The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

NOTA: No momento desta publicação manuscrito uma aplicação Investigational New Drug (IND) não é obrigado a realizar uma FMT para CDI recorrente na prática clínica. No entanto, se FMTs estão sendo realizadas como parte de um estudo ou para outra indicação, uma IND ou aplicação equivalentes, pode ser necessário 18. As agências reguladoras provavelmente vai continuar a avaliar a segurança e eficácia da FMT aplicada a condições médicas CDI e outros e por isso é aconselhável para verificar os requisitos de regulamentação em seu respectivo local antes do início de um programa de FMT e cada um a dois meses, uma vez realizar ativamente FMT. Os candidatos NOTA deve estar disposto a concordar com o transplante fecal, bem como a colonoscopia. 1. Identificação de candidatos adequados para FMT <ol><li> Pacientes que têm CDI reincidente ou pacientes com doença refratária, que não responde aos antibióticos tradicionais são appropriate os candidatos para FMT. NOTA: a recaída CDI é definida como uma história de três ou mais episódios de CDI confirmados por testes de toxinas ou PCR, ou dois episódios que necessitaram de hospitalização. </li><li> Certifique-se de que o paciente é capaz de sofrer uma colonoscopia com segurança. Isso fica a critério do endoscopista. </li></ol> 2. Seleção do Doador Stool NOTA: A selecção de dadores de fezes aplica-se ao tratamento de CDI e pode não ser aplicável para o tratamento de outros distúrbios. <ol><li> Certifique-se de que o paciente identifica um doador. Os doadores potenciais devem estar presentes com o destinatário no momento da visita inicial ambulatório de gastroenterologia. Os doadores podem ser cônjuges, familiares ou amigos. Os doadores podem viver na mesma residência como o destinatário, desde que sejam cumpridos outros critérios. </li></ol> Elegibilidade 3. Donor <ol><li> Critérios de inclusão: Certifique-se que o doador é um adulto saudável (≥18 anos) e tem uma diária formada intestino movement. </li><li> Critérios de exclusão: <ol><li> Certifique-se de que o doador não está tomando antibióticos ou não tomou antibióticos nos três meses anteriores ou qualquer medicação para uma infecção. </li><li> Certifique-se de que o doador não tem uma história de constipação ou usar laxantes cronicamente. Além disso, certifique-se o doador não tem uma história de doença inflamatória intestinal, diarréia crônica, colite microscópica, uma história pessoal de intestinal / neoplasia, ou uma história de desvio / outra perda de peso cirurgia gástrica. </li><li> Verifique se o doador não tiver viajado recentemente (nos últimos três meses) para uma área onde a diarréia infecciosa é uma preocupação. Se eles tivessem viajado e experiente diarreia que deverá ser afastada. </li><li> Certifique-se de que o doador não está tomando nenhum agentes imunossupressores e não é com a quimioterapia sistêmica. </li><li> Certifique-se de que o doador não tem a síndrome metabólica, doenças auto-imunes ou doenças atópicas. </li></ol></li><li> Obter con escritoenviado do dador e do receptor antes de triagem, dada a natureza sensível dos testes de triagem. Tranqüilize ambas as partes de que os resultados do ensaio não serão compartilhados com a outra parte. </li></ol> 4. Screening NOTA: Este protocolo de triagem foi adaptado para os pacientes no Hospital Brigham and Women, em Massachusetts, EUA Considere consulta ao departamento de doenças infecciosas e controle de infecção hospitalar, antes de iniciar o protocolo FMT para se certificar de todos os testes de rastreio adequados foram considerados. <ol><li> Destinatário: <ol><li> No momento da visita inicial clínica, enviar os seguintes testes laboratoriais de triagem destinatário (para estabelecer testes de linha de base para essas doenças infecciosas e para assegurar que não há questão de transmissão no futuro). </li><li> Realizar a hepatite A (IgG e IgM), hepatite B (HBsAg / Ab e HBcAb), hepatite C Ab, HIV-1/2 (Ab e carga viral) e sífilis (TP-IgG) no sangue