Name: culturing in vivo-like murine astrocytes using the fast, simple, and inexpensive awesam protocol
Uploaded: 2018-01-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
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우리는 유럽 연구 위원회 (FP7/260916), 알렉산더 폰 훔볼트-재단 (Sofja Kovalevskaja), 그리고 도이치 가운데 (DE1951 및 SFB889)에서 자금을 인정 합니다.

여기에 설명 된 모든 동물 실험은 독일 동물 복지에 대 한 지침에 따라 수행 했다.
참고: 타임 라인 및 프로토콜의 주요 단계는 그림 1에서 그림.
1입니다. 준비
<ol><li>
다음과 같은 솔루션을 준비 합니다.
	<ol>
<li>DMEM + 다각형 MD 이다 경작에 대 한 준비: DMEM 10 %FCS 100 U 페니실린, 100 µ g/mL 스.</li>
		<li>NB + H 방사상 이다 경작에 대 한 준비: 5 ng/mL HBEGF, B-27 보충, 1 x 글루타민 보충, 100 U 페니실린과 100 µ g/mL 스 x 1와 neurobasal 매체. 참고: HBEGF의 높은 농도의 Aliquots 준비 고 필요할 때마다 중간에 추가 될-20 ° C에서 저장 될 수 있습니다.</li>
		<li>절 개 매체 (10 mM HEPES HBSS에)를 준비 합니다.</li>
		<li>0.05% 트립 신-EDTA와 6-7 mL 15 mL 튜브에 0.25% trypsin EDTA의 6-7 mL의 aliquots을 준비 합니다. 이 37 ° C 물 목욕에 해 동 고-20 ° C에서 저장 될 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>프로토콜을 시작 하기 전에 날 코트 0.04 %polyethylenimine (페이) 각의 5 mL와 10 cm 조직 문화 취급 요리.</li>
	<li>다음 날는 페이 제거 하 고 두 번 이온, 증 류 물으로 설거지. DMEM + 12 mL 각 접시에 추가 하 고 미리 셀을 도금 하기 전에 적어도 30 분 동안 37 ° C, 5% CO2 배양 기에서 equilibrate.</li>
	<li>해 부 지역 준비: 층 류 절 개 후드, 장소 2 10 cm 배양 접시 가득 얼음에 해 부 매체. 되도록 각 뇌 영역에 대 한 (예, 피 질, 해 마), 절연 15 튜브 14 mL 절 개 매체와 가득 준비 하 고 얼음에 계속. 70% 에탄올와 후드에 해 부 현미경 옆 해 부 도구 (좋은 위, Dumont #3, #5 집게)를 스프레이.</li>
</ol>2. 쥐 또는 마우스 뇌 해 부
참고: 두 쥐 쥐를 사용할 수 있습니다. P8도 사용할 수 있습니다 보다 더 오래 된 동물 (우리는 P12까지 테스트), 하지만 meninges 제거 점점 더 어렵게 될 것입니다. 또한, 셀 생산량 및 건강 것입니다 축소, 이후 복잡 한 프로세스와 연결 조직 분리, 증가 된 세포 죽음으로 이어지는 동안 휴식 수 있습니다 오래 된 동물에서 뇌 세포 형성 됩니다. 대뇌 피 질의 준비 설명, 하지만 다른 뇌 영역을 사용할 수 있습니다.
<ol><li>37 ° C 물 욕조에 0.05% 트립 신-EDTA를 놓습니다.</li>
	<li>CO2 농도 천천히 올려서 (임신 쥐 E19 새끼 또는 P0-P8 동물) 동물을 euthanize 하 고 두뇌를 분리. 다음 단계는 메 마른 기술 필요.</li>
	<li>
배아 조직으로 작업 하는 경우 먼저 자 궁에서 태아를 제거 하 고 배아 낭 열고 즉시가 위로 머리를 잘라. 모든 머리는 잘라, 미리 냉각된 해 부 중간에 그들을 전송 합니다.
	<ol>
<li>일단 머리는 중간에 잠긴, 집게와 소 뇌에서 핀치 피부와 두개골 (둘 다는 매우 부드러운 젊은 동물에서)을 엽니다. 신중 하 게 레버 두개골에서 뇌의 나머지. 참고: 2 ~ 4 E19 배아 항복 해 부의 날에 접시 당 500000 셀에 도금 하는 대뇌 피 질의 이다의 적어도 8 10 cm 요리에 대 한 충분 한 조직.</li>
	</ol>
</li>
	<li>신생아 이상 강아지에 대 한가 위, 머리를 잘라 하 고 두뇌 medially 코 끝에 머리 뒤쪽에서 직선에 피부를 절단 하 여 분리 합니다. 옆으로 그리고 신중 하 게 잘라 두개골 왼쪽 및 오른쪽, 다음 리프트를 두개골 뼈 피부를 당겨. 소 뇌, 떨어져 고 레버는 두개골에서 뇌의 나머지. 참고: 2 ~ 3 P0-P8 새끼 양보 해 부의 날에 접시 당 500000 셀에 도금 하는 대뇌 피 질의 이다의 적어도 8 10 cm 요리에 대 한 충분 한 조직.</li>
	<li>기본 midbrain 구조에서 피 질을 구분 합니다. 다음 장소는 반구 사이 fissure 내 집게 꼬집어 각 반구 무료 (경도 균열에 수직) 한 반구의 피 질 및 midbrain 구조 사이 집게를 이동 합니다.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 모든 meninges 각 반구 (와 그것의 해 마), 다음은 된 분리. Hippocampal 이다 필요한 경우 14 mL 해 부 중간에 얼음으로 가득 15 mL 튜브에 각 마를 이동 합니다.</li>
	<li>제거 더 지역 각 반구의 피 질에서 특정 영역은 필요 (예를 들어, 담당). 잘라 1 m m3보다 더 큰 조각으로 이다 생성 하는 데 사용할 모든 대뇌 피 질의 조직. 해 부 중간에 얼음 가득 별도 15 mL 튜브에 대뇌 피 질의 조직의 모든 조각을 수집 합니다.</li>
</ol>3. 조직 소화 및 분리
<ol><li>모든 조직 조각 수집 되 면 튜브의 하단에 정착 하도록 기다리는 다음 가능한 많은 매체를 발음.</li>
	<li>0.05% 트립 신-EDTA 혈 청 학적인 피 펫을 사용 하 여 2-3 mL를 추가 하 고 20 분 동안 37 ° C 물 욕조에 튜브를 품 어. 참고: 조직 조각을 혼합 하 고 다시 정착 수 있도록 신속 하 게 피 펫에서 모든 트립 신-EDTA를 해제 합니다.</li>
	<li>조심 스럽게 발음 트립 신-EDTA, 가능한 튜브의 하단에 작은 액체도에서 조직 조각을 떠나.</li>
	<li>나머지 트립 신-EDTA 씻어 미리 냉각된 해 부 중간의 5 mL를 추가 합니다. 조직 조각의 혼합 달성 하기 위해 튜브의 상부 쪽으로 플라스틱.</li>
	<li>해 부 중간 발음 하 고 가능한 작은 액체로 조직 조각에 둡니다. 두 번 더 미리 냉각된 해 부 매체와이 세척 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>마지막 세척 단계 후 DMEM + (실내 온도를 따뜻하게) 사용 하 여 1000 µ L 피 펫 팁, 및 triturate pipetting으로 조직 고 거품 소개 없이 아래쪽의 1 mL를 추가 합니다. 참고: 그것은 중요 하다을 생산 하는 거품을 피하기 위해이 솔루션을 이다 아주 민감한 하의 pH를 변경 될 수 있습니다.</li>
	<li>50 mL 튜브의 개통에서 100 µ m 셀 스 트레이너를 놓고 미리 미리 냉각 DMEM + 4.5 mL와 함께 필터를 젖은.</li>
