척추 헤미섹션은 우리가 개발한 기관차 스케일로 포착될 수 있는 정량화가능하고 이상적인 재현 가능한 운동 적자를 생성합니다. 이 기술의 주요 장점은 병변의 선택성과 재현성이며, 이는 동물 간의 행동 표현형의 감소된 가변성으로 이어집니다. 마취 된 성인 쥐에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, T-6에서 T-10 척추를 덮쳐 면도 피부에 2.5 센티미터 절개를하고 무딘 가위를 사용하여 피부와 피상적 인 지방을 후퇴시킵니다.
무딘 해부 가위와 자체 유지 리트랙터를 사용하여 복역 근육을 분리하고 T-7의 등쪽 측면에 T-9 척추를 삽입하고 미세 한 집게와 면 기울어진 어플리케이터를 사용하여 남은 조직을 제거하여 척추 공정과 척추 라미나를 노출시하십시오. 스테레오 현미경 아래에 속도를 배치하고 조심스럽게 T-7 및 T-8 척추에 양측 측면을 잘라 섬세한 뼈 트리머를 사용합니다. 메스를 사용하여 T-8과 T-9 척추 라미네 사이의 등쪽 결합 조직에서 1mm 피상적 컷을 만들고 기본 코드를 손상시키지 않도록주의하고 뼈 트리머를 사용하여 T-8 척추의 척추 과정을 제거하십시오.
T-7 가루 공정에 조심스럽게 고정된 곡선 형 혈전 집게로 T-8 라미네의 caudal 끝을 약 20도 회전시키고 T-8 라미나 아래에 뼈 트리머를 삽입합니다. 척수 노출 과정에 척추 라미나의 왼쪽과 오른쪽에 상처를 반복하여 라미나(lamina)를 따라 연장되는 중간라인을 만듭니다. 노출된 척추 운하에 2%리도카인의 100 마이크로리터를 드립하고 미세 한 집게와 iridectomy 가위를 사용하여 T-8 척추 세그먼트를 덮어 드는 듀라를 제거합니다.
리도카인 투여를 노출된 코드로 반복하고 노출된 T-7에서 T-9 척추 사이에 확장되는 가시 공정 사이에 생성된 중심선의 시각화에 의해 코드의 중간선을 식별한다. 미세 한 집게를 사용하여 척수를 안정화, 복부 측에 전방 척추 동맥을 절단하지 않도록주의, 동물의 한쪽으로 중간라인에서 척수를 반증해 해부 칼을 사용합니다. iridectomy 가위를 사용하여, 조심스럽게 복부 측사력이 적절하게 변제되고 멸균을 배치하기 위해 척수의 병변 측에 남아있는 조직을 잘라, 척수 위의 노출 된 구멍에 약 6 ~ 2 밀리미터 식염수 에 젖은 혈전 스폰지.
그런 다음 4-O 폴리글락틴 910 봉합사를 사용하여 절개 부위 주위의 근육 층과 피부를 닫고 완전한 회복이 끝날 때까지 모니터링할 수 있는 열램프 아래따뜻한 환경에 쥐를 배치합니다. 행동 테스트를위한 적절한 실험 시점에서, 쥐가 경기장에 습관화 된 후, 비디오 녹화를 시작하고 운동 활동을 장려하기 위해 희미한 조명 조건하에서 경기장의 중앙에 쥐를 배치합니다. 쥐가 적어도 4분 동안 탐험할 수 있도록 하여, 쥐가 20초 이상 고정되어 있어 운동을 촉진할 때 다시 경기장 중앙으로 이동합니다.
그런 다음, 기록된 테스트 세션의 운동 성능을 점수. 관절 사지 운동의 경우, 발목, 무릎 및 엉덩이를 위해 자발적인 운동 중에 뒷다리 관절 운동을 정상, 경미한 또는 결석으로 따로 채점하십시오. 체중 지원을 위해, 쥐가 고정되어 있을 때뿐만 아니라 활성 운동 중에 사지가 지면에 있을 때 장전된 체중을 수축하고 지원하는 뒷다리 족장 근육의 능력을 평가한다.
숫자 위치의 경우 쥐가 고정되어 있는 동안 및 운동 중에 뒷다리 자릿수의 위치를 평가합니다. 스텝 파라미터는 쥐가 초기 접촉 시 힌드래그 발 배치의 방향을 평가하고 스테핑 중 스윙 단계의 유동성 이외에 지면에서 들어 올려서 스테핑 하는 동안 의 체중을 지원할 수 있는 경우에만 스테핑 파라미터를 완료한다. 테스트 중에 4개의 연속 단계가 발생하고 사지가 체중을 적극적으로 지원할 수 있는 경우에만 앞다리/뒷다리 조정 매개변수를 완료하십시오.
운동 중에 꼬리 위치를 위 또는 아래로 평가합니다. 그런 다음 각 매개 변수의 개별 점수를 추가하여 각 뒷다리에 대한 총 점수를 최대 20점까지 제공합니다. 실험군 간의 병변 크기를 평가하고 비교하기 위해 척수의 총 단면의 백분율로 병변의 최대 면적은 척수 섹션의 조직학적 염색과 함께 쉽게 계산될 수 있다.
예를 들어, 쥐 들 간에 공유되는 최대 병변 영역의 비율의 오버레이를 가진 왼쪽 헤미코드의 대표적인 병변은 단면 코드 영역의 약 47%의 평균 병변 크기를 입증하였다. 왼쪽 중간 절 후 처음 5 주 동안 그대로 상태에서 운동 성능이 이러한 대표적인 변화는 수술 후 처음 3 주 동안 동물의 왼쪽 뒷다리에 있는 운동의 중요한 손상을 보여줍니다. 운동 수준에 대한 개선은 2 주 후 절차에 의해 오른쪽 뒷다리에서 관찰된다.
기억해야 할 가장 중요한 것은 수술 후 동물 관리 및 모니터링을 위한 척추 중진선을 정확하게 식별하고 성공적인 프로토콜에 필수적이라는 것입니다. 이 행동 평가는 운동 경기 회복에 대한 특정 관심 문제를 해결하기 위한 전문 테스트로 보완하기 위한 상부 paretrecorvial 지수를 선별하는 이상적인 프로토콜을 제공합니다.
