Name: preparation steps for measurement of reactivity in mouse retinal arterioles ex vivo
Uploaded: 2018-05-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo at JoVE.com

이 작품은 도이치 Ophthalmologische 분야 (개)와 에른스트 und Berta Grimmke 재단에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

이 연구의 실험 절차에 의해는 동물 관리 위원회의 라인란트-Palatinate, 독일 승인 되었다. 동물 보호 안과에서 동물의 사용에 대 한 비전과 안과 (ARVO) 성명에서 연구 및 비전 연구 기관 지침 및 협회에 맞 췄 나. 동물 동물 실험에 대 한 EU 지침 2010/63/EU에 따라 치료 했다. 남성 C57BL/6J 쥐 (The 잭슨 실험실, 바 하버, 나, 미국) 3-4 개월을 세는 실험을 위해 사용 되었다. 동물 표준 조건 (온도 23 ± 2 ° C, 습도 범위 55 ± 10% 및 12 h 명암 주기), 유 숙 했다 그리고 표준 마우스 차 우와 물 광고 libitum에 접근 했다.
1입니다. 마우스 망막의 분리
<ol><li>해 부 악기를 준비 테이블에 놓고 모든 악기 가능 빠른 준비 완료 확인 합니다.</li>
	<li>CO2 흡입에 의해 마우스를 희생.</li>
	<li>스틸가 위 마우스를 목을 벨, 두개골 sagitally가 위의 동일한 쌍을 사용 하 여 두 개의 반쪽으로 잘라 고 피부와 뇌 눈이 위 (그림 1)를 사용 하 여 제거 합니다.</li>
	<li>눈이 위를 사용 하 여 궤도 뼈를 떠나 두개골 뼈를 잘라.</li>
	<li>얼음 처럼 차가운 Krebs Henseleit 버퍼를 포함 하는 해 부 접시에 궤도 전송 합니다.</li>
	<li>얼음에 해 부 접시를 유지 하거나 변경할 버퍼 마다 10 분.</li>
	<li>눈이 위를 사용 하 여 궤도 뼈를 잘라내어 눈 지구 궤도 조직 유형 4 정밀 핀셋과 학생 욕실이 봄이 위 (그림 2)를 사용 하 여 함께 제거.</li>
	<li>부드럽게 Harderian 선, 결합 조직, 그리고 안구 근육 유형 5 정밀 핀셋과 안과 동맥의 주요 분기를 손상 하지 않도록 주의 복용 욕실이 capsulotomy가 위를 사용 하 여 제거 합니다.</li>
	<li>궤도 안과 동맥의 지점과 결국 10-0 나일론 봉합 (그림 3)를 사용 하 여 안과 동맥의 주요 지점의 인접 끝 선.</li>
	<li>10 s 사용 하 여 입력 4 정밀 핀셋에 대 한 70% 에탄올을 포함 하는 배양 접시에 눈 세계를 전송 합니다. 해 부 접시에 다시 눈 지구를 놓고 신선한 Krebs 솔루션으로 버퍼를 대체 합니다. 각 막 에탄올 노출 후 약간 흰 나타납니다.</li>
	<li>주변 막 30 게이지 바늘으로 찔린 고 욕실이 capsulotomy가 위를 사용 하 여 각 막 해 부. 부드럽게 잘라 아이리스 조직, 맥락 막과 망막 사이 욕실이 capsulotomy가 위 한 날카로운 시점 놓고 맥락 막 및 공 막 잘라. (그림 4) 시 신경 주위 scleral 조직 일부를 남겨 주세요.</li>
</ol>2. 망막 관류 챔버에 장착
참고: 망막 되 실험을 위해 사용 하는 관류 챔버는 집에서 만든. -및 유출 관 (그림 5)와 함께 투명 한 저수지 그것에 의하여 이루어져 있다. 실리콘 튜브의 한쪽 끝은 histoacryl 접착제와 3 방향 자 지에 연결 된 반대쪽 챔버의 바닥에 붙어 됩니다. 3 방향 자 지에 신선한 Krebs 버퍼를 포함 하는 주사기를 연결 하 고 버퍼와 튜브를 작성.
<ol><li>바늘 홀더를 가진 유리 제 micropipette 고 관류 챔버의 하단 튜브의 끝에 그것을 밀어. 다음 100 µ m 직경의 팁을 얻기 위해가 위 종류 4는 micropipette의 팁을 휴식.</li>
	<li>micropipette 끝에 집중 하 고 통해 주사기 튜브에 연결 그것을 플러시. 모 세관 파편에 의해 가려진 하지 주의. 폐색, 경우 그것을 제거 하 고 튜브를 플러시 다른 micropipette 삽입.</li>
	<li>차가운 Krebs 버퍼 관류 챔버와 스테레오 현미경 챔버를 넣어.</li>
	<li>관류 챔버에 투명 한 플라스틱 플랫폼을 놓습니다. 이 플랫폼은 시 신경 및 눈 동맥에 대 한 1.8 m m 폭의 들여쓰기 하 고 1.6 m m 직경의 2 개의 강철 와이어에 배치 됩니다. 다음, 2.8 m m 내경 및 플랫폼에 4.0 m m 외부 직경의 스테인레스 스틸 반지 장소.</li>
	<li>숟가락을 사용 하 여 주의 해 부 챔버 관류 챔버로 망막 시 신경 및 연결 된 안과 동맥 전송. 이 단계는 가능성을 방지 하기 위해 중요 한 조직의 스트레칭으로 실험에 해로운 수 있습니다.</li>
	<li>안과 동맥의 근 위 끝의 sutured 부분을, 장소는 micropipette에 10-0 나일론 봉합의 두 미리 형성한 루프 잘라내어는 micropipette와 안과 동맥을 cannulate. Micropipette (그림 6)에 동맥 고 괜 찮 아 요-포인트-핀셋을 사용 하 여 투명 한 플랫폼에 망막을 놓습니다.</li>
	<li>부드럽게 두 괜 찮 포인트 핀셋으로 앞쪽 렌즈 capsula을 열고 눈물, 렌즈를 꺼내와 microscissors를 사용 하 여 전체 렌즈 capsula를 잘라.</li>
	<li>그 후, 망막 시 신경에 동위 플에서 절반 거리에 4 개의 방사형 절 개를 확인 하 고 바닥에 그것을 해결 하기 위해 망막에는 스테인레스 스틸 반지를 배치. 망막은 이제 실험 (그림 7)에 대 한 준비.</li>
</ol>3. 실험에 대 한 망막 Arterioles의 준비
<ol><li>가벼운 현미경 관류 챔버를 놓습니다. 목표는 100 X 물 침수 렌즈입니다.</li>
	<li>Pericyclic 펌프는 두 개의 튜브에 대 한에-및 아웃-flow를 연결 하 고 95% O2 산소 하 고 37 ° c.에 5% CO2 탄산 Krebs 버퍼와 챔버를 순환 100 사이 120 mL/min 유량을 사용 합니다.</li>
	<li>저수지 실리콘 호스를 통해 3 방향 자 지에는 micropipette에 연결 된 실리콘 튜브를 연결 합니다. 그런 다음 Krebs 버퍼 높이 50 mm Hg에 해당 하는 저수지를 채울 하지만 3 방향 자 지 아직 열지 마십시오.</li>
	<li>현미경과 망막 표면에 초점의 목표 통해 보세요. 혈관 또는 붉은 혈액 세포에 대 한 검색. 혈관은 완전히 붕괴, 그래서 때로는 일부 붉은 혈액 세포를 볼 수 있습니다만 가능 하다.</li>
	<li>혈관 발견 되 면 그것에 집중 하 고 3 방향 자 지를 엽니다. 혈관의 직경은 즉시 증가 해야 하 고 붉은 혈액 세포 이동 중 배, 한 되는 경우 또는 centripetally는 venule 경우. arterioles 직경 venules의 순서에 비해 작은 수 있습니다.</li>
	<li>잘 보이는 벽 혈관 발견 되 면 그것은 30 분 (그림 8)의 재래식 기간 뒤 실험에 대 한 사용할 수 있습니다. 재래식 기간 동안는 arterioles 결과 luminal 직경 감소 10% 미만에 약한 내장 음색을 개발 합니다.</li>