	<li>셀 스 트레이너에 천연된 직물 서 스 펜 션의 1 mL를 플라스틱 및 다른 4.5 mL을 추가 사전 냉각 DMEM + 셀 스 트레이너를 통해 세포를 씻어.</li>
</ol>4. 셀 도금 뿌리고 여 사이토 농축에 대 한
<ol><li>10 µ L 10 µ L trypan 블루와 세포 현 탁 액의 희석 한 hemocytometer에 믹스를 pipetting을 예를 들어, 셀을 계산.</li>
	<li>10 cm 접시 당 12 ml DMEM + 500000 셀 플레이트. 주: DMEM +는 astrocytic 성장을 위한 도움이 그래서 신경 또는 microglia 보다 더. 떨고, 하는 동안 유리 coverslips 우물 내에 물리적 힘 (coverslips) 없이 10 cm 요리에 그 보다 훨씬 강해 있습니다. 만약 셀 24-잘 접시에 동요는, 그들은 건강에 해로운 될 또는 죽어. 만 떨고 후 24-잘 접시에 이다 격판덮개.</li>
	<li>7 일 동안 37 ° C, 5% CO2 인큐베이터에서 셀 문화 유지.</li>
	<li>6 일에 동요 하 고 셀을 뿌리고 전날 페이 코팅 배양 배지 단계 5에서에서 설명한 대로 준비 합니다.</li>
</ol>5. 뿌리고 셀
<ol><li>
뿌리고, 전날 코트 0.04% 페이와 세포 배양 배지.
	<ol>
<li>Immunocytochemistry, 바이러스 성 변환, 또는 플라스 미드 transfection, 24-잘 또는 6 잘 플레이트 (각 포함 하는 멸 균된 12 m m 또는 25 m m 유리 coverslip, 각각)를 사용 합니다.</li>
		<li>적어도 1 시간에 70% 에탄올에 외피에 의해 유리 coverslips 소독 다음 우물에 있는 coverslips를 배치 하기 전에 세 번 이온 증류수에 세척.</li>
		<li>적어도 70 µ L 24-잘 접시에 12 m m coverslip 당 0.04% 페이 6 잘 플레이트에 25mm coverslip 당 600 µ L 0.04% 페이 추가 합니다.</li>
		<li>서쪽 오 점 또는 RNA-Seq 분석, 10 cm 요리 이미 해 부 후 셀을 포함 하는 사용할 수 계속할 수 있습니다. 요리만 흔들릴 수 필요가 다음 셀 1 x PBS로 세척 및 NB + H로 치료 (새로운 요리를 전송 하지 않습니다).</li>
	</ol>
</li>
	<li>하루에 생체 외에서 (DIV) 7 해 부 후에 셀 10 cm 요리 DMEM + 인큐베이터에서 실험실 셰이 커에 놓고 흔들어 6 h 110 rpm에서 요리 합니다.</li>
	<li>이온, 증 류 물으로 코팅된 coverslips에서 페이 두 번 씻어. 번호판 (잘 24-잘 접시와 6 잘 플레이트 잘 당 2 mL 당 500 µ L) NB + H 매체를 추가 합니다. 전 37 ° C, 5% CO2 10 cm 요리 떨고 있다, 동안에 또는 적어도 30 분 동안 인큐베이터에 접시 equilibrate.</li>
	<li>6 h 떨고의 끝 전에 20-30 분 전 1 x PBS, DMEM +, NB + H, 및 0.25 %trypsin-EDTA 물 목욕에서 37 ° C에 따뜻한.</li>
	<li>떨고, 6 h 문화 요리 흔드는 고 즉시 10 mL (흥분 상태에서 뉴런, oligodendrocytes, 및 microglia를 포함) 하는 매체 대체 후 미리 접시 당 1 x PBS를 따뜻하게 합니다. 참고: 그것은 즉시 다시 연결 비 astrocytic 셀을 피하기 위해 분리 된 셀을 포함 오래 된 매체를 발음 하는 것이 중요입니다.</li>
	<li>PBS를 제거 하 고 접시 당 3 mL 미리 따뜻하게 트립 신-EDTA를 추가. 37 ° C, 5% CO2배양 기에서 4 분에 대 한 각 접시를 품 어. 참고: 서쪽 오 점 또는 RNA-Seq에 대 한 샘플을 준비 하는 경우에 트립 신-EDTA 추가 하지 마십시오. 대신, 12 mL PBS 바꿀 미리 NB + H, 이후 문화 인큐베이터에 다시 배치할 수 따뜻하게 합니다.</li>
	<li>미리 따뜻하게 DMEM + 각 3 mL 트립 신-EDTA를 접시, 플라스틱 접시 5 mL 혈 청 학적인 피 펫을 사용 하 여에서 셀 고 수집 50 mL 튜브에 세포 현 탁 액 5 mL를 추가 합니다. 참고: 피 펫-접시의 아래쪽에서 직접 접시의 바닥 해야 될 셀 분리로 명확 하 게. (대신 DMEM +), 매체를 포함 하는 혈 청 혈 청은 트립 신으로 사용 합니다.</li>
	<li>4 분 동안 20 ° C에서 3,220 x g에 세포 현 탁 액 원심</li>
	<li>상쾌한을 제거 하 고 resuspend 셀 펠 릿 1 mL에는 NB + H에 미리 예 열.</li>
</ol>6. 셀 도금 최종 사이토 문화에 대 한
<ol><li>셀을 계산 합니다.</li>
	<li>(잘 당 2 mL NB + H 매체)에 6-잘 접시에 잘 당 20000 셀 이나 잘 (잘 당 500 µ L NB + H 매체)에 24-잘 접시 당 5000 셀 접시.</li>
	<li>추가 처리 또는 분석까지 37 ° C, 5% CO2 인큐베이터에서 셀 문화 유지.</li>
	<li>일주일에 한 번 반 매체를 교환 합니다. 참고: 낮은 영양소 환경에서 이다 확산 중지 하지만 (비록 우리의 경험에 아무 microglia AWESAM 문화에 나타난) 모든 나머지 microglia 확산 것입니다. 일단 주 어떤 잠재적으로 나머지 microglia8의 농축을 방지 하 고는 monocultures 적어도 3 주 동안 건강 유지 절반 매체를 교환.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Puschmann, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+3D+cell+culture+system+minimizes+cellular+stress+and+maintains+the+in+vivo-like+morphological+complexity+of+astroglial+cells.">Bioactive 3D cell culture system minimizes cellular stress and maintains the in vivo-like morphological complexity of astroglial cells.</a> Glia. 61 (3), 432-440 (2013).</li><li>Puschmann, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HB-EGF+affects+astrocyte+morphology,+proliferation,+differentiation,+and+the+expression+of+intermediate+filament+proteins.">HB-EGF affects astrocyte morphology, proliferation, differentiation, and the expression of intermediate filament proteins.</a> J Neurochem. 128 (6), 878-889 (2014).</li><li>Foo, L. 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저자는 공개 없다.

