Este método pode ser usado para responder a perguntas-chave sobre o papel do microambi ambiente da medula óssea e a sobrevivência de tumores de mieloma engrafados. A principal vantagem deste procedimento é que ele pode ser aplicado a estudos antidrogas longitudinais e usado para avaliar múltiplas vias bioquímicas de forma não invasiva. No dia do experimento, lave pela primeira vez as células transfactadas luciferase 8226 luciferase três vezes em PBS gelado a 200 RCF por cinco minutos por centorifigação e resuspense a pelota em PBS gelado fresco em cinco vezes dez a seis células por 200 microliters de PBS frio por rato.
Em seguida, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do dedo em um rato NOG anestésimo de seis semanas de idade e aplique pomada oftálmica aos olhos do animal. Coloque as células em uma seringa de insulina de um mililitro equipada com uma agulha calibre 26. Injete todo o volume de células na veia traseira do animal, antes de devolver o rato à sua gaiola, monitorando até a recuperação completa.
Dez a vinte dias após o desafio, injete cada animal engrafado com 200 microlitadores de substrato in vivo grau D-luciferin em solução salina estéril intraperitonealy. Coloque os animais anestesiados na posição supina em um pequeno sistema de imagem animal dentro de 5 a 10 minutos da injeção. Meça o brilho médio em regiões selecionadas de interesse dentro do software de imagem correspondente.
Para a terapia-alvo dos 8226 tumores luciferase, Depois de medir a bioluminescência de base em cada animal como apenas demonstrado, randomizar os animais em grupos de tratamento e tratar cada camundongo com uma série de 200 injeção ip microliter de Temsirolimus ou um controle salino. Meça a atividade da Luciferase duas vezes por semana e trace as mudanças na bioluminescência ao longo do tempo. Para medir as alterações no metabolismo tumoral, primeiro remova os alimentos da gaiola doméstica dos camundongos por 24 horas para evitar o excesso de absorção de fludeoxicose radiolabeled sem especificação.
No dia seguinte diluir 500 a 100 microcuries de 18 sondas fludeoxicadas radiolabeled Fludeoxyglucose fludeoxyglucose fluorina em soro fisiológico estéril a um volume final de 100 microliters por rato e registrar o tempo e a atividade das sondas com um calibrador de dose. Quando as sondas estiverem prontas coloque o primeiro animal anestesiado em uma almofada de aquecimento com a cabeça virada para longe e use uma seringa de insulina de um mililitro blindada equipada com uma agulha calibre 26 para injetar 100 microliters da sonda na veia traseira. Meça a radioatividade residual na agulha e seringa com o calibrador de dose e observe a atividade e o tempo.
Em seguida, meça a atividade de Fludeoxicogracose radiolabeled em regiões de interesse selecionadas que correspondem aos tumores engrafados em um pequeno sistema de imagem pet ct animal. Um enenxerto de tumor de medula óssea bem sucedido pode ser confirmado por bioluminescência, como demonstrado. Imagens seriais de múltiplos animais podem ser usadas para visualizar a distribuição dos tumores de mieloma múltiplos da medula óssea.
Além disso, a análise de raios-X de imagem óptica mostra uma determinação rápida e não invasiva da localização exata e distribuição dos tumores múltiplos de mieloma dentro do esqueleto do camundongo. A bioluminescência produzida por essas células tumorais engrafadas pode ser medida de forma serial e não invasiva para avaliar as alterações no crescimento do tumor. Além disso, a sobrevivência de camundongos tratados com o inibidor de mTOR Temsirolimus pode ser monitorada e a emissão de pósitrons e a análise de tomografia computadorizada para captação de fludeoxicose radiolabeled tumoral podem ser usadas para demonstrar as alterações mediadas por Temsirolimus no metabolismo da glicose.
Durante a realização deste procedimento é importante injetar as células IEV. Descobrimos que a falha em injetar as células na veia resulta na formação de células tumorais não-meduladas perto do local da injeção. Após esse procedimento, outros métodos como a imunohistoquímica e a microCcidade podem ser usados para responder a questões sobre o impacto dos tumores na arquitetura óssea e os componentes celulares e moleculares não tumorais do ambiente medular.