</ol>4. 실험 수행
<ol><li>목욕 솔루션에 추가 하 여는 thromboxane 모방 9,11-미치기-9α, 11α methanoepoxy 스타 글란 딘 F2α (U46619)와 혈관의 생존 능력을 테스트 합니다. 이 에이전트는 ≥ 10의 농도에서 휴식 하는 직경에서 약 50% 마우스 망막 arterioles 수축-6 M.</li>
	<li>일단 그릇은 가능한 확인, 순환 펌프에 의해 목욕에서 길 항 제를 세척 하 고 목욕으로 신선한 Krebs 버퍼를 공급.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Toda, N., Nakanishi-Toda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide:+ocular+blood+flow,+glaucoma,+and+diabetic+retinopathy.">Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy.</a> Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).</li><li>Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography-based+retinal+vessel+analysis+for+the+evaluation+of+hypertensive+vasculopathy.">Optical coherence tomography-based retinal vessel analysis for the evaluation of hypertensive vasculopathy.</a> Acta Ophthalmol. 93 (2), e148-e153 (2015).</li><li>Cherecheanu, A. P., Garhofer, G., Schmidl, D., Werkmeister, R., Schmetterer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+perfusion+pressure+and+ocular+blood+flow+in+glaucoma.">Ocular perfusion pressure and ocular blood flow in glaucoma.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (1), 36-42 (2013).</li><li>Faraci, F. M., Sigmund, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+biology+in+genetically+altered+mice+:+smaller+vessels,+bigger+insight.">Vascular biology in genetically altered mice : smaller vessels, bigger insight.</a> Circ Res. 85 (12), 1214-1225 (1999).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Retinal+Blood+Flow+Using+Fluorescently+Labeled+Red+Blood+Cells.">Measurement of Retinal Blood Flow Using Fluorescently Labeled Red Blood Cells.</a> eNeuro. 2 (2), (2015).</li><li>Guevara-Torres, A., Joseph, A., Schallek, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label+free+measurement+of+retinal+blood+cell+flux,+velocity,+hematocrit+and+capillary+width+in+the+living+mouse+eye.">Label free measurement of retinal blood cell flux, velocity, hematocrit and capillary width in the living mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 7 (10), 4229-4249 (2016).</li><li>Schallek, J., Geng, Y., Nguyen, H., Williams, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+topography+of+retinal+pericytes+in+the+living+mouse+retina+using+in+vivo+adaptive+optics+imaging+and+ex+vivo+characterization.">Morphology and topography of retinal pericytes in the living mouse retina using in vivo adaptive optics imaging and ex vivo characterization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8237-8250 (2013).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtype+mediating+cholinergic+vasodilation+in+murine+retinal+arterioles.">Identification of the muscarinic acetylcholine receptor subtype mediating cholinergic vasodilation in murine retinal arterioles.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (10), 7479-7484 (2011).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+murine+ophthalmic+arteries.">Functional role of alpha1-adrenoceptor subtypes in murine ophthalmic arteries.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4795-4799 (2011).</li><li>Bohmer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alpha(1)B+-adrenoceptor+subtype+mediates+adrenergic+vasoconstriction+in+mouse+retinal+arterioles+with+damaged+endothelium.">The alpha(1)B -adrenoceptor subtype mediates adrenergic vasoconstriction in mouse retinal arterioles with damaged endothelium.</a> Br J Pharmacol. 171 (16), 3858-3867 (2014).</li></ol>