laboratório tests. </li><li> Obter uma história completa das alergias alimentares, nesta avaliação inicial. </li></ol></li><li> Doador: <ol><li> Coordenar com o laboratório de microbiologia antes do rastreio para assegurar fezes formado não é descartada. </li><li> Encomende os testes laboratoriais abaixo para triagem de doadores se o doador atenda aos critérios de elegibilidade conforme a secção 3. </li><li> Realizar a hepatite A (IgG e IgM), sífilis (TP-IgG) de hemoculturas laboratório da Hepatite B (HBsAg / Ab e HBcAb), hepatite C Ab, HIV-1/2 (Ab e carga viral) e. </li><li> Execute C. difficile (pela cultura), cultura de fezes de rotina, antígeno Giardia, Cryptosporidium antígeno e exames de fezes de laboratório de ovos e parasitas. </li><li> Tela do dador não mais do que 30 dias, mas de preferência 1 - 2 semanas antes do procedimento agendado. NOTA: Se o doador desenvolve diarréia ou fezes líquido eles não são mais elegíveis para doação. </li></ol></li><li> Conselheiro do doador em alimentos para evitar com base emalergias alimentares do destinatário. O doador não deve ingerir alimentos a que o destinatário é alérgico para os 5 dias antes da doação. </li></ol> 5. Pré-Procedimento de preparação <ol><li> Destinatário: <ol><li> Na visita inicial clínica, se o destinatário não estiver na vancomicina oral, começar a vancomicina 125 mg a cada 6 horas durante pelo menos sete a dez dias antes do procedimento. </li><li> Fornecer ao destinatário com as instruções do centro de endoscopia para preparo intestinal pré-colonoscopia a ser feito no dia anterior ao procedimento agendado. Os destinatários também deve seguir as instruções da dieta padrão do centro de endoscopia para a semana antes do procedimento. </li><li> Instrua o destinatário a tomar a sua última dose de vancomicina na noite anterior ao procedimento. </li></ol></li><li> Doador: <ol><li> Fornecer o doador com várias xícaras de coleta de fezes. Inserções rótulo de higiene (chapéus) e copos com etiqueta do destinatário, bem como 3 sp vazioecimen recipientes. Pergunte ao doador para começar a coleta de fezes não mais do que 6 horas antes do processamento (tempo do procedimento). NOTA: Se o doador fornece várias amostras de fezes, devem ser rotulados com datas e horas. Use o exemplo mais frescos (um copo cheio espécime será suficiente). </li><li> Certifique-se de que o destinatário para traz amostra de fezes do doador com eles para o procedimento. </li><li> Armazenar as amostras de fezes, à temperatura ambiente. Excluir qualquer fezes malformadas. Descarte qualquer banco não utilizado em um sistema de esgoto sanitário (a menos que a poupança para fins de pesquisa). </li></ol></li></ol> 6. Stool Preparação NOTA: Certifique-se este procedimento é discutido e aprovado pelo departamento de controle de infecção do hospital. <ol><li> Use equipamento de proteção pessoal ao preparar as fezes. </li><li> Prepare fezes na sala de endoscopia numa zona de trabalho designada no qual existe uma zona de mergulho dezoito polegadas, que evita a contaminação de othmateriais er. </li><li> Antes de fezes preparação, limpar a área designada com desinfectante aprovado pelo hospital. </li><li> Cubra a área com uma almofada descartável para evitar a contaminação. </li><li> Transferir as fezes formado em uma velocidade de 14 onças único liquidificador e adicione 500 ml de soro fisiológico normal. </li><li> Misturar os conteúdos durante pelo menos um minuto ou até atingir uma consistência de pasta líquida. Tenha cuidado para evitar derramamento quando remover a tampa do liquidificador. </li><li> Despeje a solução através do filtro em uma bacia oito quart plástico para eliminar qualquer resíduo sólido. Descarte o filtro. </li><li> Elaborar a solução tensa em 60 cc seringas luer (aproximadamente oito as nove para um FMT padrão por colonoscopia). Elaborar um extra de 60 cc de soro fisiológico para ondas. </li></ol> 7. Transplant Fecal via colonoscopia <ol><li> Usar equipamento de protecção pessoal de acordo com as políticas de unidade de