프로토콜 내에서 4 단계는 중요: 1)를 준비 하 고 정확 하 게 5 ng/ml, HBEGF 농도 때문에 농도 있는 작은 증가 미 숙 문화, 예를 들어, 발생할 수 있습니다 10 ng/mL HBEGF 드 차별화 이다4; 조직 또는 pH를 변경 하 고 사이토 건강;을 방해 수 있는 셀을 포함 하는 솔루션 2) 피 거품 3) 전 평형 미디어 최적 pH 및 온도 성장 하는 건강 한 이다; (비록 아무 microglia AWESAM 문화에서 지금까지 발견 된) 4) 교환만 절반 매체 일주일에 한 번 모든 나머지 microglia 충분 한 양분이 존재 하 고 매체에 가능성이 있기 때문에8 정기적으로 교환. 이 마지막 포인트, astrocytic, 차별화, 생존과 확산을 지원할 수 있습니다 그들은 그 문화 내에서 사이토 파생 요소 하지 완전히 제거 해야 참고 중요 하다.
성숙한 사이토 소스로 DIV14 또는 오래 된 문화를 사용 하는 것이 중요 하다 (하지만 변환 또는 transfection 단계 이전 문화를 사용할 수 있습니다) 때문에 이다 DIV14 보다 여전히 신경 줄기 세포의 잠재적인9. 바이러스 성 변환에 대 한 뉴런의 이다 DIV7에 불리고 문화 혼합 GFP10불리고 (사용 adeno 관련 바이러스) 효율적으로 익스프레스 virally. 플라스 미드 transfection, DIV10-DIV24 이다는 사용 되 고 fluorophore 태그 단백질 몇 군데 2-5 일 후11. 우리의 경험에서는, 바이러스 성 변환 및 플라스 미드 transfection 만약 최고의 작품 이다 DIV9와 DIV14 사이 불리고 있다. Transfection 및 변환 효율 구성 및 방법에 따라 달라 집니다 하지만 우리가 찾을 transfection 효율 사이토 monocultures lipofectamine transfection를 사용 하 여에서 ~ 20% 이며 adeno 관련 바이러스 (AAV) 변환 효율은 ~ 90% ( 자세한 내용은, 예를 들어, 구문 사용에 대 한 우리의 이전 작업4 참조). AAV 입자와 lipofectamine에 의해 transfecting 이다 시험, 우리 허용 적어도 5이 고 2 일 각각, 생성의 표현에 대 한. 변환 또는 transfection, 전에 이다 또한 뿌리고 후 적어도 하루에 대 한 복구를 허용 한다.
또한, 문화를 준비 하 고 다른 시간에 RNA/단백질 발현을 비교 하기 위한 점, 문화 자료, 예를 들어, DIV7에서 수확을 사이토 monocultures의 비슷한 금액을 달성 하기 위해 서로 다른 밀도에서 도금 될 수 있다와 때 DIV21 있을 수합니다 있습니다. 각각 1 x 106 및 10 cm 접시 당 500000 셀의 밀도에서 도금. 예를 들어 전체 단백질 lysate 수익률 0.5 mg/mL DIV14 처음 10 cm 접시에 500000 AWESAM 이다 도금 후 수확 할 때에 주위에 있을 것입니다.
AWESAM 프로토콜은 빠르고, 간단 하 고 저렴 한 방법을 나타냅니다 문화 이다 격리에서 하 뉴런에서 하지만 vivo에서-처럼 RNA와 단백질 표정, 형태학, 및 캘리포니아2 + 4, 신호 특성을 지금까지 다른 프로토콜에 의해 제공 됩니다. AWESAM 이다 immunocytochemistry, immunoblotting, RNA 식 분석, TIRF 현미경 검사 법, 그리고 캘리포니아2 + 이미징4셀 문화 연구에 대 한 일반적인 분석에 사용할 수 있습니다. 특히, 유전으로 인코딩된 캘리포니아2 + 지표의 최근 발전 클래식 캘리포니아2 + 염료14보다 더 자세히 잘 astrocytic 프로세스를 시각화 수 있습니다. 캘리포니아2 + 신호, 기공을 이해 및 exocytosis 두껍고 얇은 astrocytic 프로세스에는 순수 관련으로 이러한 프로세스 영양 지원, 혈액 흐름, 시 냅 스 신호 및 소성, 뇌 기능에 영향을 미칠 수 및 세포 커뮤니케이션입니다. AWESAM 프로토콜 수 벌금 astrocytic 프로세스의 연구에 대 한 뇌 생리학15 및 질병16,17, 신경 방해 없이 그리고 훌륭한 접근성 관련 그 체 외 문화 용품입니다.