저자 아무 경쟁 금융 관심사 있다.

마우스 망막에 혈관 반응의 측정은 망막 혈관의 작은 크기 때문에 도전 이다. 제시 기법으로 망막 arterioles 전송된 가벼운 현미경 검사 법에 의해 시각화 됩니다. 이 격리 된 망막은 반투명 하기 때문에 가능 하다. 기술의 장점은 높은 광학 해상도입니다. 계산된 공간 해상도 11 픽셀 / µ m 이다. 그러나, 하얀 빛을 사용 하 여이 광 시스템에 대 한 실제 해상도 Abbe 회절 한계에 의해 설명 된다 200, 300 nm 사이입니다. 마우스 망막 arterioles의 첫 번째 분기에는 20 ~ 30 μ m의 내부 직경, 이후 약 1%의 직경 변화가이 시스템으로 알 수 있습니다. 작은 망막 arterioles5,,67시각화에 추가 기술 장치 또는 다른 연구에서 보고 형광 염료의 필요가 있다. 기술의 단점은 훈련 된 수 사관 90 ~ 120 분 사이 긴 준비 시간입니다. 준비 시간 180 분을 초과 하면 내 피 기능 감쇠 될 시작 합니다.
이 기술에는 여러 주요 중요 한 단계가 있습니다. 첫째, 철저 하 게 모든 retrobulbar 동맥 분기를 위하여 중요 하다. 결 찰 완료 하지 않으면 망막 arterioles 누설 때문 가압 하지 것입니다. 둘째, 10에 대 한 에탄올에 침수 눈 세계를 열기 전에 s은 안과 동맥의 평활 근 반응성을 비활성화 하는 것이 중요. 우리가 이전 10에 대 한 그 immersing 시연 s 70% 에탄올에 완전히 비활성화 안과 동맥 평활 근8. 대조적으로, 망막 arterioles 직접 의해 영향을 받을 에탄올, 안구 벽에 의해 보호 되기 때문에 가능성이 있습니다. 이 단계를 생략 하면 안과 동맥에서 직경 변화 망막의 관류의 영향을 미칠 수 있습니다. 메모의, 안과 동맥의 반응성 망막 arterioles 동일한 주 작동 근9,10에 대 한 응답의 현저 하 게 달라질 수 있습니다. 셋째, 안과 동맥의 비틀림을 하지 마십시오. 특히 망막 준비 플랫폼에 탑재 하는 동안 안과 동맥 수 있습니다 될 트위스트, 폐색 루멘의 결과로. 또한, 신중 하 게 유리 모 세관의 끝의 망막 arterioles 가압 수 있도록 차단 되지 확인 합니다. 아 세 틸 콜린에 대 한 응답 되었다 약한 농도 응답 곡선 이상 세 번 반복 하면 관찰 하기 때문에 동일한 망막 준비에 3 개 이상의 연속 농도-응답 곡선을 수행을 하지 하시기 바랍니다. 그러나, 있을 수 있습니다 에이전트에 따라 농도 응답 곡선의 반복성에 관한 차이 적용 하 고, 따라서, 개별적으로 테스트 해야 합니다.
우리는 적용 하는 약리 에이전트 extraluminally intraluminal 관류 서보 제어 펌프를 사용 하는 것도 가능 하지만 우리의 연구에. 기술은 생쥐와 쥐를 포함 하 여 작은 실험실 동물의 망막 혈관 반응성의 지역 메커니즘에 대 한 측정을 허용, 이후 유전자 변형된 동물을 사용 하 여 유전자를 대상으로 한 기술의 이점은이 방법으로 액세스할 수 있습니다. .

