Name: investigating von willebrand factor pathophysiology using a flow chamber model of von willebrand factor-platelet string formation
Uploaded: 2017-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
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앨리슨 Michels 프레더릭 밴팅과 찰스 베스트 캐나다 대학원 장학금에서는 캐나다 연구소의 건강 연구 (CIHR)의 받는 사람입니다. 로 라 L. Swystun 받는 사람 CIHR 화목입니다. 데이비드 Lillicrap 캐나다 연구의 자에 분자 Hemostasis의 받는 사람입니다. 이 연구는 일부 CIHR 그랜트 (MOP-97849)를 운영 하 여 투자 되었다.

이 연구는 연구 윤리 위원회의 여왕의 대학, 캐나다에 의해 승인 되었다.
1. 내 피 성장 세포 자극
<ol><li>
콜라겐-코트 6 잘 조직 문화 접시.
	<ol>
<li>24 미리, 코트 콜라겐의 1 mL와 함께 37 ° C에서 6 잘 조직 문화 접시 h 버퍼 (50 µ g/mL 쥐 꼬리 콜라겐 타입 1 0.02 M 빙 초 산으로).</li>
		<li>2 mL의 행 크의 균형 소금 솔루션 (HBSS)로 두 번 웰 스 워시. 참고: 판 수 깡통 호 일에 싸여 있으며 4 ° c.에 밀폐 비닐 봉지에 저장</li>
	</ol>
</li>
	<li>내 피 세포 성장 매체 포함 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 2 mL에 잘 당 1 x 106 세포의 조밀도에 씨. 37 ° C (5% CO2)에서 24 h에 대 한 셀을 품 어. 참고: 여기, 혈액 결과 내 피 세포 (BOECs) 구절 5와 15 사이 사용 되었다. BOECs는 스타크 외 에 참조 하는 메서드를 사용 하 여 wildtype VWF 시퀀스와 건강 한 지원자에서 고립 되었다 22 정돈23으로 앞서 설명한 것과 비슷한 방식입니다.</li>
	<li>24 시간 후 매체를 제거 하 고 세척 HBSS 셀.</li>
	<li>혈 청 무료 매체 (FBS 없이 최소한의 필수 성장 매체) 포함 phorbol myristate 12 13-아세테이트의 1 mL을 추가 (PMA; 100 nM), unfractionated 히스톤 (어), 그리고 홍콩 또는 2 h 37 ° C (5% CO2)에 대 한 셀에 HR (25 µ g/mL에서 모두). 참고: 히스톤의이 농도 Xu 그 외 여러분 에 의해 이전에 체 외에서 세포 독성 보고에 근거 했다 24 와 브람스 외. 25 50 µ g/mL를 사용 하는.</li>
	<li>2 시간 후 매체를 수집 하 고 분석까지-20 ° C에서 그것을 저장.</li>
</ol>2. VWF 정량화 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 (ELISA)에 의해
<ol><li>버퍼 (10 m m 염기 나트륨 인산 염 및 145 m m 염화 나트륨, pH 7.2) 포함 10 µ g/mL polyclonal 안티-VWF 항 체 4 ° c.에 하룻밤 코팅의 100 µ L와 미 판 코트</li>
	<li>세 번 세척 버퍼의 250 µ L와 접시 세척 (10 m m 염기 나트륨 인산 염, 염화 나트륨 500 m m, 0.1% 트윈 20, pH 7.2).</li>
	<li>1: 2와 1:4 워시 버퍼와 중간 샘플을 희석 하 고 표준 곡선, 1시 10분에서 시작에 대 한 일반적인 참조 플라즈마를 사용 하 여 희석.</li>
	<li>100 µ L 희석된 샘플의 접시와 표준 4 ° c.에서 하룻밤</li>
