Fracionamento celular de células U937, na ausência de centrifugação de alta velocidade

Este protocolo permite que os pesquisadores obtenham frações distintas de uma célula sem o uso de equipamentos especializados, reagentes caros ou técnicas complexas. A principal vantagem deste protocolo é a simplicidade das técnicas que o tornam modificável e fácil de executar. Demonstrando o procedimento serão Matt Deragon, Rob Haluska e Alexa Hodges.três estudantes de pós-graduação do meu laboratório. Para começar a centrifugar a suspensão celular preparada para criar uma pelota. Remova o supernatante e suspenda a pelota em temperatura ambiente PBS. Centrifugar a suspensão da célula a 400 xg por dez minutos. Em seguida, remova o supernasciente e suspenda novamente a pelota da célula no tampão gelado. Prepare o buffer Uma solução de acordo com o protocolo de texto. Centrifugar a suspensão da célula a 400 xg por dez minutos e remover o supernatante. Suspenda a pelota no buffer Uma solução para uma concentração final de 200 milhões de células por ml, e pipeta suavemente para quebrar qualquer aglomerado. Depois disso, incubar a suspensão da célula em uma rotadora final em 4