망막 관류에 장애 당뇨병 성 망막 증, 고혈압 성 망막 증, 녹 내장1,2,3등 다양 한 안구 질환의 병 인에 연루 되었습니다. 따라서, 망막 혈관 반응성을 측정 하기 위한 연구는 이러한 질병의 병 태 생리학을 이해 하는 것이 중요 하 고 접근 새로운 치료를 개발 하.
Murine 게놈에서 유전자 조작의 가능성으로 인해 마우스4심장 혈관 시스템 연구에 대 한 널리 사용 되는 동물 모델 되고있다. 그러나, 망막 혈관 (≤ 30 µ m)의 작은 크기 때문에 측정 마우스 망막 혈관 반응성의 도전 이다. 예를 들어 stereomicroscopic vivo에서 측정을 위한 그들의 광학 해상도 제한 기술과 따라서 ≤ 30 µ m 직경 장비 될 때 보다는 더 적은의 작은 피에 지름 또는 혈액 흐름에 변화를 정확 하 게 탐지를 허용합니다 confocal 현미경 또는 적응 광학 스캔 빛 Ophthalmoscope5,6형광 염료를 사용 하 여 같은 추가 정교한 장치 합니다. 또한, 해석 vivo 측정 지역 식별 목적으로 조직 혈압과 retrobulbar 혈관의 영향 변화 신호 망막 혈관에서 메커니즘 마 취약에 의해 혼동 될 수 있습니다.
따라서, 우리는 ex vivo높은 광학 해상도와 마우스 망막 혈관의 반응을 측정 하는 방법을 개발 했다. 여기에 소개 하는 기술 망막 arterioles 통해 전송 가벼운 현미경 검사 법의 시각화 수 있습니다. 이 메서드를 사용할 수 있는 또한 쥐에, 안구 혈관 연구에서 기술을 대상으로 하는 유전자의 장점에 대 한 액세스를 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>Steel Scissors</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3576.1</td><td>1x 140 mm</td></tr><tr><td>Eye Scissors</td><td>Geuder</td><td>G-19390</td><td>1x straight, 10.5 cm</td></tr><tr><td>Precision tweezers, straight with fine tips</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>LH68.1</td><td>2x type 4</td></tr><tr><td>Precision tweezers, straight with extra fine tips</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>LH53.1</td><td>2x type 5</td></tr><tr><td>Vannas capsulotomy scissors</td><td>Geuder</td><td>19760</td><td>1x straight, 77 mm</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91501-09</td><td>1x curved,</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Barraquer&lt;/em&gt; Needle Holder</td><td>Geuder</td><td>G-17500</td><td>1x curved, 120 mm</td></tr><tr><td>Needle</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305128</td><td>1x 30 G</td></tr><tr><td>Glass Capillaries (for producing micropipettes)</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>9-000-1211</td><td>1x (1.2 x 0.8 mm; outer/inner diameter)</td></tr><tr><td>Nylon Suture</td><td>Alcon</td><td>198001</td><td>1x 10-0</td></tr><tr><td>Nunclon cell culture dish</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>153066</td><td>1x 35 mm diameter</td></tr><tr><td>Nunclon cell culture dish</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>172931</td><td>1x 100 mm diameter</td></tr><tr><td>Discofix C</td><td>Braun</td><td>16500C</td><td>10 cm</td></tr><tr><td>Histoacryl adhesive</td><td>B. Braun Surgical, S.A.</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pericyclic pump&amp;nbsp; (CYCLO II)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>EP76.1</td><td>1x</td></tr><tr><td>Vertical Pipette Puller Model 700C</td><td>David Kopf Instruments</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Microscope (Vanox-T AH-2)</td><td>Olympus</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Water immersion objective LUMPlanFL, 1.0 NA</td><td>Olympus</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Digital camera (TK-C1381)</td><td>JVC</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Perfusion chamber</td><td>self-made</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Drugs and Solutions&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>K928.4</td><td></td></tr><tr><td>Calcium chloride dihydrate (CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>5239.1</td><td></td></tr><tr><td>Kalium chloride (KCl)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>Kalium dihydrogen phosphate (KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3904.2</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium sulphate (MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>261.2</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>9265.2</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydrogen carbonate (NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>0965.3</td><td></td></tr><tr><td>&amp;alpha;-(D)-(+)- Glucose monohydrate</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6780.1</td><td></td></tr><tr><td>9,11-dideoxy-9&amp;alpha;,11&amp;alpha;-methanoepoxy prostaglandin F2&amp;alpha; (U-46619)</td><td>Cayman Chemical</td><td>16450</td><td></td></tr><tr><td>Acetylcholine chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6625-25G</td><td></td></tr></tbody></table>

