이 방법은 기존 쥐 숙련된 도달 프로토콜을 기반으로 교육 및 테스트를 자동화하여 대규모 데이터 세트를 비교적 빠르게 획득하는 효율적인 수단을 제공합니다. 그것은 앞다리 운동학의 3 차원 재구성을 허용하면서 실험자의 노력을 최소화. 운동학은 정확하게 시간 조정한 내정간섭의 효력을 평가하기 위하여 이용될 수 있습니다 또는 생리적인 기록과 상관연관됩니다.
몇 가지 조정으로,이 기술은 또한 마우스에 적용 될 수있다. 먼저 불을 켜고 쥐를 숙련된 회의실에 놓습니다. 집게를 사용하여 상자 앞의 도달 슬롯을 통해 펠릿을 잡습니다.
쥐가 집게에서 세 개의 펠릿을 먹을 수 있도록 합니다. 쥐가 포셉에서 펠릿을 먹고 쥐가 11 발 중 가장 많은 1발로 펠릿에 도달할 때까지 반복하려고 할 때 펠릿을 다시 당기십시오. 다음으로, 펠릿 전달 막대를 도달 슬롯 의 측면과 쥐가 선호하는 발에 정렬합니다.
배달 봉에 펠릿을 놓습니다. 그런 다음 포셉을 사용하여 펠릿으로 쥐를 미끼로 하지만 쥐를 배달 막대쪽으로 향하여 발이 막대의 펠릿에 닿도록 합니다. 쥐가 미끼를 하지 않고 배달 봉에 10을 도달하려고 시도한 후, 쥐를 다음 단계로 전진시키게 한다.
다음으로, 쥐의 발 선호도에 따라 펠릿 전달 막대를 배치하고 2개의 위치를 설정합니다. 액추에이터 리모컨을 사용하여 펠릿 전달 로드의 높이 위치를 설정합니다. 배달 로드가 올바른 높이에 있으면 표시등이 빨간색으로 깜박일 때까지 원하는 숫자를 길게 누릅니다.
그런 다음 쥐를 챔버에 놓고 쥐를 펠릿으로 등에 미끼로 두십시오. 쥐가 챔버 뒤쪽으로 충분히 움직이면 자동화 된 버전이 실행되는 경우 적외선 빔을 부러 뜨릴 수 있으며 펠릿 전달 막대를 세 위치로 이동합니다. 마지막으로, 쥐가 펠릿에 도달할 때까지 기다린 다음 펠릿 전달 막대를 다시 두 위치로 이동합니다.
두드리면 배달 봉에 새 펠릿을 놓습니다. 쥐가 하나에 시작될 때까지 점차적으로 쥐를 미끼이러한 단계를 반복, 미끼없이 펠릿을 요청하기 위해 뒤로 이동, 두, 즉시 뒷면에 펠릿을 요청 한 후 전면으로 이동. 쥐가 이 작업을 10번 수행한 후 자동화된 작업에 대한 교육을 시작합니다.
자동화된 시스템을 설정하려면 챔버의 조명을 켜고 펠릿 저장소를 다시 채웁니다. 쥐의 발 선호도에 따라 펠릿 전달 막대를 배치합니다. 액추에이터 위치가 올바르게 설정되어 있는지 확인합니다.
다음으로 컴퓨터를 켜고 숙련된 도달 프로그램을 엽니다. 제목 아래에 쥐 ID 번호를 입력하고 손 드롭다운 메뉴에서 발 기본 설정을 선택합니다. 동영상의 저장 경로를 지정합니다.
그런 다음 세션 시간과 최대 비디오 수를 설정합니다. 펠릿 리프트 지속 시간도 설정하고 조기 도달 페널티를 가능하게합니다. 다음으로 교정 이미지를 가져 가려면 도움의 손길을 도달 챔버 내부에 배치하고 악어 클립을 도달 슬롯을 통해 찌르십시오.