영양 지원, 혈액 흐름, 시 냅 스 신호 및 소성, 및 세포 통신-는 모두 얇은 astrocytic 프로세스 중심 메커니즘을 통해 뇌 기능에 영향을 이다. 여기에 설명 된 AWESAM 프로토콜을 사용 하는 유용한 예를 들어, 많은 단백질 및 심지어 캘리포니아2 + 신호 표현의 다른 뇌 세포에 걸쳐 다른 명과 뉴런에서 간섭 없이 이러한 프로세스의 연구 유형입니다. 또한,이 방법은 이전에 사용할 수 있는 기술의 한계 극복. 특히, 우리의 프로토콜 vivo에서제공-형태학 (방사상 이다 얇은 프로세스) 및 유전자 발현에 빨리, 쉽게, 그리고 저렴 한 방식으로 같은.
셀 형태, 유전자 발현, 그리고 다른 많은 규제 프로세스는 직접 환경에 의해 영향을 받습니다. 문화 접시에이 주변의 세포 뿐만 아니라 세포 재배 되 고 있는 매체에 의해 발표 하는 요소를 말합니다. 이다, HBEGF 방사상 형태로1 을 유도 하기 위해 이전에 보고 하지만 드 이다2를 차별화 하는 또한 발견 했다. 그러나, HBEGF의 낮은 농도 나중 더 vivo에서생성 하는 데 사용 했다-두 개의 서로 다른 프로토콜3,4RNA 시퀀싱을 통해 발견 이다 처럼. 또한, 사이토 형태학 프로토콜4에 중간 구성 변경: HBEGF의 낮은 농도와 Neurobasal 매체는 방사상 이다 (예를 들어, 다른 중간 작곡 하면서 성장을 위한 최적의 혈 청-포함 된 DMEM) (immunopanning에 의해 고립 된 갓 이다)에 다각형 세포를 생산.
AWESAM 프로토콜 사이토 monocultures4성장에 대 한 이전 방법의 단점을 극복 했다. 성장 하는 사이토 monocultures 이전 기술은 다음과 같은 단점이 있습니다: 방사상 이다에 vivo에서 (MD 방법)5;의 특성은 다각형 형태 길이 비용 (유도 만능 줄기 세포는 이다 3 개월을 준비 하며 고가의 성장 인자를 포함 하 여 많은 시 약) 프로토콜의6; 낮은 양의 재료 (immunopanning 방법)3; 이다의 탈 분화와 3D 매트릭스 (Puschmann 외.)의 요구 사항 1 , 2. AWESAM 프로토콜을 제공 하는 반면,: vivo에서-같은 형태 (얇은 프로세스와 방사상 이다); 빠른, 쉽게, 그리고 저렴 한 방법; 대량의 물자; 그리고 vivo에서가장-같은 비해 immunopanned 및 MD 이다 유전자 발현. 또한, 2D 문화 캘리포니아2 + 신호 및 얇은 프로세스, 고 막 가까이 이벤트 재활용 기의 연구에 대 한 수 있습니다 (예를 들어, TIRF 현미경 불가능 3D 문화에서).
MD 메서드는 19805, 다각형 사이토 monocultures는 간단 하 고 빠른 기술 제공에 그것의 간행물부터 광대 하 게 사용 되었습니다. 간단히, MD 메서드 수반 송아지 태아 혈 청 (FCS)에서 성장 혼합된 뇌 세포-(다른 모든 뇌 세포 유형을 분리 접시에서)로 이다에 대 한 풍부 하 고 더 동일한 매체에 문화 단계를 흔들어 뒤 DMEM, 포함 된. DMEM fcs 보충 fibroblasts 및 adipocytes에서 다른 암 세포 선, 모두의 공유 문화에서 MD 이다에 의해 전시 다각형 형태에 이르기까지 많은 다른 세포 유형, 사용 됩니다. 초기 2000 년대7까지 작은 생각 했던 특히 그들의 전형적인 방사상 형태를 선호 하 미디어 이다에 맞게 주어진 에 비보를 발견. 2011 년에 출판 한 프로토콜 같은 방사상 형태를 달성지 않습니다: 혈 청 자유로운 매체 이다3경작을 위해 최적화 된 사용 immunopanning 메서드를 호출. 이 메서드를 사용 하 여 갓 고립 된 뇌 세포는 대상 셀 형식 관련 세포 표면 단백질, 이다에 대 한 풍부 하 게 하는 항 체로 입힌 요리 시리즈에 노출 됩니다. 더는 비보에도 불구 하 고-immunopanned 이다의 형태와 식 프로필, 같은 생체 외에서 연구의 대다수는 여전히 MD 사이토 방법에 의존. MD 메서드는 간단 하 고 빠른, 문화의 첫 번째 날에 더 복잡 하 고 시간이 많이 걸리는 단계를 구성 하는 immunopanning 메서드 (더 이상 효소 소화 기간 등 다른 밀도, 자체, immunopanning 솔루션의 주의 레이어 링 및 여러 원심 분리 단계-모든 도금 하기 전에). 그러나, 보다 전문적인된 매체를 사용 하 여 AWESAM 메서드를 사용 하면 두 속도의 MD 메서드는 vivo에서제공-immunopanning 프로토콜의 형태 처럼.
전반적으로, AWESAM 프로토콜은 더 vivo에서공부 하는 데 유용-2D monocultures (immunostainings, immunoblots, 및 RNA 시퀀싱에 의해 이전 특징된4 )로 신경 및 다른 명과 격리에서 이다 처럼. 그것은 얇은 astrocytic 프로세스의 연구에 대 한 허용 하 고 자연 스러운 캘리포니아2 + 신호 (예를 들어, TIRF 현미경 검사 법에 의해 몇 군데) 막 가까이 이벤트 시각화를 위한 훌륭한 접근을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>0.05% trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300054</td><td>warm in 37 &amp;ordm;C waterbath before use</td></tr><tr><td>0.25% trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>warm in 37 &amp;ordm;C waterbath before use</td></tr><tr><td>B-27 supplement</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>50X stock</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>100X stock</td></tr><tr><td>Penicillin / streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td>50 stock; penicillin: 5000 U/ml; streptomycin: 5000 &amp;micro;g/ml</td></tr><tr><td>Neurobasal medium</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>without L-glutamine</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>41966029</td><td></td></tr><tr><td>HBEGF</td><td>Sigma</td><td>4643</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco</td><td>14170112</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010049</td><td>1X</td></tr><tr><td>100 &amp;mu;m nylon cell strainer</td><td>BD</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma</td><td>T8154&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cell culture incubator</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hera Cell 240i cell culture incubator</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory shaker</td><td>Heidolph</td><td>Rotamax 120&amp;nbsp;</td><td>use inside cell culture incubator</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R&amp;nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