preparation steps for measurement of reactivity in mouse retinal arterioles ex vivo

혈관 불충분 그리고 정상 망막 관류 변경 다양 한 시력을 위협 하 고 안구 질환, 당뇨병 성 망막 증, 고혈압 성 망막 증 및 녹 내장 등의 병 인에 대 한 주요 요인 중입니다. 따라서 망막 microvascular 준비 중추적인 도구 기본 병 태 생리 기계 장치 윤곽을 그리 다 생리 및 약리 연구 및 질병에 대 한 치료를 디자인 하는. 안과 연구에 마우스 모델의 광범위 한 사용에도 불구 하 고 망막 혈관 반응성에 대 한 연구는이 종에서 부족. 이 불일치에 대 한 주요 이유는 도전적인 격리 절차는 이러한 망막 혈관의 작은 크기 때문 ~ luminal 직경에서 ≤ 30 µ m. 기능 연구에 대 한 이러한 망막 microvessels의 직접 분리의 문제를 회피, 우리 ex vivo 마우스 망막 vasoactivity 근처 생리 적 조건 하에서 연구를 가능 하 게 절연 및 준비 기술 설립 . 현재 실험 준비 특히 마우스 망막 arterioles를 참조 것입니다, 하지만이 방법은 쉽게 사용할 수 있습니다 microvessels에 쥐에서.

U-46619 농도-종속 vasoconstrictor 응답 망막 arterioles 야생-타입 마우스 C57Bl/6J 배경에서 생산. 10-6 M의 농도에서 luminal 직경에서 감소는 휴식 직경에서 ≈50 %를 했다. 그림 9A 한 망막 되의 대표적인 농도-응답 곡선을 보여 줍니다. U46619와 preconstricted arterioles에 아 세 틸 콜린의 누적 관리 갖는 luminal 직경 농도 의존 증가 ≈25 %를 10-5 M, 그대로 혈관 내 피 (지표에 preconstricted 직경에서 그림 9B)입니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig1.jpg"> 그림 1: 마우스 두개골의 해 부. 잘린된 마우스 머리에 피부 노출 눈과 궤도 구멍 제거 됩니다. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig2.jpg"> 그림 2: 눈 글로브와 궤도 조직의 격리. 궤도 뼈는 눈이 눈 세계 retrobulbar 조직 함께 고 시 신경 신중 하 게 고립 되었다. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig3.jpg"> 그림 3: 눈 글로브와 안과 동맥의 준비. 일단 주변 궤도 조직 했다 괜 찮 아 요 microscissors로 해 부, 안과 동맥은 신중 하 게 노출 되 고 그들의 작은 가지는 10-0 나일론 monofilament 봉합 출혈. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig4.jpg"> 그림 4: 눈의 해 부. 망막을 시각화 하 고 sclera uvea 욕실이 capsulotomy가 위 해 부 했다. 시 신경 주위 조직 일부 scleral 안과 동맥의 손상을 방지 하기 위해 남아 있지 않았다. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig5.jpg"> 그림 5: 실시간 비디오 현미경 검사 법에 대 한 기관 실. 홈 챔버가 했다. 배양 접시는에서 및 밖으로 flow 튜브 100 m m 직경의 그것에 의하여 이루어져 있다. 튜브는 histoacryl 접착제로 붙어 있었다. 외부에서 산소와 탄산 Krebs Henseleit 버퍼는이 관을 통해 연동 펌프에 의해 유통 되었다. 실리콘 튜브의 한쪽 끝을 챔버와 3 방향 자 지에 연결 된 다른 쪽 끝의 아래쪽에 붙어 했다. 튜브의 끝에, 100 µ m의 끝을 가진 유리 제 micropipette cannulation 안과 동맥의에 대 한 봉사 삽입 되었다. 실리콘 튜브를 통해 안과 순환 50 mm Hg. 해당 수준에 Krebs 버퍼와 실리콘 튜브를 작성 하 여 가압은 <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig6.jpg"> 그림 6: 안과 동맥의 Cannulation. 안과 동맥 유리 제 micropipette와 cannulated 하 고 10-0 나일론 봉합으로 봉합 했다. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig7.jpg"> 그림 7: 안과 동맥의 Cannulation. 투명 플랫폼에 망막을 삽입 후 capsular 가방 렌즈 제거 되었다, 4 개의 방사형 절 개, 망막에 고 링 2.8 m m 내경 및 외경 4.0 m m의 스테인리스 b에 그것을 해결 하기 위해 망막에 배치 했다 ottom입니다. 망막은 다음 실험을 위해 준비 했습니다. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig8.jpg"> 그림 8: 망막 혈관의 시각화. 적혈구 내부와 모범적인 망막 되.
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig9.jpg"> 그림 9: 비디오 현미경을 사용 하 여 기능 연구. 단일 망막 되에서 대표 농도 응답 곡선. (Vasoconstrictor, U46619에 대 한 A) 농도 응답 곡선 (10-9 10-6 M를), 그리고 (B)에 대 한 endothelium 종속 vasodilator, 아 세 틸 콜린 (10 10-5 M를-8 ). <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56199/56199fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo at JoVE.com