endoscopia, enquanto executa ou ajudando com o infusion. </li><li> Considere sedação leve, se possível, de modo que o paciente pode ser capaz de cooperar com a retenção de fezes, após o procedimento. </li><li> Realize uma colonoscopia para o íleo terminal (ou tanto quanto tecnicamente possível). Na inserção do colonscope, lavagem e sucção qualquer fezes líquidas residual. </li><li> Inspecione as paredes da mucosa para a evidência de inflamação de mucosa mas biópsias não são rotineiramente realizados durante o procedimento FMT. NOTA: Determine se uma colonoscopia total é seguro, devido ao grau de inflamação. Se não, considere a sigmoidoscopia flexível mais limitado com a infusão (use metade da pasta de fezes). </li><li> Infundir 60 cc (uma seringa) uma vez no íleo terminal através do canal de biópsia da colonoscopia com a tampa de canal de biópsia, com extensão da tubagem. </li><li> Entre as aplicações de seringas de fezes, lave o canal com soro fisiológico para evitar entupimentos. </li><li> Infundir outros 60 cc de fezes para o ceco e repita no c direitaOlon. </li><li> Continuar infundindo 30 cc cada cinco a 10 centímetros, enquanto distribui de maneira uniforme a lama em todos os quatro quadrantes da parede do cólon até ao cólon transverso intermédia é atingido. Lembre-se de lavar com soro fisiológico entre seringas de fezes. NOTA: Se a lama é muito viscosa, pode ser necessário para empurrar com uma força considerável no êmbolo da seringa. Tenha cuidado para que a tampa do canal de biópsia não separar do colonoscópio e causar derrame do conteúdo de fezes. Lavagem frequente irá permitir a fácil passagem da lama. Se não é constante dificuldade em empurrar a pasta, considerar o re-esticar as fezes dador remanescente para uma segunda vez ou diluindo ainda mais com solução salina normal. </li><li> Aspirar o excesso de ar, com o cancelamento ao trocar seringas, tomando cuidado para não aspirar qualquer fezes líquidas. NOTA: Se o paciente tem conhecido incontinência fecal, a última seringa deve ser infundido não inferior ao flexura hepática para evitar vazamentos durante e após o procedimento. </li><li> Uma vez the colonoscopia com FMT é completa, aconselhar o paciente a reter as fezes, enquanto eles podem. Eles podem retomar a sua dieta regular e medicamentos duas horas após a colonoscopia é completa. </li></ol> 8. A colonoscopia com FMT Clean Up <ol><li> Execute o procedimento de pós equipamentos reprocessamento, ambiente de limpeza / desinfecção e eliminação de resíduos, conforme o protocolo hospital. </li><li> Elimine todo o material fecal no recipiente de risco biológico apropriado. </li><li> Traga o colonoscópio para a área de descontaminação para o processamento de rotina por protocolo padrão. </li><li> Descarte o liquidificador e filtro com quaisquer outros resíduos suja. NOTA: Se liquidificadores de uso único e filtros não são viáveis ​​em um suplente instituição individual métodos de mistura pode ser considerado. Um exemplo: passagem das fezes através de um espremedor de batata de aço inoxidável que pode ser limpo em autoclave. Recomendamos discutir quaisquer métodos potenciais, com o controle de infecção dep de suas instalaçõesartment. </li><li> Descontaminar todas as superfícies que foram utilizados para o procedimento utilizando os produtos aprovados pela instituição. </li></ol> 9. Acompanhamento <ol><li> Organizar uma consulta de acompanhamento no ambulatório de gastroenterologia para o paciente cerca de 30 dias depois da FMT. </li><li> Counsel o paciente sobre o risco de recorrência C. difficile com os futuros cursos de antibióticos. </li></ol> 10. notificação de eventos adversos <ol><li> Embora FMT é considerada um procedimento seguro, é fortemente aconselhados a manter o controle de todos os eventos adversos sentiu a ser associado com o processo e relatá-los para as placas regulamentares adequadas. </li><li> Para documentar a segurança a longo prazo da FMT, manter um banco de dados confiável, que pode ser consultado periodicamente. </li></ol>