culturing in vivo-like murine astrocytes using the fast, simple, and inexpensive awesam protocol

AWESAM (는 low- e유도 stellate는 strocyte method 비용) 프로토콜 수반 vivo에서의 대량을 생성 하는 빠르고, 간단 하 고 저렴 한 방법-마우스와 쥐 사이토 monocultures 같은 : 뇌 세포는 서로 다른 뇌 영역에서 고립 될 수 있다 고 주 후에 세포 배양의, 비 astrocytic 셀 인큐베이터에 6 h에 대 한 통에 문화 요리를 배치 하 여 떨어져 동요는. 나머지 이다 (불리 NB + H) 사이토 관련 매체와 새로운 접시에 다음 passaged 있습니다. NB + H 혈 청 매체에 대신 사용 되는 헤 파 린 바인딩 EGF 같은 성장 인자 (HBEGF)의 낮은 농도 포함 합니다. NB + H, 성장 후 AWESAM 이다 방사상 형태와 기능은 괜 찮 프로세스 있다. 또한,이 이다 더 많은 비보에있다-같은 보다 이전에 게시 방법으로 생성 하는 이다 유전자 발현. 캘리포니아2 + 영상, 기 역학, 고 막 가까이 다른 이벤트 따라서 벌금 astrocytic 프로세스에서 생체 외에서 예를 들어, 라이브 셀 confocal 또는 TIRF 현미경을 사용 하 여 공부 될 수 있다. 특히, AWESAM 이다 또한 전시 자발적인 캘리포니아2 + 신호 이다에서 vivo에서유사한.