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

많은 비전을 위협 눈 질병 장애 망막 microvessels와 연결 됩니다. 따라서, 망막 되 응답의 측정은 기본 병 태 생리 기계 장치를 조사 하는 것이 중요. 이 문서에서는 마우스 망막 되 격리와 혈관 직경에 vasoactive 물질의 효과 평가 하기 위해 준비에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 망막 Arterioles Ex Vivo 에서 반응의 측정을 위한 준비 단계

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

preparation-steps-for-measurement-reactivity-mouse-retinal-arterioles

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

7.1K 조회수.  University Medical Center of the Johannes Gutenberg University Mainz. 많은 비전을 위협 눈 질병 장애 망막 microvessels와 연결 됩니다. 따라서, 망막 되 응답의 측정은 기본 병 태 생리 기계 장치를 조사 하는 것이 중요. 이 문서에서는 마우스 망막 되 격리와 혈관 직경에 vasoactive 물질의 효과 평가 하기 위해 준비에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

비디오: Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). It is increasingly being recognized that several neurodegenerative diseases such as Alzheimer&#8217;s, multiple sclerosis, and amyotrophic lateral sclerosis present elements of vascular compromise. In addition, the most prominent causes of blindness in pediatric and working age populations (retinopathy of prematurity and diabetic retinopathy, respectively) are characterized by vascular degeneration and failure of physiological vascular regrowth. The aim of this technical paper is to provide a detailed protocol to study CNS vascular regeneration in the retina. The method can be employed to elucidate molecular mechanisms that lead to failure of vascular growth after ischemic injury. In addition, potential therapeutic modalities to accelerate and restore healthy vascular plexuses can be explored. Findings obtained using the described approach may provide therapeutic avenues for ischemic retinopathies such as that of diabetes or prematurity and possibly benefit other vascular disorders of the CNS.

The rodent retina has long been recognized as an accessible window to the brain. In this technical paper we provide a protocol that employs the mouse model of oxygen-induced retinopathy to study the mechanisms that lead to failure of vascular regeneration within the central nervous system after ischemic injury. The described system can also be harnessed to explore strategies to promote regrowth of functional blood vessels within the retina and CNS.

마우스 망막을 사용하여 중추 신경계의 혈관 재생의 평가

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

연구

신경과학

Using Adeno-associated Virus as a Tool to Study Retinal Barriers in Disease

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes (ILM), and in conjunction with astrocytes, pericytes and endothelial cells they establish the blood-retinal barrier (BRB). BRB limits material transport between the bloodstream and the retina while the ILM acts as a basement membrane that defines histologically the border between the retina and the vitreous cavity. Labeling M&#252;ller cells is particularly relevant to study the physical state of the retinal barriers, as these cells are an integral part of the BRB and ILM. Both BRB and ILM are frequently altered in retinal disease and are responsible for disease symptoms.
There are several well-established methods to study the integrity of the BRB, such as the Evans blue assay or fluorescein angiography. However these methods do not provide information on the extent of BRB permeability to larger molecules, in nanometer range. Furthermore, they do not provide information on the state of other retinal barriers such as the ILM. To study BRB permeability alongside retinal ILM, we used an AAV based method that provides information on permeability of BRB to larger molecules while indicating the state of the ILM and extracellular matrix proteins in disease states. Two AAV variants are useful for such study: AAV5 and ShH10. AAV5&#160;has a natural tropism for photoreceptors but it cannot get across to the outer retina when administered into the vitreous when the ILM is intact (i.e., in wild-type retinas). ShH10 has a strong tropism towards glial cells and will selectively label M&#252;ller glia in both healthy and diseased retinas. ShH10 provides more efficient gene delivery in retinas where ILM is compromised. These viral tools coupled with immunohistochemistry and blood-DNA analysis shed light onto the state of retinal barriers in disease.