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The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

Transplantes fecais foram mostrados para ser um tratamento eficaz e seguro para CDI recorrente. Delineamos um protocolo padrão para FMT via colonoscopia e incluído nossos resultados para 22 pacientes que se submeteram ao procedimento para CDI recorrente. Nossos resultados até agora são comparáveis ​​aos dados publicados para doença recorrente com apenas um paciente recorrentes, um mês após FMT. Uma etapa fundamental do processo é a visita prescreening para assegurar que o dador é adequada e que o paciente não apresenta contra-indicações para sofrer uma colonoscopia. Screening geralmente leva de três a quatro dias para completar o processo e pode ser agendada logo em seguida. Pequenas modificações podem ter de ser feito, dependendo do paciente. O paciente que necessitou de duas FMTs também tinha a doença de Crohn e era pós status de colectomia total com anastomose íleo-anal. Seu primeiro transplante foi através de um colonoscópio em que nos incutiu fezes em 90 centímetros from o ânus em seu intestino delgado. Quando seu C. difficile retornou, procedeu-se com uma segunda via FMT enteroscopy intestino delgado resultando em resolução. Como mencionado no protocolo, a sigmoidoscopia flexível mais limitado pode ser realizada se houver evidência de inflamação significativa ou o paciente não pode tolerar uma colonoscopia total. A limitação da FMT pode ser a cobertura de seguro. Nos Estados Unidos, nem todas as companhias de seguros comerciais cobrir este procedimento. Por isso, é importante verificar com a operadora de seguros do paciente antes da FMT e uma carta de necessidade médica é muitas vezes necessária. Em conclusão, FMT é uma terapia eficaz para recorrente CDI e uma promessa para o tratamento de outros processos de doença, tais como doenças auto-imunes e doença inflamatória do intestino. Num futuro próximo, os avanços, como a criação de &quot;bancos de fezes&quot; pode evitar a necessidade de doadores de fezes e agilizar o pré-pprocesso de triagem fezes ROCEDIMENTO. Embora o perfil de segurança da colonoscopia com FMT parece ser excelente, as consequências a longo prazo ainda não são conhecidos. Em relação à mulher de 69 anos na apresentação do caso, ela passou por uma FMT sucesso e teve a normalização de seus movimentos intestinais no prazo de 2 dias após o procedimento. Ela foi submetida a tratamento posterior de sua CLL com quimioterapia e manteve-se C. difficile livre por mais de seis meses.