	<li>워시 워시 버퍼의 250 µ L로 세 번 접시.</li>
	<li>접시에 HRP 활용 된 탐지 항 체 (1.1 µ g / µ L 워시 버퍼에서) 안티 VWF 희석된의 100 µ L을 추가 하 고 실 온에서 1 h에 품 어.</li>
	<li>접시를 세척 하 고 제조업체의 지침에 따라 O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) 시 약을 10 분 동안 품 어.</li>
	<li>그래서 1 M H2의 100 µ L 반응 중지4 와 읽기 492에 접시 nm.</li>
</ol>3. 고체 상 히스톤-VWF 바인딩 분석 결과
<ol><li>히스톤 0.5% 나트륨 deoxycholate 50 m m 탄산 버퍼 (pH 9.6) 4 ° c.에 하룻밤 10 µ g/mL에에서 희석 한 microplate 코트</li>
	<li>0.1%를 보충 하는 PBS의 250 µ L로 세 번 접시 세척 트윈 20, 세척 사이 10 분 동안 잠복기.</li>
	<li>200 µ L의 PBS 0.1% Tween 20과 1% 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 실 온에서 1 h에 대 한 보충으로 접시를 차단 합니다.</li>
	<li>3.2 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>직렬로 플라스마 파생 된 인간의 VWF/요인 VIII 염 분 버퍼에 25 mU/ml 200 mU/mL에서 복잡 한 희석 (염화 나트륨 10 m m 염기 나트륨 인산 염, , 500 m m와 0.1% 트윈 20, pH 7.2). 실 온에서 2 h에 대 한 접시에 100 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>3.2 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>PBS-0.1% 트윈 20, 1:1,000 토끼 polyclonal 안티-VWF 항 체 HRP를 실 온에서 1 h에 대 한 활용을 포함 하는 솔루션의 100 µ L를 사용 하 여 고정된 히스톤 VWF의 바인딩을 검색.</li>
	<li>3.2 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>OPD 시 약의 100 µ L 30 분 동안 접시를 품 어 하 고 그래서 1 M H2의 100 µ L 반응 중지4. 492에서 광학 밀도 측정 nm.</li>
</ol>4. 시드 흐름 챔버에 내 피 세포
<ol><li>1 mL 주사기 Luer 잠금에 콜라겐 코팅 버퍼 (2.1 단계에서 설명) 0.5 mL를 로드 합니다.</li>
	<li>흐름 챔버 슬라이드의 저수지에 주사기 Luer 잠금 끝을 트위스트.</li>
	<li>전체 레인 코팅 및 각 저수지가 가득 때까지 플런저를 천천히 누릅니다. 각 레인에 대 한 반복 하 고 24 시간 동안 37 ° C에서 챔버를 품 어.</li>
	<li>콜라겐 코팅 버퍼 200 μ 피펫은와 발음 1 mL HBSS와 다른 주사기를 로드 하 고 천천히 흐름 챔버의 각 레인을 세척 하는 플런저를 누릅니다. 흐름 챔버의 반대 끝에 200 μ 피 펫 세척 발음 두 번 반복 합니다.</li>
	<li>10% 성장 매체에 3 x 106 셀/mL 내 피 세포 (BOEC) 솔루션의 약 100 µ L 플라스틱 FBS 흐름 챔버의 차선으로. 참고: 내 피 세포의 시드 밀도 챔버의 용량을 초과합니다. 이 최대한 채널 적용; 비 부착 한 세포는 연속적인 세척 단계에서 제거 됩니다.</li>
	<li>품 어 24 h. 변경에 대 한 37 ° C에서 챔버 매체 (4.4 단계) 에서처럼 Luer 잠금 주사기를 사용 하 여 모든 8-12 h. 차선에서 볼 수 없는 거품 인지 확인 합니다.</li>
