비장 이식의 마우스 모델은 염증성 질환에서 국부 및 전신 면역 반응의 조절에서 비장의 역할을 발견할 수있는 좋은 기회를 제공합니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 자생 마우스를 사용하여 비장 이식이 비장의 운명, 장수 및 기능을 확인할 수 있다는 것입니다. 시술을 시작하기 전에, 수술 플랫폼에 멸균 일회용 커튼을 배치하고 마취 기증자 마우스에 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인합니다.
전체 복부 부위에서 모발을 면도하고 마우스를 6~10배배율로 수술 현미경으로 멸균 수술 플랫폼에 배치합니다. 알코올 준비 패드로 노출된 피부를 살균하고 수술 용 테이프로 팔다리를 고정하십시오. 3~4센티미터 의 중간피부 절개를 통해 복부를 입력하여 증정에서 xyphoid 과정에 연결합니다.
피부 혈관을 소작하고 더 나은 노출을 달성하기 위해 양쪽의 측면 복부에 절개를 확장합니다. 멸균 면봉을 사용하여 내장을 복부 의 오른쪽 측면으로 이동하여 비장을 노출시키고 멸균 저온 소생을 사용하여 비장에 부착 된 짧은 위 정맥을 소생시합니다. 비장 위에 섭씨 37도식식염수에 담근 멸균 거즈 조각을 넣고 췌장 조직에서 포털 정맥을 분리하고 분리하고 동원합니다.
포털 정맥의 가지를 시연한 대로 리게이트합니다. 비장 정맥에서 포털 정맥 탈장 주위에 봉합사를 놓고 비장을 오른쪽으로 뒤집어 대동맥과 비장 동맥을 체강 트렁크에 노출시하십시오. 대동맥 의 고장 비장 동맥을 해부하고 동원하고 대동맥 근위 주위에 봉합사를 체강 동맥에 배치한다.
100개의 국제 헤파린 유닛을 열등한 베나 카바 또는 IVC에 주입하여 전신을 헤파린화합니다. 3 분 후, 대동맥근에 있는 간 및 위 동맥을 체강 동맥에 리게이트합니다. 포탈 정맥을 트랜스펙트하고 전신을 4도의 밀리리터로 퍼펙트하여 복부 대오르타 탈반에서 체강 트렁크에 이르기까지 식염수를 분리합니다.
비장 이식편을 수집하고 비장 정맥의 세그먼트와 췌장 조직의 작은 부분과 함께 포털 정맥에서 연관된 대동맥 체강 비장 세그먼트로 블록을 수집합니다. 그런 다음 섭씨 4도의 5 밀리리터에서 이식편을 보존하십시오. 수술 부위가 기증자를 위한 것으로 준비된 후 중간선 절개를 통해 받는 복부를 입력하고 비장 정맥과 동맥을 결집하여 받는 사람 원어민 비장을 제거한다.
장 조직을 37도 에 담근 거즈로 덮고 창자를 왼쪽으로 조심스럽게 움직입니다. IVC에서 frarenal 대동맥의 요추 가지를 해부하고 리게이트하고 IVC의 관음대동맥을 교차 클램프로 두 개의 4 밀리리터 미세 혈관 클램프로 분리합니다. 11-0 나일론 봉합사를 관금 대자를 통해 놓고 혈관을 철회하여 미세 가시와 타원형 대뇌절제술을 생성할 수 있습니다.
30 게이지 바늘을 사용하여 IVC를 관통하여 타원형 독절제술을 만들고 기증자 포털 정맥의 길이까지 개방을 확장합니다. 대동맥과 IVC를 500 마이크로리터의 혈관 내 혈액 또는 혈전을 제거하고 기증자 비장 이식편을 받는 복부의 오른쪽 측면에 놓습니다. 기증자 대동맥 커프와 포털 정맥을 주의 깊게 식별합니다.
혈관이 뒤틀리지 않는 것을 확인한 후 비장 접목을 섭씨 4도에 담근 거즈로 덮습니다. 2개의 11-0 스테이 봉합사를 사용하여, 기증자 대동맥 근동 및 말단 정점에 기증자 대동맥 근동을 연결하고 기증자 대동맥 근근과 수령인 의 전방 벽 사이 연속 11-0 나일론 봉합사의 2-3 바이트와 해부학을 만듭니다. 비장 이식편을 수령인의 왼쪽으로 돌리고 기증자 대동맥 근동과 받는 사람 대동맥 절제술의 후방 벽 사이의 해부학을 만듭니다.
기증자 포털 정맥과 받는 사람 IVC 사이의 정맥 해부학을 수행하여 각 측면에 연속 봉합사의 4 ~5 바이트를 수행합니다. 먼저 혈관 루멘 내의 후방 벽을 봉합한 다음 동일한 봉합사를 사용하여 전방 벽을 닫습니다. IVC 외부의 아래 쪽 모서리에 매듭을 놓으면서 해부학을 완료합니다.
이제 혈관 클램프를 방출하고 비장 색상이 회복 될 때까지 출혈을 탐포네이드멸 면봉을 사용합니다. 5-0 합성 흡수 성 비릴 봉합사로 복부를 연속 패턴으로 닫고 5-0 나일론 봉합사로 피부 층을 중단 된 패턴으로 닫습니다. 그런 다음 따뜻한 식염수 250마이크로리터를 4개의 분리된 위치에 피하시키고 동물이 홈 케이지로 이송하기 위한 충분한 의식을 되찾을 때까지 모니터링을 통해 처음 몇 시간 동안 30도 온도 제어 인큐베이터에서 마우스를 따뜻하게 한다.
헤마톡클린과 비장 동위 이식의 요신은 이식 후 1일과 7일 비장 동소 이식의 건축이 첫 수술 후 주 동안 그대로 남아 있음을 드러낸다. 이식 후 기증자 비장 세포 이동을 조사하는 유동 세포 분석은 비장 세포의 약 50%가 이식 후 하루에 파생된 기증자이며 약 46%가 유도된 것으로 나타났다. 이식 후 7일 후, 기증자 유래 백혈구는 전체 비장의 약 32%를 차지하며, 수령인 유래 세포는 약 53%까지 증가하여 1일 초이르림프절, 혈액 및 골수로 이주하여 최소한 7일 동안 고유한 치머라세포를 생성하는 독보적인 치메라세포를 생성합니다.
비장 기증자로 유전자 변형 노크 마우스를 사용하면 비장 세포 파생 중재자 또는 질병 프로세스의 주요 신호 경로의 역할에 대한 조사를 허용합니다. 이 모형은 병원체, 상해, 염증, 또는 이식 거부에 응하여 비장 세포 집단의 기계장치를 탐구하기 위한 강력한 공구일 수 있었습니다.
