruptor de botão mais à esquerda duas vezes para mudar o guia de luz para o modo de iluminação.
Use o botão direito para alternar entre um conjunto de cores predefinidas conforme necessário para o aplicativo. O painel de luz ligará todos os LEDs em vermelho, azul, verde, laranja, branco, violeta, amarelo e índigo em sequência com cada apertar do botão direito. Opcionalmente, uma câmera ou telefone inteligente pode ser usado para fotografar a placa iluminada para registro ou documentação do trabalho.
A transferência de amostras entre as placas e a preparação de uma diluição serial pode ser realizada sem a preocupação de distração ou perda de noção de quais operações de tubulação permanecem. A plataforma MAPLE pode ser usada para ajudar a iluminar a microplaca para identificar artefatos potenciais, como precipitar, poços vazios, poços parcialmente cheios ou bolhas de ar. Os usuários podem, então, tomar medidas para amenizar amostras antes de fornecer-as a processos laboratoriais a jusante.
Neste experimento representativo, a lista de trabalho consistia em 49 operações de pipetação de duas micropla placas de 384 poços contendo uma variedade aleatória de corantes coloridos que soletram Jove em uma única microplata de destino de 384 poços. O layout dos poços na placa de destino confirma que o usuário invadiu os poços corretos. O padrão de cor dos poços na placa de destino pode ser usado para identificar erros para os quais o usuário não pipet do poço correto das placas de origem.
Os resultados deste teste cabeça-a-cabeça mostram uma economia média de tempo de 50% quando os usuários realizaram este teste usando MAPLE versus uma lista de trabalho impressa offline. Além disso, a taxa de erro das placas criadas usando MAPLE foi de 0% para todos os usuários, enquanto uma taxa de erro de 6% foi observada para um usuário iniciante usando uma lista de trabalho para a tarefa de preparação da amostra. Formulações de sinergia de drogas requerem uma preparação matricial 2D baseada em uma diluição serial por coluna para a primeira droga e uma diluição serial por linha para a segunda droga.
Estamos investigando o uso de painéis de luz LED para iluminar a distribuição de microdroplet. Ao acariciar a luz LED, podemos capturar imagens de amostras líquidas para controle e análise de qualidade. Este instrumento pode reduzir a exposição do usuário a materiais e agentes perigosos limitando seu tempo de interação e facilitando o uso adequado do reagente.