Transplantes de fezes para o tratamento da colite pseumembranous foram descritos pela primeira vez em 1958 1. No entanto, relatos de ingerir fezes para o tratamento de intoxicação alimentar e data diarreia grave de volta tão cedo quanto século IV China 2. Transplante microbiota fecal (FMT) também é denominado na literatura &quot;bacteriotherapy fecal&quot;, &quot;infusão probiótico humano&quot;, &quot;transplante de fezes&quot;, &quot;restauração microbioma intestinal&quot; e &quot;transferência fecal&quot;. Trata-se de coleta de fezes, um doador de pré-selecionados saudável e entregar uma pasta preparada para o trato gastrointestinal do destinatário através de sonda nasogástrica, esophagogastricduodenoscopy, colonoscopia ou enema 3. Muitas séries de casos têm relatado a eficácia da administração via NGT e enema, no entanto, estudos mais recentes têm demonstrado que a administração de banco de doadores através de uma colonoscopia é seguro e altamente eficaz 4.Enquanto outros métodos, como a administração de sonda nasogástrica foram relatados, a entrega de fezes doador via colonoscopia tem menos efeitos colaterais imediatos (por exemplo, inchaço abdominal e náuseas) 4 e nós descobrimos que os pacientes estão mais aceitando o conceito de FMT quando é realizado por colonoscopia. Uma das vantagens terapêuticas de FMT por colonoscopia, é a redução da biomassa do cólon devido à lavagem do intestino que é realizado antes do procedimento 4. Vários estudos investigaram o papel da FMT para o tratamento de colite e diarreia causada pelo patógeno oportunista C. difficile (CDI). A incidência de CDI continua a subir e é uma das principais causas de morbidade e mortalidade, com um grande encargo económico durante todo o mundo. O tratamento de primeira linha para CDI consiste em antibioticoterapia, porém as taxas de recorrência foram relatados entre 15-35% 5. Vários série de casos e relatórios têm fazercumented a segurança e eficácia da FMT para CDI refratária ao tratamento médico padrão com antibióticos 4,6-16. Um estudo que avaliou a longo prazo acompanhamento dos pacientes após FMT via colonoscopia para CDI relatou uma taxa de cura primário 91% em 77 pacientes 17. Na nossa Center (Brigham and Divisão Feminina Hospital de Gastroenterologia, Hepatologia e Endoscopia), iniciamos um programa de transplante fecal para pacientes com recorrência ou CDI refratário. Candidatos específicos são definidos como pacientes que têm CDI recorrente (uma história de três ou mais episódios, ou 2 episódios que necessitaram de internação) ou pacientes com doença refratária, que não responde aos antibióticos tradicionais. Acreditamos que uma abordagem sistemática para todas as fases deste procedimento maximiza a eficácia. Neste manuscrito e vídeo que acompanha, detalhamos o protocolo nós empregamos em nosso Centro, que inclui paciente e doador de triagem, preparação de fezes, e a entrega de um tamboretet o tempo de colonoscopia. Este método produz resultados positivos comparáveis ​​com a literatura publicada. APRESENTAÇÃO DO CASO: Este paciente representa um paciente típico encaminhados para transplante fecal. A paciente é uma mulher de 69 anos com uma história de leucemia linfocítica crônica que teve recaída da doença que exige mais tratamento com quimioterapia. Ela sofria de três episódios de CDI no ano passado, e, portanto, foi encaminhado ao nosso serviço para consideração de FMT antes quimioterapia para re-iniciar. Seu primeiro episódio de CDI ocorreu em outubro de 2012. Ela não tinha tido qualquer antibiótico anteriores. Ela estava muito doente na UTI após apresentar com choque séptico e foi submetido a desviar de ileostomia com antegrade vancomicina enemas para um curso de seis semanas em combinação com a vancomicina oral, dada a gravidade da sua doença. Ela fez muito bem com resolução de sua diarréia e ela foi capaz de chegarantibióticos fora. Ela desenvolveu uma hérnia em torno de seu estoma por isso foi revertido. Pouco depois da reversão de ostomia ela novamente desenvolvido diarréia e foi encontrado novamente para ser C. toxina difficile positiva. Ela completou mais um curso de 6 semanas de vancomicina oral e foi capaz de reduzir-se dele com sucesso. No entanto, vários meses depois, ela novamente desenvolvido diarréia que era C. toxina difficile positiva e foi iniciado em seu terceiro curso de vancomicina oral. Ela estava indo bem em uso de antibióticos quando observou-se que sua contagem de glóbulos brancos aumentou para&gt; 100 e ela tem encontrado para ter uma recorrência de seu CLL na biópsia de medula óssea. Seus oncologistas estavam preocupados com o início da quimioterapia sem resolução completa do seu CDI e por isso foram convidados a realizar FMT.

<table><tbody><tr><td>Blender</td><td>Hamilton Beach</td><td>51101</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&amp;amp;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;Link to Amazon.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Strainer</td><td>Winco</td><td>MS3A-8S</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&amp;amp;ie=UTF8&amp;amp;qid=1395001295&amp;amp;sr=1-3&amp;amp;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;Link to Amazon.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Disposable pads (chux), 17 x 24 in.</td><td>hospital standard</td><td></td><td>one package</td></tr><tr><td>Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart</td><td>hospital standard</td><td></td><td>1 or 2</td></tr><tr><td>500 cc bottle of sterile normal saline</td><td>hospital standard</td><td></td><td>2</td></tr><tr><td>60 cc luer lock syringes</td><td>hospital standard</td><td></td><td>8 or 9</td></tr><tr><td>Biopsy channel cap with extension</td><td>hospital standard</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) é um tratamento seguro e altamente eficaz para a recorrente e refratária C. infecção difficile (CDI). Vários métodos de administração FMT foram relatados na literatura, incluindo sonda nasogástrica, endoscopia digestiva alta, colonoscopia e enema. FMT via produz colonoscopia excelentes taxas de cura e também é bem tolerado. Nós descobrimos que os pacientes encontrar este um modo de entrega aceitável e tolerável. No nosso centro, nós iniciamos um programa de transplante fecal para pacientes com recorrência ou CDI refratário. Nós desenvolvemos um protocolo utilizando um processo iterativo de revisão e realizaram 24 transplantes fecais em 22 pacientes com taxas de sucesso comparáveis ​​com a literatura publicada actual. A abordagem sistemática para a triagem dos pacientes e doadores, a preparação de fezes, e entrega das fezes maximiza o sucesso terapêutico. Aqui nós pormenor cada passo do protocolo FMT que pode ser realizado a qualquer endoscopiao centro com um elevado grau de segurança e sucesso.

