O objetivo do método é avaliar as consequências funcionais da implantação de tecido cardíaco projetado em um pequeno modelo de crioinfarto animal. A vantagem deste método é que permite a indução de infartos relativamente reprodutíveis do miocárdio com tamanhos estáveis de infarto. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, coloque a cobaia anestesiada em uma plataforma de aquecimento de 40 a 42 graus Celsius na posição supina.
Aplique pomada ocular e raspe e despito o tórax. Aplique gel transdutor de ultrassom de 25 graus Celsius à pele exposta e coloque o transdutor de um sistema de ecocardiografia no tórax para adquirir vistas bidimensionais do eixo longo parasteronal no modo B do pescoço direito em direção à perna esquerda no plano da válvula aórtica com uma visualização simultânea do ápice do ventrículo esquerdo para investigar a função ventricular esquerda pré-operatória. Em seguida, gire o transdutor 90 graus para obter uma visão de modo B de eixo curto no nível papilar médio.
Após a última imagem ter sido obtida, transfira a cobaia para a mesa cirúrgica e tape os membros em uma posição de águia espalhada. Desinfete a pele exposta com dois esfoliantes sequenciais à base de iodo e 80% de etanol e faça uma incisão vertical de 1,5 centímetros na área traqueal. Dissecar sem rodeios os músculos que cobrem a traqueia.
Quando a traqueia puder ser observada, perfure o tubo de ar com uma cânula iv calibre 18 e insira a parte flexível da cânula como um tubo traqueal. Conecte o tubo traqueal a um respirador animal para ventilação contínua durante o procedimento e conte os espaços da costela a partir do primeiro espaço intercostal para localizar o quinto espaço intercostal. Faça uma incisão horizontal de dois centímetros no quinto espaço intercostal no lado esquerdo da cobaia e remova os tecidos subcutâneos antes de dissecar os músculos com um eletrocautery até que os músculos intercostais sejam atingidos.
Disseque suavemente os músculos intercostais com pinças e pequenas tesouras até que o espaço pleural seja atingido e o pulmão esquerdo possa ser visualizado. Insira um retrátil entre as costelas e abra o retrátil cuidadosamente até que uma boa visão do coração seja obtida. Abra o pericárdio de aproximadamente um centímetro na região da parede ventricular esquerda anterior e coloque uma compressa no pulmão esquerdo para proteger o pulmão de danos ao induzir a lesão crioculo do ventrículo esquerdo.
Em seguida, esfrie a ponta de um carimbo metálico erodido com um diâmetro transversal de 0,5 centímetros em nitrogênio líquido por três minutos antes de pressionar a sonda na parede anterior esquerda do coração por 30 segundos. Em seguida, coloque um ferro de solda elétrica de 200 graus Celsius dentro do selo para aquecer o carimbo para que o metal possa ser removido do tecido. Após a terceira aplicação do selo, remova o retrátil do espaço intercostal e aperte o tubo de saída do ventilador por dois segundos para inflar os pulmões com pressão máxima para evitar atelectasiase do pulmão.
Em seguida, feche as costelas com duas suturas 4-0, os músculos sobre as costelas com uma sutura de corrida 5-0 e a pele com 5-0 pontos únicos de sutura. Depois de remover o tubo traqueal, use um único 8-0 sutura para fechar o local da punção na traqueia e fechar a ferida com três suturas de ponto único 5-0. Sete dias após a criocultura, remova suturas e faça uma incisão horizontal da pele de dois centímetros na área da cicatriz do lado lateral esquerdo e use eletrocauteria para dissecar suavemente as aderências pleurais extras.
Abra cuidadosamente o espaço pleural com uma tesoura e insira um espalhador de costela para expor o coração. Identificar visualmente a região do infarto por sua cor pálida em comparação com o miocárdio saudável ao redor e colocar um remendo de tecido cardíaco projetado sobre a região do infarto. Proteja o patch com dois 8-0 suturas em ambos os lados na área não infartado do coração e inflam os pulmões com pressão para evitar atelectasia dos pulmões.
Em seguida, remova o retrátil do espaço intercostal e feche o animal como demonstrado. Quatro semanas após a implantação do tecido cardíaco, realize a ecocardiografia transtorácica como demonstrado para avaliar as alterações na função ventrículo esquerdo horas extras. A coloração do tricrômico mason quatro semanas após a lesão crioca revela grandes cicatrizes transmurais acima de 25% do miocárdio ventricular esquerdo em média.
A coloração da distrofina demonstra grandes enxertos miocárdios que se remusculosaram parcialmente na cicatriz e coloração para ku80 humano que confirma a origem humana do miocárdio recém-formado. O monitoramento da ecocardiografia transtorácica do tecido cardíaco projetado implantado revela uma melhora na fração de ejeção ventrículo esquerda, encurtamento da área fracionada e diminuição do diâmetro ventricular e diastólico esquerdo. É essencial abrir cuidadosamente a cavidade pleural neste tipo de operação de re-fazer, pois as aderências entre a parede torácica e o ventrículo esquerdo podem estar presentes e há um certo risco de ferir o miocárdio ventricular esquerdo.
Após a implantação do tecido cardíaco projetado pelo homem, vários métodos podem ser usados para monitorar mudanças na fração de ejeção ventricular esquerda. Além da ecocardiografia, uma medição invasiva de laços de volume de pressão pode ser usada para monitorar essas alterações. Este método permite investigar todos os aspectos da implantação de tecidos projetados por humanos.
Consequências funcionais, bem como potenciais riscos como arritmias podem ser avaliadas neste pequeno modelo animal.