악어 클립으로 도달 슬롯 앞에 큐브를 잡습니다. 그런 다음 큐브를 배치하여 빨간색 면이 상단 미러, 왼쪽 미러의 녹색 면 및 오른쪽 미러의 파란색 면에 나타나게 합니다. 행동 프로그램에서 ROI 임계값이 매우 큰 값으로 설정되어 있는지 확인합니다.
실행 버튼을 클릭하고 카메라 초기화 버튼이 녹색으로 바뀌면 비디오 수집을 시작합니다. 칼 모드를 클릭한 다음 Cal 이미지를 클릭하여 이미지를 찍습니다. 큐브를 약간 이동하고 다른 이미지를 가져갑니다.
총 세 개의 이미지를 다시 반복합니다. 마지막으로 중지를 클릭하여 프로그램을 중지한 다음 중지 기호 버튼을 클릭합니다. 상자에서 도움의 손길과 큐브를 제거합니다.
교정 이미지가 그날 촬영 된 후 행동 챔버에서 아무것도 충돌하지 않도록주의하십시오. 첫째, 숙련 된 도달 챔버에 쥐를 배치합니다. 프로그램을 실행하려면 흰색 화살표를 클릭합니다.
그런 다음 x 오프셋, y 오프셋, ROI 너비 및 ROI 높이를 조정하여 발 감지를 위한 ROI의 위치를 설정합니다. ROI를 측면 미러에 배치하여 발의 dorsum을 도달 슬롯 바로 앞에 표시하고 시작하려면 시작합니다. 쥐가 도달하지 않는 동안 라이브 ROI 트리거 값이 0과 1 사이 진동될 때까지 낮은 ROI 임계값값을 조정합니다.
그런 다음 ROI 임계값을 코 찌르기 동안 라이브 ROI 트리거 값보다 훨씬 크고 쥐가 닿을 때 살아있는 ROI 트리거 값보다 낮도록 설정합니다. 쥐가 닿을 때 비디오가 지속적으로 트리거될 때까지 조정하지만 슬롯을 통해 코를 찌를 때는 조정하지 않습니다. 처음 몇 번의 시험을 모니터링하여 모든 것이 올바르게 작동하는지 확인합니다.
펠릿을 요청하기 전에 쥐가 도달하면 초기 도달 수 증가를 관찰하십시오. 펠릿을 요청한 후 쥐가 도달하면 비디오 복사본을 빈 파일로 저장하는 동안 동영상 번호가 증가합니다. 마지막으로 세션 시간 또는 최대 동영상 수에 도달하면 중지 사인 버튼을 누릅니다.
결과는 20 일 후에, 쥐가 숙련된 도달 작업을 취득한다는 것을 표시합니다. 여기서는 단일 세션의 도달 궤적이 표시됩니다. 이는 프레젠테이션의 용이성을 위한 초기 발 발전만을 나타냅니다.
또한 발 감지 트리거가 정확하게 설정되지 않으면 발이 도달 슬롯을 위반하여 움직임에 도달하는 동안 개입이 트리거될 때 가변성을 유발할 수 있는 프레임에 상당한 가변성이 있습니다. 동물을 주의 깊게 다루는 것 이외에는 이 프로토콜에서 예방 조치가 취해지지 않습니다. 적절한 순간에 동영상이나 기타 내정간섭이 트리거되도록 ROI 임계값을 올바르게 설정하는 것이 가장 중요합니다.
이 방법은 광유전학, 칼슘 화상 진찰 및 운동 장애 병리학에 기초한 질문을 해결할 수 있는 유전 모형과 같은 몇몇 그밖 기술과 결합될 수 있습니다. 이 기술은 상세한 도달의 상관 관계를 허용하고 생리적 기록 또는 내정간섭과 운동학을 파악하여 연구원이 신경 회로 변화와 함께 운동이 어떻게 변화하는지뿐만 아니라 대답할 수 있게 합니다.