Efetuamos 24 FMTs em 22 pacientes no nosso Centro (Tabela 1), usando o protocolo acima. Nove pacientes tiveram IBD concomitante (seis com doença de Crohn e colite ulcerosa com três). Todos os nove tiveram resolução do CDI. Um dos pacientes com doença de Crohn foi o estado postar uma colectomia total para a colite de Crohn. Inicialmente, ele foi submetido a FMT via colonoscopia no entanto, depois de experimentar uma recorrência duas semanas pós FMT ele foi submetido a uma segunda FMT via endoscopia digestiva alta que resultou na resolução CDI. Onze dos treze dos pacientes não-IBD tiveram resolução completa dos sintomas relacionados a C. difficile após um FMT com um comprimento médio de acompanhamento de 3 meses [2 semanas - 17 meses]. Um paciente foi submetido a uma segunda FMT, que resultou na resolução do CDI. O segundo paciente que recaída após FMT optou por não ter um segundo transplante. Não houve complicações relacionadas ao procedimento ou a FMT (ou seja, infecções,alargamento do IBD, náuseas, vômitos, dor abdominal, ou hemorragia gastrointestinal) durante o limitado a data de acompanhamento. Um paciente com IBD fez um dia de pós-FMT experiência auto limitadas dor abdominal. Tabela 1: Características dos pacientes submetidos ao transplante fecal Microbiota no nosso Centro. <img alt="Tabela 1" src="/files/ftp_upload/52154/52154table1.jpg" width="500" /> <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52154/52154table1.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta tabela.</a>

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Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

Fecal Microbiota Transplantation via colonoscopia é um tratamento seguro e eficaz para a infecção recorrente e refratária C. difficile. A abordagem sistemática para a paciente e triagem de doadores, a preparação de fezes, e entrega das fezes durante a colonoscopia irá maximizar o sucesso terapêutico.

Fecal Microbiota Transplantation via colonoscopia para Recorrente<em&gt; C. difficile</em&gt; Infection

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.1K visualizações.  Brigham and Women‘s Hospital.  Fecal Microbiota Transplantation via colonoscopia é um tratamento seguro e eficaz para a infecção recorrente e refratária C. difficile. A abordagem sistemática para a paciente e triagem de doadores, a preparação de fezes, e entrega das fezes durante a colonoscopia irá maximizar o sucesso terapêutico. 

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A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Pesquisa do câncer

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is a significant nosocomial pathogen. C. difficile is notoriously difficult to isolate and cultivate and is extremely sensitive to even low levels of oxygen in the environment. Here, methods for isolating C. difficile from fecal samples and subsequently culturing C. difficile for preparation of glycerol stocks for long-term storage are presented. Techniques for preparing and enumerating spore stocks in the laboratory for a variety of downstream applications including microscopy and animal studies are also described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which maintains a consistent anaerobic environment to ensure proper conditions for optimal C. difficile growth. We provide protocols for transferring materials in and out of the chamber without causing significant oxygen contamination along with suggestions for regular maintenance required to sustain the appropriate anaerobic environment for efficient and consistent C. difficile cultivation.