To investigate the blood-retinal barrier permeability and the inner limiting membrane integrity in animal models of retinal disease, we used several adeno-associated virus (AAV) variants as tools to label retinal neurons and glia. Virus mediated reporter gene expression is then used as an indicator of retinal barrier permeability.

도구로 아데노 관련 바이러스를 사용하여 질병 망막 장벽을 연구하는

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes ...

의학

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An inflammatory factor, histamine, is demonstrated to compromise vessel integrity in the cultured retina through positive staining of IgG outside of the blood vessels. The effects of histamine itself and those of candidate drugs for potential treatments, such as lipoxin A4, are assessed using three parameters: blood vessel leakage via IgG immunostaining, activation of M&#252;ller cells via GFAP staining and change in neuronal dendrites through staining for MAP2. Furthermore, the layered organization of the retina allows a detailed analysis of the processes of M&#252;ller and ganglion cells, such as changes in width and continuity. While the data presented is with swine retinal culture, the system is applicable to multiple species. Thus, the model provides a reliable tool to investigate the early effects of compromised retinal vessel integrity on different cell types and also to evaluate potential drug candidates for treatment.

A low-cost, easy-to-use and powerful system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach induced by histamine. Blood vessel leakage, M&#252;ller cell activation and the continuity of neuronal processes are utilized to assess the damage response and its reversal with a potential drug, lipoxin A4.

치료를 위해 혈액 망막 장벽 위반 및 잠재적 인 마약을 평가하는 급성 망막 모델

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

Determination of Mitochondrial Respiration and Glycolysis in Ex Vivo Retinal Tissue Samples

Mitochondrial respiration is a critical energy-generating pathway in all cells, especially retinal photoreceptors that possess a highly active metabolism. In addition, photoreceptors also exhibit high aerobic glycolysis like cancer cells. Precise measurements of these metabolic activities can provide valuable insights into cellular homeostasis under physiological conditions and in disease states. High throughput microplate-based assays have been developed to measure mitochondrial respiration and various metabolic activities in live cells. However, a vast majority of these are developed for cultured cells and have not been optimized for intact tissue samples and for application ex vivo. Described here is a detailed step-by-step protocol, using microplate-based fluorescence technology, to directly measure oxygen consumption rate (OCR) as an indicator of mitochondrial respiration, as well as extracellular acidification rate (ECAR) as an indicator of glycolysis, in intact ex vivo retinal tissue. This method has been used to successfully assess metabolic activities in adult mouse retina and demonstrate its application in investigating cellular mechanisms of aging and disease.

Determination of Mitochondrial Respiration and Glycolysis in Ex Vivo Retinal Tissue Samples

Described here is a detailed protocol for performing mitochondrial stress assay and glycolytic rate assay in ex vivo retinal tissue samples using a commercial bioanalyzer.

전 비보 망막 조직 샘플에서 미토콘드리아 호흡 및 글리코리시스의 결정

Mitochondrial respiration is a critical energy-generating pathway in all cells, especially retinal photoreceptors that possess a highly active metabolism. ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

설치류에 있는 허혈성 망막 질병을 위한 산소 유도한 망막병증 모형

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Quantification of Vascular Parameters in Whole Mount Retinas of Mice with Non-Proliferative and Proliferative Retinopathies

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, gliosis&#160;and a progressive change in vascular function and structure. Although the onset of the retinopathies is characterized by subtle disturbances in visual perception, the modifications in the vascular plexus are the first signs detected by clinicians. The absence or presence of neovascularization determines whether the retinopathy is classified as either non-proliferative (NPDR) or proliferative (PDR). In this sense, several animal models tried to mimic specific vascular features of each stage to determine the underlying mechanisms involved in endothelium alterations, neuronal death and other events taking place in the retina. In this article, we will provide a complete description of the procedures required for the measurement of retinal vascular parameters in adults and early birth mice at postnatal day (P)17. We will detail the protocols to carry out retinal vascular staining with Isolectin GSA-IB4 in whole mounts for later microscopic visualization. Key steps for image processing with Image J Fiji software are also provided, therefore, the readers will be able to measure vessel density, diameter and tortuosity, vascular branching, as well as avascular and neovascular areas. These tools are highly helpful to evaluate and quantify vascular alterations in both non-proliferative and proliferative retinopathies.

This article describes a well-established and reproducible lectin stain assay for the whole mount retinal preparations and the protocols required for the quantitative measurement of vascular parameters frequently altered in proliferative and non-proliferative retinopathies.