신경을 가진 공동 경작 하 고 NB + 매체에 성장 이다 문화 (그림 2)의 2 주 후 방사상 나타납니다. NB + 매체, 이외에 공동 경작된 이다 또한 아마 그들의 생존 및 형태학에 기여 하는 알 수 없는 신경 파생 된 요소에 노출 됩니다. 반면, 메릴랜드 이다 (후에 통과 하기 전에 다른 세포 유형 푸는) monocultures로 DMEM + 성장 다각형 2 주 후에 나타납니다. NB + H에서 떨고, 후 성장 하는 AWESAM 이다 문화의 2 주 후 많은 정밀한 프로세스와 방사상 나타납니다.
우리는 이전 AWESAM 이다 RNA 식 프로 파일은 이다에서 vivo에서 MD와 immunopanned 이다4에 비해의 가까이 보였다. 사이토 특정 단백질 표정에서 대뇌 피 질의 이다 ALDH1L1의 높은 수준과 GFAP vivo에서12의 저급 표현 한다. 이것 또한 AWESAM 이다에 적용 하 고 세포질 효소로 ALDH1L1의 immunostaining cytoskeletal 단백질 GFAP (그림 2B) 보다 더 정밀한 세부 사항 밝혀.
RNA와 단백질 표정 이외 이다에서 vivo에서 보여 자연 스러운 캘리포니아2 + (즉, 외부 자극 없이) 신호, 하지만 다각형 MD 이다에서 생체 외에서 자극 유도 캘리포니아2 + 을 요구합니다 신호, 예를 들면, ATP 또는 조미료를 추가 하 여. AWESAM 이다 자발적인 캘리포니아2 + vivo에서, 셀 시체에 virally는 막 대상 Lck-GCaMP3 (그림 3)와 세포를 시험 하 여 구상 될 수 있다 정밀한 프로세스 신호 전시. 캘리포니아2 + 인접 이다 전역의 자연 파도 (그림 3A) 발생합니다. Astrocytic Ca2 + 좋은 프로세스와 microdomains (그림 3B) 신호 수 분석 이다13관련 프리웨어를 사용 하 여.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56092/56092fig1.jpg"> 그림 1 : 프로토콜 일정. DIV0에 이러한 단계를 수행 하는 데 걸리는 시간을 포함 하 여 AWESAM 프로토콜의 주요 단계를 보여주는 타임 라인 (해 부의 일), DIV7 (통행의 일), 그리고 나중 시간 포인트에서 기대 해야할지. 녹색 상자 보여줍니다 어디 대 라이터 방사상 이다로 셀을 수확 수 있습니다 때 어두운 그늘 더 복잡 한 방사상 형태학과 성숙, 대 적은 각각 나타냅니다. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56092/56092fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56092/56092fig2v3.jpg"> 그림 2 : 중간 형태를 결정 합니다. (A) 회로도 사이토 형태 때 변경 하는 방법을 보여주는 monocultures로 그리고 매체에 따라 대 (앞에서 설명한4)으로 신경 세포와 공동 경작. 사이토 특정 GFAP 윤곽선으로 얼룩에 방사상 형태로 공동 경작 AWESAM 이다, 그리고 메릴랜드 이다에서 다각형 형태. (B) GFAP 레이블 MD 이다 ALDH1L1, 그리고 ALDH1L1 (하지만 하지 GFAP) 보다는 더 강하게 AWESAM 이다의 정밀한 프로세스를 설명 합니다. 어느 사이토 monoculture 신경 마커 MAP2 전시 한다. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56092/56092fig2v3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56092/56092fig3.jpg"> 그림 3 : 자발적인 캘리포니아2 + 신호 이다에서. (A) AWESAM GCaMP 불리고 이다 전시 자발적인 캘리포니아2 + (화살촉) 얇은 과정에 포함 하는 사이토 네트워크에 걸쳐 이벤트. 캘리포니아2 + 웨이브 오른쪽 왼쪽에서 여러 이다 통해 여행 개별 시간 포인트, 어디 밝은 색상 높은 캘리포니아2 + 농도의 영역을 묘사 하 고 검정 영역 대표 extracellular 영역에서에서 이미지에서. 이미지 라이브 셀 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 인수 했다. (B) 캘리포니아2 + 농도 (A)에서 색으로 구분 된 영역에서 시간이 지남에 변경, 어떻게 Ca2 + 웨이브 신호를 퍼 뜨린 여러 이다 설명 하는 GCaMP 형광 강도 추적으로 표시. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56092/56092fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol

여기에 설명 된 AWESAM 프로토콜은 빠르고, 단순 하 고 저렴 한 방식으로 다른 뇌 세포 분리에서 murine 이다 경작에 최적입니다. AWESAM 이다 자발적인 캘리포니아2 + 신호, 형태학, 및 유전자 식 프로필 이다에서 vivo에서유사한 전시.

Vivo에서경작-Murine 이다 빠르고, 간단 하 고 저렴 한 AWESAM 프로토콜을 사용 하 여 같은

The AWESAM (a low-cost easy stellate astrocyte method) protocol entails a fast, simple, and inexpensive way to generate large quantities of in vivo-like ...

culturing-vivo-like-murine-astrocytes-using-fast-simple-inexpensive

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol

8.4K 조회수.  University of Oxford. 여기에 설명 된 AWESAM 프로토콜은 빠르고, 단순 하 고 저렴 한 방식으로 다른 뇌 세포 분리에서 murine 이다 경작에 최적입니다. AWESAM 이다 자발적인 캘리포니아2 + 신호, 형태학, 및 유전자 식 프로필 이다에서 vivo에서유사한 전시.

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Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Astrocytes are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be learned about their molecular and functional characteristics. In vitro astrocyte cell culture systems can be used to study the biological functions of these glial cells in detail. This video protocol shows how to obtain pure astrocytes by isolation and culture of mixed cortical cells of mouse pups. The method is based on the absence of viable neurons and the separation of astrocytes, oligodendrocytes and microglia, the three main glial cell populations of the central nervous system, in culture. Representative images during the first days of culture demonstrate the presence of a mixed cell population and indicate the timepoint, when astrocytes become confluent and should be separated from microglia and oligodendrocytes. Moreover, we demonstrate purity and astrocytic morphology of cultured astrocytes using immunocytochemical stainings for well established and newly described astrocyte markers. This culture system can be easily used to obtain pure mouse astrocytes and astrocyte-conditioned medium for studying various aspects of astrocyte biology.

Astrocytes have been recognized to be versatile cells participating in fundamental biological processes that are essential for normal brain development and function, and central nervous system repair. Here we present a rapid procedure to obtain pure mouse astrocyte cultures to study the biology of this major class of central nervous system cells.

