이중 마커를 이용한 모자이크 분석을 이용한 대뇌 피질 개발의 계보 추적 및 클론 분석(MADM)

이중 마커 기술을 이용한 모자이크 분석은 개인 줄기 세포의 증식 거동 및 저장고 출력에 대한 고정량적 정보를 제공할 수 있는 강력한 방법입니다. 이 기술의 독특한 특징은 단일 세포 수준에서 후보 유전자의 혈통 추적 및 기능적 유전 분석을 허용한다는 것입니다.절차에 악마화, 카르멘 Streicher, 기술자, 니콜 앰버지, 포스트 닥터, 기젤 청, 포스트 닥터와 앤디 한센, 내 실험실에서 박사 과정 학생. 실험마우스에서 MADM 재결합 이벤트를 유도하려면 25게이지 바늘을 장착한 1ml 주사기를 사용하여 임신 한 댐에 맞춰 타목시펜 인트라페리토날의 단일 주사를 전달한다. MADM 클로날 분석부터 산후 시간 점에 이르기까지. 배아 일 18 받는 일 18 받는 날, 수핀 위치에 임신 한 마우스를 배치 하 고 70%에탄올모피를 소독. 자궁 위의 하복부에 있는 피부에 있는 작은 절개를 하고 복막을 드러내기 위하여 근육과 복부 근육 벽을 통해 두 번째 절개를 합니다. 가위를 사용하여 자궁을 주변 조직으로부터 분리하고 온수 자궁을 따뜻한 물로 장갑에 넣습니다. 그런 다음 미세 팁 가위와 손가락을 사용하여 자궁 벽을 조심스럽게 열어 배아를 방출합니다. 새끼를 부드럽게 누르고 수시로 호흡을 시작한 후 산전 동물을 위탁 모에게 옮기십시오. 신경 MADM 클론 티슈를 수집하기 위해 관류 수술 트레이에 수핀 위치에 마취 된 동물을 배치하고 70 %의 에탄올로 모피를 소독합니다. 가위와 집게를 사용하여 피부를 통해 하나의 절개와 근육 층을 통해 하나의 절개를합니다. 흉부 구멍이 보이면, 냄새를 맡고 다이어프램을 들어 올려 심장을 드러내고 조심스럽게 갈비뼈를 수술 트레이에 고정합니다.PBS로 채워진 연설 펌프 튜브에 연결된 바늘을 심장의 왼쪽 아래 심실로 삽입하고 작은 아이리스 가위를 사용하여 오른쪽 의 후방 끝에 절개를 합니다. PBS와 심장 혈관 시스템을 perfuse 즉시 PBS에서 갓 준비 얼음 차가운 4 % 파라 포름알데히드와 관류에 의해 다음. 관류가 완료되면 신중한 해부를 통해 뇌를 제거하고 수확 한 장기를 신선한 4 %의 뇌 부피의 적어도 5 배에 배치합니다 4