비증식 및 증식 망막증을 가진 마우스의 전체 산 망막에 있는 혈관 매개변수의 정량화

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To properly leverage this greater translatability, there is a need to devise reproducible methods of drawing quantitative data from these images. Optical coherence tomography (OCT) imaging can resolve retinal histology at micrometer resolution and reveal functional differences in vascular blood flow. Here, we delineate noninvasive vascular readouts that we use to characterize pathological damage post vascular insult in an optimized mouse model of retinal vein occlusion (RVO). These readouts include live imaging analysis of retinal morphology, disorganization of retinal inner layers (DRIL) measure of capillary ischemia, and fluorescein angiography measures of retinal edema and vascular density. These techniques correspond directly to those used to examine patients with retinal disease in the clinic. Standardizing these methods enables direct and reproducible comparison of animal models with clinical phenotypes of ophthalmic disease, increasing the translational power of vascular injury models.

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Here, we present three data analysis protocols for fluorescein angiography (FA) and optical coherence tomography (OCT) images in the study of Retinal Vein Occlusion (RVO).

생체 내 재현성 촉진을 위한 마우스 망막의 혈관 손상 판독

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. Mutations in the microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene show hypopigmentation, microphthalmia, retinal degeneration, and in some cases, blindness. In vivo imaging of the mouse retina by noninvasive means is vital for eye research. However, given its small size, mouse fundus imaging is difficult and might require specialized tools, maintenance, and training. In this study, we have developed a unique software enabling analysis of the retinal vessel diameter in mice with an automated program written in MATLAB. Fundus photographs were obtained with a commercial fundus camera system following an intraperitoneal injection of a fluorescein salt solution. Images were altered to enhance contrast, and the MATLAB program permitted extracting the mean vascular diameter automatically at a predefined distance from the optic disk. The vascular changes were examined in wild-type mice and mice with various mutations in the Mitf gene by analyzing the retinal vessel diameter. The custom-written MATLAB program developed here is practical, easy to use, and allows researchers to analyze the mean diameter and mean total diameter, as well as the number of vessels from the mouse retinal vasculature, conveniently and reliably.

Mouse retinal vasculature is particularly interesting in understanding the mechanisms of vascular pattern formation. This protocol automatically measures the diameter of mouse retinal vessels from fluorescent angiography fundus images at a fixed distance from the optic disk.

Mouse Fluorescent Angiography 이미지에서 망막 혈관 직경 측정

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

The retina is a highly metabolically active tissue that requires a substantial blood supply. The retinal circulation supports the inner retina, while the choroidal vessels supply the photoreceptors. Alterations in retinal perfusion contribute to numerous sight-threatening disorders, including diabetic retinopathy, glaucoma and retinal branch vein occlusions. Understanding the molecular mechanisms involved in the control of blood flow through the retina and how these are altered during ocular disease could lead to the identification of new targets for the treatment of these conditions. Retinal arterioles are the main resistance vessels of the retina, and consequently, play a key role in regulating retinal hemodynamics through changes in luminal diameter. In recent years, we have developed methods for isolating arterioles from the rat retina which are suitable for a wide range of applications including cell physiology studies. This preparation has already begun to yield new insights into how blood flow is controlled in the retina and has allowed us to identify some of the key changes that occur during ocular disease. In this article, we describe methods for the isolation of rat retinal arterioles and include protocols for their use in patch-clamp electrophysiology, calcium imaging and pressure myography studies. These vessels are also amenable for use in PCR-, western blotting- and immunohistochemistry-based studies.

Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

This manuscript describes a straightforward protocol for the isolation of arterioles from the rat retina that can be used in electrophysiological, calcium imaging and pressure myography studies.

Ex Vivo 세포 생리학 연구에 대 한 망막 Arterioles의 절연

The retina is a highly metabolically active tissue that requires a substantial blood supply. The retinal circulation supports the inner retina, while the ...

생물학

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while maintaining transparency of the visual axis. Perturbations to this delicate balance cause blinding illnesses, such as diabetic retinopathy. Therefore, the understanding of energy metabolism changes in the retina during disease is imperative to the development of rational therapies for various causes of vison loss. The recent advent of commercially-available extracellular flux analyzers has made the study of retinal energy metabolism more accessible. This protocol describes the use of such an analyzer to measure contributions to retinal energy supply through its two principle arms - oxidative phosphorylation and glycolysis - by quantifying changes in oxygen consumption rates (OCR) and extracellular acidification rates (ECAR) as proxies for these pathways. This technique is readily performed in explanted retinal tissue, facilitating assessment of responses to multiple pharmacologic agents in a single experiment. Metabolic signatures in retinas from animals lacking rod photoreceptor signaling are compared to wild-type controls using this method. A major limitation in this technique is the lack of ability to discriminate between light-adapted and dark-adapted energy utilization, an important physiologic consideration in retinal tissue.

This technique describes real time recording of oxygen consumption and extracellular acidification rates in explanted mouse retinal tissues using an extracellular flux analyzer.

Explanted 망막 조직 세포 외 유출 분석을 사용 하 여 신진 대사 에너지의 측정

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...