마우스 두피 Astrocytes의 분리와 문화

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

연구

신경과학

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease pathogenesis and their utility for preclinical drug development. In order to design a better model system for these applications, phenotypically wild-type cortical astrocytes and neural stem cells (NSC) from conditional, genetically engineered mice (GEM) that harbor various combinations of floxed oncogenic alleles were harvested and grown in culture. Genetic recombination was induced in vitro using adenoviral Cre-mediated recombination, resulting in expression of mutated oncogenes and deletion of tumor suppressor genes. The phenotypic consequences of these mutations were defined by measuring proliferation, transformation, and drug response in vitro. Orthotopic allograft models, whereby transformed cells are stereotactically injected into the brains of immune-competent, syngeneic littermates, were developed to define the role of oncogenic mutations and cell type on tumorigenesis in vivo. Unlike most established human glioblastoma cell line xenografts, injection of transformed GEM-derived cortical astrocytes into the brains of immune-competent littermates produced astrocytomas, including the most aggressive subtype, glioblastoma, that recapitulated the histopathological hallmarks of human astrocytomas, including diffuse invasion of normal brain parenchyma. Bioluminescence imaging of orthotopic allografts from transformed astrocytes engineered to express luciferase was utilized to monitor in vivo tumor growth over time. Thus, astrocytoma models using astrocytes and NSC harvested from GEM with conditional oncogenic alleles provide an integrated system to study the genetics and cell biology of astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo and may be useful in preclinical drug development for these devastating diseases.

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

모델링 성상 세포종 병인<em&gt; 체외</em&gt;와<em&gt; 생체</em&gt; 대뇌 피질의 성상이나 조건, 유전자 조작 쥐에서 신경 줄기 세포를 사용하여

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of oxygen and glucose, which causes energy failure and neuronal death. After an ischemic stroke insult, astrocytes become reactive and proliferate around the injury site as it develops. Under this scenario, it is difficult to study the specific contribution of astrocytes to the brain region exposed to ischemia. Therefore, this article introduces a methodology to study primary astrocyte reactivity and proliferation under an in vitro model of an ischemia-like environment, called oxygen glucose deprivation (OGD). Astrocytes were isolated from 1-4 day-old neonatal rats and the number of non-specific astrocytic cells was assessed using astrocyte selective marker Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) and nuclear staining. The period in which astrocytes are subjected to the OGD condition can be customized, as well as the percentage of oxygen they are exposed to. This flexibility allows scientists to characterize the duration of the ischemic-like condition in different groups of cells in vitro. This article discusses the timeframes of OGD that induce astrocyte reactivity, hypertrophic morphology, and proliferation as measured by immunofluorescence using Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA). Besides proliferation, astrocytes undergo energy and oxidative stress, and respond to OGD by releasing soluble factors into the cell medium. This medium can be collected and used to analyze the effects of molecules released by astrocytes in primary neuronal cultures without cell-to-cell interaction. In summary, this primary cell culture model can be efficiently used to understand the role of isolated astrocytes upon injury.

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Ischemic stroke is a complex event in which the specific contribution of astrocytes to the affected brain region exposed to oxygen glucose deprivation (OGD) is difficult to study. This article introduces a methodology to obtain isolated astrocytes and study their reactivity and proliferation under OGD conditions.

사이토 반응성 및 확산에서 체 외에 허 혈 성 같은 조건 모니터링

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

Primary Cultures of Rat Astrocytes and Microglia and Their Use in the Study of Amyotrophic Lateral Sclerosis

This protocol demonstrates how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from the cortices of Sprague Dawley rats and how to use these cells for the purpose of studying the pathophysiology of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) in the rat hSOD1G93A model. First, the protocol shows how to isolate and culture astrocytes and microglia from postnatal rat cortices, and then how to characterize and test these cultures for purity by immunocytochemistry using the glial fibrillary acidic protein (GFAP) marker of astrocytes and the ionized calcium-binding adaptor molecule 1 (Iba1) microglial marker. In the next stage, methods are described for dye-loading (calcium-sensitive Fluo 4-AM) of cultured cells and the recordings of Ca2+ changes in video imaging experiments on live cells.
The examples of video recordings consist of: (1) cases of Ca2+ imaging of cultured astrocytes acutely exposed to immunoglobulin G (IgG) isolated from ALS patients, showing a characteristic and specific response compared to the response to ATP as demonstrated in the same experiment. Examples also show a more pronounced transient rise in intracellular calcium concentration evoked by ALS IgG in hSOD1G93A astrocytes compared to non-transgenic controls; (2) Ca2+ imaging of cultured astrocytes during a depletion of calcium stores by thapsigargin (Thg), a non-competitive inhibitor of the endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase, followed by store-operated calcium entry elicited by the addition of calcium in the recording solution, which demonstrates the difference between Ca2+ store operation in hSOD1G93A and in non-transgenic astrocytes; (3) Ca2+ imaging of the cultured microglia showing predominantly a lack of response to ALS IgG, whereas ATP application elicited a Ca2+ change. This paper also emphasizes possible caveats and cautions regarding critical cell density and purity of cultures, choosing the correct concentration of the Ca2+ dye and dye-loading techniques.

We present here a protocol on how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from rat cortices for time-lapse video imaging of intracellular Ca2+ for research on pathophysiology of amyotrophic lateral sclerosis in the hSOD1G93A rat model.

쥐 성상 세포와 미세 아교 세포의 1 차 배양과 근 위축성 측삭 경화증 연구에서의 사용

This protocol demonstrates how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from the cortices of Sprague Dawley rats and how to ...

