이 현재 비디오의 전반적인 목표는 지주 막증 출혈의 모델로 시스테나 마그나에 혈액의 이중 직접 주입의 프로토콜을 설명하는 것입니다. 지주 막 증 출혈의 생리학은 종종 동맥류의 파열때문입니다. 그리고 우리는 먼저 뇌와 뇌를 덮는 조직 사이의 구획으로 혈액의 사치를 합니다.
이 구획은 수막의 공간입니다. 수막치출혈은 모든 파업 케이스의 최대 7%를 차지합니다. 사망률은 인구 기반 연구와 지주 막 증 출혈 생존자에서 30~50%사이 변화 일반적으로 메모리 적자로 인지 후속편을 경험, asthenia, 또는 기분 장애.
가난한 결과의 높은 보급에 있는 주요한 원인은 대뇌 허혈입니다. 연구는 첫번째 팽만점 사건 후에 첫번째 와 15 일 사이 환자의 대다수에서 검출될 수 있는 현미경 혈관경련이라는 큰 대뇌 동맥의 혈관 수축에 있는 허혈의 발생 사이 링크를 만들었습니다. 현재 치료 옵션의 비효율성 때문에 병리학 적 사건에 대한 더 나은 이해를위한 명백한 의학적 필요성이 있습니다.
수위 지주 체 증 과 새로운 치료 대상 테스트 해야 하지만 이 다양 하 고 표준화 된 동물 모델 필요. 인간에서 지주 막 증 출혈의 주로 책임 inter cranial 동맥류의 파열은 전임상 및 인간 적인 모형을 만들기 위하여 확률이 높습니다. 동물에서는 출혈과 혈액 분포의 제어 발생률에 주요 어려움이 있지만, 최근 연구는 지주 막증 출혈의 모델의 더 많은 재적 모델의 개발에 초점을 맞추고 있습니다.
여기에 시스테나 마그나로 우리의 이틀의 자가 동맥 혈액의 두 연속 주사의 표준화 된 마우스 모델을 나타냅니다. 이 모델의 주요 장점은 비침습적 외과 적 수술을 다시 마스터하고 주입 된 혈액의 품질과 양을 조정하고 두개내 압력을 크게 증가시키지 않고 출혈 이벤트를 강화하는 것입니다. 수술이 시작되기 전에 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 또 다른 많은 수의 유리 모세 혈관을 넣어야합니다.
주입 파이펫은 0.86 밀리미터의 내지름과 0.5 밀리미터의 외경을 나타내야 한다. 서면 프로토콜에 표시된 것처럼 인공 뇌 척수액을 가짜 상태에 대비하십시오. 0.22 미크론 필터 장치를 사용하여 이 산소인공 뇌척수액을 깨달아야 합니다.
우리의 지주 막 증 출혈 모델의 첫 번째 단계는 기관지를 따라 경동맥의 격리와 경동맥 천막에서 혈액의 최대의 수집에 이루어져 있습니다. 이소플루란에 의한 마취 후, 실험 절차의 설정을 허용하기 위해 하나 또는 두 개의 뒷다리를 클램핑하여 반사 신경의 부족을 확인하십시오. 26 게이지 바늘을 사용하여 Eprin으로 1밀리미터 주사기를 코딩합니다.
이것은 다음 단계 도중 혈액 응고를 방지할 것입니다. 전자 균형을 사용하여 각 마우스의 무게를 정확하게 측정합니다. 현재 연구에서, 쥐의 범위 내에서 체중을 가질 것 이다 20 받는 일 25 수술 직전에 그램.
앞서 설명한 바와 같이, 수술된 마우스의 마취를 유도한 다음 적절한 전기 클리퍼를 통해 각 귀 사이의 목과 공간을 면도한다. 체크 마우스는 자고 마우스 헤드가 잘 차단되어 있습니다. 1킬로당 0.1 밀리그램의 부프레노르핀 100마이크로리터를 허리에 26게이지 바늘로 주입하여 각성 후 통증을 피하십시오.
보호 액체 젤을 사용하여 안구건조건조도 방지하고 자동 조절 전기 담요를 사용하여 37도의 내관 온도를 유지합니다. 살균 용액으로 면도 영역을 치료하기 전에 조직을 만지는 모든 계측기는 살균되어 무균으로 처리되었습니다. 첫날, 후방 목에 1센티미터 길이의 절개를 자르고, 미드라인을 따라 근육이 분리되어 시스테나 마그나에 접근했습니다.
얇은 가위로 빈 유리 파이펫의 끝을 잘라냅니다. 그런 다음 유연한 실리콘 커넥터에 연결된 주사기에 적응합니다. 그런 다음 정밀 마이크로 피펫을 사용하여 0.5 밀리리터 튜브에 혈액 또는 인공 뇌 척수액 60 마이크로리터를 옮기고, 지주 막증 출혈 상태를 위한 혈액 60 마이크로리터 또는 가짜 상태에 대한 인공 뇌척수액의 60 마이크로리터를 전달합니다.