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a pathogenic bacterium that is a strict anaerobe and causes antibiotic associated diarrhea (AAD). Here, methods for isolating, culturing and maintaining C. difficile vegetative cells and spores are described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which requires regular maintenance to ensure proper conditions for optimal C. difficile cultivation.

Cultivar e Manter<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Em um ambiente anaeróbico

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

Imunologia e Infecção

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

Murino ileocolic Bowel ressecção com anastomose primária

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Medicina

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 Strain

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted considerable attention. Accumulating evidence suggests that dysbiotic microbiota plays an active role in triggering or worsening the inflammatory process in IBD and that fecal microbiota transplantation (FMT) is an attractive therapeutic strategy since transferring a healthy microbiota to IBD patient could restore the appropriate host-microbiota communication. However, the molecular mechanisms are unclear, and the efficacy of FMT has not been very well established. Thus, further studies in animal models of IBD are necessary. In this method, we applied FMT from wild-type C57BL/6J mice to IL-10 deficient mice, a widely used mouse model of colitis. The study elaborates on collecting fecal pellets from the donor mice, making the fecal solution/suspension, administering the fecal solution, and monitoring the disease. We found that FMT significantly mitigated the cardiac impairment in IL-10 knockout mice, underlining its therapeutic potential for IBD management.

The interaction of genetic susceptibility, mucosal immunity, and intestinal microecological environment is involved in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). In this study, we applied fecal microbiota transplantation to IL-10 deficient mice and investigated its impact on colonic inflammation and heart function.

Avaliação Terapêutica do Transplante de Microbiota Fecal em um Modelo de Camundongo deficiente interleucina

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Murine Fecal Isolation and Microbiota Transplantation

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal microbiota transplantation (FMT) is a valuable approach to delineating a direct role of the total microbiota or isolated species in disease pathophysiology. It is a safe treatment option for patients with recurrent Clostridium difficile infection. Preclinical studies demonstrate that manipulating the gut microbiota is a useful tool to study the mechanistic link between dysbiosis and disease. Fecal microbiota transplantation may help elucidate novel gut microbiota-targeted therapeutics for the management and treatment of cardiometabolic disease. Despite a high success rate in rodents, there remains translational changes associated with the transplantation. The goal here is to provide guidance in studying the effects of gut microbiome in experimental cardiovascular disease. In this study, a detailed protocol for the collection, handling, processing, and transplantation of fecal microbiota in murine studies is described. The collection and processing steps are described for both human and rodent donors. Lastly, we describe using a combination of the Swiss-rolling and immunostaining techniques to assess gut-specific morphology and integrity changes in cardiovascular disease and related gut microbiota mechanisms.

The goal here is to outline a protocol to investigate the mechanisms of dysbiosis in cardiovascular disease. This paper discusses how to aseptically collect and transplant murine fecal samples, isolate intestines, and use the "Swiss-roll" method, followed by immunostaining techniques to interrogate changes in the gastrointestinal tract.

Isolamento Fecal Murino e Transplante de Microbiota

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal ...

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of the specific role of individuals, defined or complex groups of microorganisms in host response. Traditionally bred and reared in flexible-film or semi-rigid isolators, germ-free mouse husbandry and experimental manipulation are costly and require numerous trained staff and a large space footprint in animal housing facilities. The IsoPositive caging system allows for experimental manipulation of germ-free mice in individual, hermetically-sealed, positive-pressure isolator cages (isocages), reducing cost and enabling greater flexibility in experimental manipulations. 
Here, a protocol is described for transferring germ-free mice from breeding isolators to isocages and subsequent fecal transfer from human donor stool into mice to create stable long-term gut "humanized" mice for future studies. The materials and preparation needed for the utilization of the isocage system are described, including the use of chlorine-dioxide sterilant chemical sterilant to clean cages, supplies, equipment, and personal protective equipment. The methods for confirming the germ-free status of transferred mice and how to determine contamination in the caging system are discussed. The procedure for husbandry, including bedding, food, and water supply, is further discussed. The protocol for human fecal slurry preparation and gavage into germ-free mice to create gut "humanized" mice, along with stool collection to monitor the microbial community composition of these mice, are described. An experiment illustrates that two weeks post-human fecal transplant allows for stable colonization of donor microbiota in the murine hosts, enabling subsequent experimental usage. Furthermore, the collection of humanized mouse feces in viability preservation media, enabling use in further functional experiments, is described. Overall, these methods allow for the safe and effective establishment of humanized mouse communities in experimental gnotobiotic cages for further manipulation.