Isolation and Direct Neuronal Reprogramming of Mouse Astrocytes

Direct neuronal reprogramming is a powerful approach to generate functional neurons from different starter cell populations without passing through multipotent intermediates. This technique not only holds great promises in the field of disease modeling, as it allows to convert, for example, fibroblasts for patients suffering neurodegenerative diseases into neurons, but also represents a promising alternative for cell-based replacement therapies. In this context, a major scientific breakthrough was the demonstration that differentiated non-neural cells within the central nervous system, such as astrocytes, could be converted into functional neurons in vitro. Since then, in vitro direct reprogramming of astrocytes into neurons has provided substantial insights into the molecular mechanisms underlying forced identity conversion and the hurdles that prevent efficient reprogramming. However, results from in vitro&#160;experiments performed in different labs are difficult to compare due to differences in the methods used to isolate, culture, and reprogram astrocytes. Here, we describe a detailed protocol to reliably isolate and culture astrocytes with high purity from different regions of the central nervous system of mice at postnatal ages via magnetic cell sorting. Furthermore, we provide protocols to reprogram cultured astrocytes into neurons via viral transduction or DNA transfection. This streamlined and standardized protocol can be used to investigate the molecular mechanisms underlying cell identity maintenance, the establishment of a new neuronal identity, as well as the generation of specific neuronal subtypes and their functional properties.

Here we describe a detailed protocol to generate highly enriched cultures of astrocytes derived from different regions of the central nervous system of postnatal mice and their direct conversion into functional neurons by the forced expression of transcription factors.

마우스 성상세포의 분리 및 직접 뉴런 리프로그래밍

Direct neuronal reprogramming is a powerful approach to generate functional neurons from different starter cell populations without passing through ...

Efficient Extraction of Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies

Astrocytes and microglia play pivotal roles in central nervous system development, injury responses, and neurodegenerative diseases. These highly dynamic cells exhibit rapid responses to environmental changes and display significant heterogeneity in terms of morphology, transcriptional profiles, and functions. While our understanding of the functions of glial cells in health and disease has advanced substantially, there remains a need for in vitro, cell-specific analyses conducted in the context of insults or injuries to comprehensively characterize distinct cell populations. Isolating cells from the adult mouse offers several advantages over cell lines or neonatal animals, as it allows for the analysis of cells under pathological conditions and at specific time points. Furthermore, focusing on spinal cord-specific isolation, excluding brain involvement, enables research into spinal cord pathologies, including experimental autoimmune encephalomyelitis, spinal cord injury, and amyotrophic lateral sclerosis. This protocol presents an efficient method for isolating astrocytes and microglia from the adult mouse spinal cord, facilitating immediate or future analysis with potential applications in functional, molecular, or proteomic downstream studies.

저자 스포트라이트: Isolation of Glial Cells from the Adult Mouse Spinal Cord 

This protocol outlines the isolation of purified astrocytes and microglia from the adult mouse spinal cord, facilitating subsequent applications such as RNA analysis and cell culture. It includes detailed cell dissociation methods and procedures designed to enhance both the quality and yield of isolated cells.

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies( 체외 분석 및 전사체 연구를 위한 성인 마우스 척수에서 순수 성상교세포 및 미세아교세포의 분리)

Astrocytes and microglia play pivotal roles in central nervous system development, injury responses, and neurodegenerative diseases. These highly dynamic ...

Generating a Primary Culture of Astrocytes from a Rat Pup Brain

Source: Mili&#263;evi&#263;, K., et al., <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/63483">Primary Cultures of Rat Astrocytes and Microglia and Their Use in the Study of Amyotrophic Lateral Sclerosis.</a> J. Vis. Exp. (2022)
The video demonstrates a technique for culturing primary astrocytes from the rat cortex. The cortex is mechanically dissociated to obtain a homogeneous glial cell suspension, which is then plated on polypeptide-coated plates to promote selective proliferation of astrocytes. Subsequently, the astrocytes are enzymatically dissociated from the plates and transferred to fresh media, allowing the culture of pure astrocytes.

쥐 새끼 뇌에서 성상세포의 1차 배양 생성

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Primary cell culture preparation

...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuronal Culture Techniques

Primary Neuronal Culture

A Simple Technique to Isolate and Culture Murine Astrocytes

Source: Wolfes, A. C., et al., <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/56092">Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol.</a> J. Vis. Exp. (2018)
The video demonstrates a simple method to culture murine astrocytes in isolation from other brain cells. During culturing, by using astrocyte-specific media and inhibiting the adherence of non-astrocytic cells, the method selectively cultures astrocytes. These cultured astrocytes exhibit stellate morphology with fine processes.

쥐 성상세포를 분리하고 배양하는 간단한 기술

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Rat or Mouse Brain Dissection
...

Vivo에서경작-Murine 이다 빠르고, 간단 하 고 저렴 한 AWESAM 프로토콜을 사용 하 여 같은

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

마우스 두피 Astrocytes의 분리와 문화

모델링 성상 세포종 병인

사이토 반응성 및 확산에서 체 외에 허 혈 성 같은 조건 모니터링

쥐 성상 세포와 미세 아교 세포의 1 차 배양과 근 위축성 측삭 경화증 연구에서의 사용

마우스 성상세포의 분리 및 직접 뉴런 리프로그래밍

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies( 체외 분석 및 전사체 연구를 위한 성인 마우스 척수에서 순수 성상교세포 및 미세아교세포의 분리)

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies( 체외 분석 및 전사체 연구를 위한 성인 마우스 척수에서 순수 성상교세포 및 미세아교세포의 분리)

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies( 체외 분석 및 전사체 연구를 위한 성인 마우스 척수에서 순수 성상교세포 및 미세아교세포의 분리)

쥐 새끼 뇌에서 성상세포의 1차 배양 생성

쥐 성상세포를 분리하고 배양하는 간단한 기술