온난 허혈/재관류 손상의 쥐 폐 이식 모델: 결과 개선을 위한 최적화

이 프로토콜은 방법론을 개선하고 신뢰할 수 있는 폐 이식을 하는 데 도움이 되는 4가지 주요 영역을 식별합니다. 첫 번째는 재현 가능한 커핑 기술입니다. 두 번째는 네 번째 늑간 공간, 상처의 철저한 봉합, 그리고 분석을 위해 샘플을 회수하고 얻는 방법을 정확하고 재현 가능하게 식별하는 것입니다.

이러한 기술은 분자 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 개발하기 위해 신뢰할 수 있는 폐 이식 방법을 개발하는 데 도움이 됩니다. 심박수/산소 포화도 모니터링 장비를 켜고 보드를 섭씨 42도까지 예열하여 수술 장치 설정을 시작합니다. 또한 환기 및 마취 기계를 켜서 이소플루란 증발기를 예열하십시오.

마취 주사기에 10ml의 액체 이소플루란을 채우고 주사기를 환기 및 마취 기계에 장착합니다. 그런 다음 높이와 초점을 기본 설정에 맞게 조정한 상태에서 수술용 현미경을 켜고 전기 소작 장치를 시작합니다. 마찬가지로 수술 도구를 준비하고 배치하십시오.

표 1을 참조하여 쥐의 체중을 기준으로 커프를 만드는 데 사용할 혈관 카테터의 정확한 게이지 크기를 결정하십시오. 폐동맥, 기관지 및 폐정맥에 대한 커프를 준비한 후 수술 현미경으로 멸균 된 표면에 적절한 크기의 혈관 카테터를 놓습니다. 그런 다음 늑골 등 수술 칼날 번호 11을 사용하여 혈관 카테터를 90도 각도로 절단하여 커프 본체 상단에 너비와 높이가 1mm 인 2mm 길이의 커프 몸체를 형성합니다.

수술을 위한 랩을 준비한 후 가위로 3-4cm 길이의 정중선 피부 절개, 목 중간 부위를 만들고 집게를 사용하여 피하 조직과 근육을 조심스럽게 절개합니다. 기관내 삽관의 경우 기관 주위에 4-0 실크 봉합사를 끼웁니다. 그런 다음 16게이지 혈관 카테터를 기관에 삽입하고 기관 주위에 봉합사를 이중 매듭으로 단단히 묶은 다음 단일 매듭으로 혈관 카테터를 제자리에 고정합니다.

혈관 카테터를 인공 호흡기에 연결하여 쥐의 수술 마취면을 1-2 % 이소 플루 란으로 유지합니다. 가위를 사용하여 복강근 절개술을 정중선과 횡 절개를 결합한 것입니다. 그런 다음 하대정맥 또는 IVC를 통해 인슐린 주사기로 헤파린 킬로그램당 1, 000 단위를 주사하고 전신 순환을 위해 10분 동안 허용합니다.

폐가 환기하는 동안 미세 해부 스프링 가위로 오른쪽 및 왼쪽 귓바퀴를 자른 다음 폐동맥을 통해 18 게이지 혈관 카테터를 도입하여 28cm의 물에 매달린 주사기에 20 밀리리터의 보존 용액으로 폐를 중력 플러시하고 튜브와 혈관 카테터에 연결합니다. 기관내관에서 인공호흡기를 분리하여 체중에 따라 적절한 양의 공기로 채워진 5밀리리터 주사기에 연결합니다. 따뜻한 허혈 1시간 후, 미세 해부 스프링 가위와 집게로 심폐 블록을 절제하고 얼음 위의 멸균 페트리 접시에 얼음처럼 차가운 PBS로 적신 멸균 거즈에 놓습니다.

Vannas-Tubingen 스프링 가위로 왼쪽 폐 폐문 부위를 조심스럽게 다듬고 왼쪽 폐정맥, 폐동맥 및 기관지를 조달합니다. 모기 지혈제를 사용하여 커프 탭을 잡습니다. 그런 다음 적절한 커프 몸체를 통해 폐정맥, 폐동맥 또는 기관지의 말단부를 채취하고 커프 주변의 여분의 조직을 뒤집은 후 8-0으로 고정합니다 나일론 봉합사.

완료되면 Vannas-Tubingen 스프링 가위를 사용하여 커프 본체 주변의 여분의 조직과 커프를 다듬습니다. 수혜자 쥐를 준비하려면, 쥐의 가슴에 흉골 상 노치에서 xiphoid 과정까지 선을 그립니다. 이 선의 중간에 흉골 상 노치에서 xiphoid 과정까지 측정의 절반을 측정하는 가슴의 왼쪽을 따라 선을 그립니다.

기관내 삽관 키트의 LED 조명에 연결된 광섬유 케이블을 사용하여 16게이지 혈관 카테터로 수혜자를 시각화하고 삽관합니다. 폐를 빼낸 후 Dieffenbach 불독 클램프로 잡고 왼쪽 폐 주위에 멸균 거즈를 놓고 가능한 한 근위부로 왼쪽 폐 폐문 부위에 Yasargil 클램프를 적용합니다. 쥐가 준비되면 수혜자의 폐정맥 주위에 7-0 나일론 봉합사를 배치하여 폐정맥 문합을 진행합니다.

Vannas-Tubingen 스프링 가위를 사용하여 상부 및 하부 분절 정맥을 가능한 한 원위부로 절단하여 수혜자의 폐정맥을 절개하고 인슐린 주사기를 사용하여 헤파린 처리 식염수 1밀리리터당 1국제 단위 0.2밀리리터로 혈액을 씻어냅니다. 얼음처럼 차갑고 습한 멸균 거즈로 감싼 기증자 폐를 흉강에 넣고 기증자의 커프가 있는 폐정맥을 수혜자의 폐정맥에 삽입한 후 미리 배치된 7-0 나일론 봉합사로 문합을 고정합니다. 기관지 또는 기관지 문합의 경우 수혜자의 기관지 주위에 7-0 나일론 봉합사를 놓은 후 상부 및 하부 분절 기도를 가능한 한 원위까지 가로로 절단하여 수혜자의 기관지를 절개합니다.

기증자의 커프가 있는 기관지를 수혜자의 기관지에 삽입한 후 미리 배치된 7-0 나일론 봉합사로 문합을 고정합니다. 다음으로, 앞에서 설명한대로 폐동맥 문합을 수행하십시오. 이식된 기증자 폐의 재증식 및 환기를 허용하려면 문에 있는 Yasargil 클램프를 제거한 다음 6-0 나일론 봉합사로 개흉술 절개 부위를 봉합합니다.

원하는 대로 천연 또는 이식된 폐에서 BAL 유체를 수집합니다. 폐부종을 측정하기 위해 습윤 대 건조 엽의 중량비를 계산하였다. 이식된 엽은 기증자 또는 수혜자의 본래 엽에 비해 습윤 대 건조 중량 비율이 유의하게 증가하여 폐부종이 없음을 나타냅니다.

우리의 의견으로는, 이 절차의 두 가지 중요한 단계는 하나는 해부학적 랜드마크를 정확하게 사용하여 네 번째 늑간 공간을 식별한 다음 두 번째는 재현 가능한 커핑 기술을 갖기 위해 커프를 선택하고 적절하게 사용하는 것입니다. 재현 가능하고 일관된 쥐 폐 이식 모델은 일반적으로 허혈, 재융합 및 이식에 대한 분자 조사의 기초입니다.