This protocol describes the best practices for germ-free mouse transfer to and housing in experimental single-cage isolators (isocages) while maintaining sterile conditions. Methods for fecal transplant into germ-free mice and the collection of viable bacteria from these gut "humanized" mice for further applications are discussed.

Preparação e Manutenção do Experimento de Gaiola IsoPositivo de Bioexclusão para Transplante Fecal Humano em Camundongos Livres de Germes

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the biological function of intestinal bacteria as a whole or at the species level. Several different FMT methods have been published. Here, we present an FMT protocol that successfully depletes gut microbiota in a matter of days, followed by transplantation of fecal microbiota from fresh or frozen donor intestinal contents to conventional mice. Real time-PCR is applied to test the efficacy of bacterial depletion. Sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) is then applied to test the relative abundance and identity of gut microbiota in recipient mice. We also present a flow cytometry-based detection method of immunoglobulin A (IgA)-coated bacteria in the gut.

<meta charset="utf8"></head><body>Transplante de microbiota fecal e detecção da prevalência de bactérias revestidas com IgA no intestino

We established an efficient way to deplete intestinal bacteria in three days, and subsequently transplant fecal microbiota via gavage of fecal fluid prepared from fresh or frozen intestinal contents in mice. We also present an optimized method to detect the frequency of IgA-coated bacteria in the gut.

Transplante de microbiota fecal e detecção da prevalência de bactérias revestidas com IgA no intestino

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the ...

Biologia

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in alleviating colitis remain undefined. Most analysis methods rely on limited diversity and abundance of gut microorganisms. Therefore, observational studies cannot establish causation. In this study, we applied antibiotic-induced pseudo-germ-free mice to investigate the role of gut microbiota in regulating the probiotic effects of Bacillus&#160;cereus (B. cereus)&#160;on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. This process allows for evaluating the bidirectional regulating effect of B. cereus&#160;supplementation on health and provides stable and reproducible results. Here, the detailed protocols for B. cereus cultivation, gavage operation, stool collection, and antibiotic clearance treatment on colitis mice are provided. The optimization methods are also applicable for other chronic inflammatory-associated disorders. The results showed that B. cereus administration decreased body weight loss, colon length shortening, disease activity index, and histopathological scores. However, treatment with antibiotics suppressed the positive effect of B. cereus on colitis. These results indicate that gut microbiota are needed for the alleviating effects of B. cereus on colitis. Therefore, exploring the beneficial effects of probiotics in this research is a promising approach for developing novel treatment strategies for alleviating the symptoms of chronic inflammatory-associated disorders.

<meta charset="utf8"></head><body>Investigando os efeitos aliviadores da administração de Bacillus cereus na colite por meio da modulação da microbiota intestinal

Here, we present a protocol to establish the antibiotic-induced pseudo-germ-free dextran sulfate sodium-induced colitis mouse model to investigate the role of gut microbiota in regulating the positive effects of Bacillus cereus on colitis.

Fecal Microbiota Transplantation via colonoscopia para Recorrente

Resumo

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Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

Cultivar e Manter

Murino ileocolic Bowel ressecção com anastomose primária

tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante

Avaliação Terapêutica do Transplante de Microbiota Fecal em um Modelo de Camundongo deficiente interleucina

Isolamento Fecal Murino e Transplante de Microbiota

Preparação e Manutenção do Experimento de Gaiola IsoPositivo de Bioexclusão para Transplante Fecal Humano em Camundongos Livres de Germes

Transplante de microbiota fecal e detecção da prevalência de bactérias revestidas com IgA no intestino

Transplante de microbiota fecal e detecção da prevalência de bactérias revestidas com IgA no intestino

Investigando os efeitos aliviadores da administração de Bacillus cereus na colite por meio da modulação da microbiota intestinal