주입의 경우, 예를 들어, 우리의 링 또는 a를 사용하여 스테레오전술 프레임에 파이펫을 삽입하고 시스테나 마그나와 인터페이스에서 멤브레인에 파이펫 팁에 천천히 접근한다. 스테레오전술 프레임의 미세 조작기를 사용하여 아틀란토 후현막을 통해 피펫 팁을 천천히 시스테나 마그나에 삽입합니다. 파이펫을 이전에 채워진 주사기에 연결하여 압력 유도에 대비합니다.
급성 두개 내 고혈압을 피하기 위해 분당 약 10 마이크로 리터의 낮은 속도로 압력에 의해 주입하십시오. 주사 하는 동안, 밀접 하 게 호흡 속도 및 직장 온도 모니터링. 주입의 끝에서, 조심스럽게 마이크로 조작기를 사용하여 파이펫을 벗고 시각적으로 철수 하는 동안 누출이 없습니다 주의.
항상성을 달성하고 편조 비 흡수성 봉합 실로 두 봉합사를 수행합니다. 수술 직후, 마우스를 쇠약함으로 분리하고 배치하고 회복 기간 동안 열린 상자에 생존 담요로 덮습니다. 24 시간 후에, 마취를 다시 유도하고, 전날로 입체 프레임에 마우스를 설치하고 마이크로 가위를 가진 봉합사를 주의하여 제거하십시오.
아틀란토 후두막의 멸균 이전과 같이 면도 부위에 바르고 면봉을 사용하여 무균 용액을 바르게 하십시오. 전날과 같이 30마이크로리터의 혈액 또는 인공 뇌척수액을 낮은 비율로 주입하십시오. 이미 언급했듯이 호흡률과 직장 온도를 모니터링하십시오.
주사가 끝나면 조심스럽게 파이펫을 벗고 철수 시 혈액 누출의 부재를 제어하십시오. 항상성을 달성하고 편조 흡수 가능한 봉합 실로 두 봉합사를 수행합니다. 수술 후 첫날부터 희생의 날까지, 체중은 일반적인 웰빙에 대한 민감한 지표로 매일 평가되어야합니다.
그것은 지주 막 증 출혈에 상당한 감소 체중 증가 보여 주었다, 가짜 동물에 비해, 오래 지속 활동 복구 과정 및 장기간 된 병 리 질환 이벤트를 제안, 후 지주 막 출혈. 왜 필멸의 삶이 가짜 상태가 아닌가? 사망률은 지주 막증 출혈 상태에서 7일째에 30%에 가깝으며, 대부분의 동물은 수술 후 1일 또는 4일째에 사망합니다.
인도적 종점 중, 초기 체중의 15 %의 우수한 상당한 체중 감소가 주목된다. 구부러진 등 자세, 느린 움직임, 상처, 비정상적인 발성 또는 중요한 침략은 동물이 고통받고 있다는 징후이기도합니다. 이러한 징후 또는 징후의 조합이 나타나면 동물의 추적이 출현 후 몇 시간 내에 강화됩니다.
동물의 상태가 48시간 이내에 발생하거나 개선되지 않는 시간에 악화되면 참을 수 없는 고통의 수준에 도달하고 살인이 수행되는 것으로 간주됩니다. 수술 첫날이 예에서, 그것은 샘플 뇌에서 관찰 될 수있다, 지주 막치 출혈 대상에 윌리스 다각형의 큰 동맥을 따라 혈전. 수술 후 5일째와 희생 전, 인도 간 잉크 주입은 큰 소뇌 동맥의 혈관 수축에 대응하는 거시성 혈관 경련의 검출을 허용하고, 헤마톡시린과 에오신을 가진 뇌 슬라이스의 착색은 뇌 혈관 경련의 측정을 허용합니다.
이 사진 현미경에 설명된 바와 같이 바실라 동맥의 혈관 경련을 관찰할 수 있습니다. cisterna magna에 혈액의 직접 주입을 우회의이 모델에서, 우리는 최근에 큰 뇌 동맥의 뇌 혈관 경련을 입증했다, 뇌 혈관 세동 증착, 및 세포 세포 증착, 마우스에 변경 된 감각, 모터, 및 인지 기능과 함께. 따라서, 그것은이 모델을 검증 하 고 단기 및 오래 지속 이벤트에 대 한 특성화, 후지 암 초 출혈.
새로운 표적의 장래 식별및 뇌막증 출혈 관련 합병증에 대한 효율적인 치료 전략에 대한 연구에 이상적입니다.
