여기서 프로토콜은 심근 허혈의 복합 동물 모델을 구축하기위한 것입니다. 죽상 동맥 경화증 및 PM 급성 노출과 병용. 이것은 관련 질병에 대한 연구를위한보다 신뢰할 수있는 동물 모델입니다.
이 동물 모델은 실제 상황에서 그러한 질병을 더 잘 시뮬레이션 할 수 있습니다. 이 방법 외에도 성공률이 높고 수행하기 쉽습니다. 이 모델은 복잡한 요인을 가진 질병의 병리학 적 연구 및 약물 개발에 사용될 수 있습니다.
이 모델은 심혈관 및 환경 독성학 연구를위한 플랫폼을 제공 할 수 있으며 다 요인 질병 연구를위한 아이디어와 참고 자료에 기여합니다. Orotracheal 삽관, 가슴의 갈라진 개구부 및 올바른 결찰 위치가이 모델의 성공의 열쇠입니다. 마우스 브리핑을 유지하고 출혈을 예방하는 것이 필수적입니다.
무작위로 2-3 마리의 마우스를 선택하여 초음파 영상 또는 직접 해부학 적 관찰을 통해 대동맥 궁에 플라크가 있는지 확인하십시오. 선택한 마우스를 마취시키고 마우스 보드의 앙와위 위치에 놓습니다. 위쪽 절치를 고무 밴드에 연결하십시오.
겨드랑이 선의 중간 지점 근처에있는 기관에 유연한 파이프가있는 작은 LED 스포트라이트를 집중시킵니다. 작은 멸균 면봉을 쥐의 입에 넣은 다음 면봉을 굴려 혀를 내밀십시오. 혀를 잡고 부드럽게 위로 당겨 구강, 인두 및 기관을 같은 길이 방향으로 만듭니다.
기관의 입구 인 성문은 숨을 쉴 때마다 열리고 닫히는 밝은 지점으로 볼 수 있습니다. 성문을 겨냥하여 22 게이지 카놀라를 마우스 기관에 삽입 한 다음 바늘 코어를 빼냅니다. 소량의 생리 식염수가 함유 된 피펫 건을 사용하여 튜브가 쌕쌕 거리는 소리에 올바르게 있는지 테스트하십시오.
튜브가 올바른 위치에 있으면 피펫 건의 액체 기둥이 숨을 쉴 때마다 튀어 오릅니다. 50마이크로리터의 DPM 현탁액을 피펫 건으로 튜브에 떨어뜨립니다. PM 노출 후 애완 동물 유치 바늘을 제거하십시오.
의식을 회복 할 때까지 마우스를 가열 패드에 올려 놓은 다음 마우스를 홈 케이지에 다시 넣으십시오. 삽관 플랫폼의 앙와위 위치에 마우스를 놓고 마우스를 고정합니다. 제모 크림으로 왼쪽 가슴의 머리카락과 인접한 오른쪽 가슴의 일부를 제거하십시오.
그런 다음 애완 동물 유치 바늘을 동물 인공 호흡기와 연결하십시오. 소독을 위해 요오드 폼과 알코올로 피부를 닦으십시오. 안과 용 가위로 약 1cm 동안 피부를 자르고 근육을 보강하여 갈비뼈를 노출시킵니다.
치아가있는 안과 핀셋으로 갈비뼈를 고정하고 세 번째 늑간 공간에서 작은 절단을하십시오. 수제 가슴 열기 도구로 수술 창을 만든 다음 심낭 막을 찢습니다. 멸균 된 6 개의 제로 실크 봉합사를 미세 혈관 지혈 겸자를 사용하여 바늘로 잡습니다.
관상 동맥이있는 부위의 2 밀리미터 너비의 심근을 통해 실크를 통과시킵니다. 조직 파손을 방지하기 위해 합자와 심근 조직 사이에 멸균 된 5 개의 제로 실크를 짧게 놓습니다. 왼쪽 전방 하행 관상 동맥과 그 주위의 심근의 작은 묶음을 단단히 묶으십시오.
공사관은 좌심실의 전벽이 창백 해지면 성공한 것으로 간주됩니다. 가슴에서 공기를 부드럽게 짜냅니다. 그런 다음 늑간 근육과 피부를 멸균 된 5 개의 제로 실크로 순차적으로 봉합하십시오.
수술 후 모든 혈액 얼룩을 청소한 다음 마우스를 측면 누운 위치의 가열 패드에 놓습니다. 마취에서 회복 될 때까지 약 5-20 분 동안 마우스 징후를 지속적으로 모니터링하십시오. 교정 반사가 회복되면 마우스와 물병이있는 가열 패드의 깨끗한 회복 케이지로 옮깁니다.
마우스의 생존을 보장하기 위해 15-30 분 동안 계속 모니터링하십시오. 마지막으로 상처 감염을 예방하기 위해 원하는 용량에 따라 페니실린 나트륨을 근육 내 주사하십시오. 허혈 정도는 TTC 염색으로 검사하였다.
정상 조직은 TTC가 숙시 네이트 탈수소 효소와 반응 할 때 빨간색으로 변합니다. 허혈성 조직은 탈수소 효소 활성 감소로 인해 창백하게 유지됩니다. 대표 이미지는 MI 수술이나 PM 노출을 겪지 않은 심장 조직, MI 수술을 받았지만 PM 노출이 없었으며 MI 수술 및 PM 노출을 겪은 심장 조직을 보여줍니다.
PM 노출은 심근 허혈을 악화시켰다. Oil Red O는 조직의 트리글리세리드와 같은 중성 지방을 정확하게 착색 할 수 있습니다. 그림의 빨간색 점은 플라크를 나타냅니다.
규칙적인 식이 요법을 갖는 야생형 마우스, 고지방 식이를 갖는 APO E 녹아웃 마우스, 및 고지방 식이를 하고 PM 노출로 고통받는 APO E 녹아웃 마우스의 대동맥 내의 플라크는 오일 레드 O 염색에 의해 여기에 도시된다. 고지방 공급은 APO E 녹아웃 마우스에서 죽상 동맥 경화증을 유발했으며 PM 노출은 죽상 동맥 경화증을 악화시켰다. 혈관 내 튜브가 혈청 절개술 중에 제대로 삽입되었는지 확인하는 것이 중요합니다.
작업자는 삽관 작업을 빠르고 정확하게 완료해야하며 수술 중 동물의 호흡 상태에 항상주의를 기울여야합니다. 우리의 방법은 대기 오염과 심혈관 질환의 교차점에 관심이있는 연구자를 돕습니다. 여기에 아이디어를 제공합니다.
물론 연구자들은 우리가 설명한 동물 모델을 기반으로 직접 연구를 수행 할 수도 있습니다.