</ol>5. 인간의 전체 혈액에서 혈소판을 분리
<ol><li>생물 안전 캐비닛 30g 바늘, 무 첨가 3 mL 혈액 컬렉션 vacutainer를 산 시트르산 포도 당 버퍼 (85mm trisodium 시트르산, 111 m m D-포도 당, 그리고 71 m m 구 연산 산 성, pH 4.5)의 300 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>베르나르도 외26의해 비슷한 프로토콜 다음 venipuncture 3 ml (3 관), 여 (7 일 동안 항 혈소판 및 비 스테로이드 성 항 염증 약물에서 무료) 건강 한 지원자에서 전체 혈액 수집 합니다.</li>
	<li>초기 조직 손상에서 venipuncture와 관련 된 자발적인 혈소판 활성화를 발생할 수 있습니다 첫 번째 튜브를 삭제 합니다.</li>
	<li>부드럽게 반전 하는 vacutainers 세 번 혈액 응고 제와 혼합.</li>
	<li>24 ° C (실내 온도)에서 15 분 동안 150 x g에서 vacutainers 원심</li>
	<li>천천히 생물 안전 캐비닛에 피 펫과 혈소판이 풍부한 혈장 (표면에 뜨는)를 제거 하 고 신중 하 게 15 mL 원뿔 튜브에 그것을 전송. 잠재적인 크로스-활성화를 피하기 위해 단일 원뿔 관에 각 vacutainer의 혈소판이 풍부한 볼륨을 전송 합니다. 참고: 혈소판 격리 생물학 안전 장은 세균 오염 및 잠재적인 인공 혈소판 및 내 피 활성화를 방지 하기 위해 수행 되어야 한다.</li>
	<li>900 x g 작은 공의 혈소판에 24 ° C (실내 온도)에서 10 분에 원뿔 튜브 원심</li>
	<li>플라스틱 및 혈소판 가난한 상쾌한 삭제.</li>
	<li>시트르산 포도 당 나트륨 (CGS) 버퍼 (13 m m 나트륨 구 연산 염, 30 mM D-포도 당, 및 120 m m 염화 나트륨, pH 7.0)의 1 mL와 함께 신중 하 게 펠 릿을 세척. 참고:는 혈소판에에서 나타납니다 wisp 모양의 형성 때 CGS 버퍼 추가 되 고 펠 릿 부드럽게 resuspended. 혈소판 활성화에 의해 오염 된 샘플에는 혈소판 쉽게 resuspend 하지 않습니다 고 clumpy 표시 됩니다.</li>
	<li>일단 완벽 하 게 resuspended, 원심에서 24 ° C (실내 온도)에서 10 분 동안 900 x g 샘플.</li>
	<li>CGS 워시 버퍼를 제거 하 고 Tyrode의 버퍼 (138 m m 염화 나트륨, 5.5 m m D-포도 당, 12 m m 탄산, 2.9 m m 염화 칼륨, 그리고 0.36 m m 염기 나트륨 인산 염, pH 7.4) 3 mL에 펠 릿을 resuspend. 혈소판의 완전 한 물의 resuspension를 확인 하 고, 집계, 관찰 하는 경우 삭제 샘플.</li>
	<li>20 mM DiOC6 재고 솔루션 (디졸브 57.25 mg에 메탄올의 5 mL)에서 각 3 mL 원뿔 튜브 1 µ M의 최종 농도 대 한 세척된 혈소판의 1.5 µ L를 추가 합니다. 참고: DIOC6 라벨 혈소판이이 실험에 사용 되는 녹색 형광 미토 콘 드 리아 염료 이다.</li>
	<li>3 microcentrifuge 1.5 mL 튜브에 씻어 혈소판 솔루션의 aliquot 1 mL. 참고:이 실험에 필요한 혈소판 볼륨은 기준으로 계산 흐름 챔버 크기, 원하는 전단 응력 실험 (단계 6.5)의 길이에. 이 프로토콜은 조건이 유체 흐름에 대 한 충분 한 볼륨을 변경 조정할 수 있습니다.</li>
	<li>격리의 2 h 이내 씻어 혈소판을 사용 합니다.</li>
</ol>6. 흐름 장치 어셈블리
<ol><li>메 마른 실리콘 한쪽 끝에 남성 팔꿈치 Luer 연결관 및 다른 여성 Luer 잠금 어댑터 (실내 직경 1.6 m m의) 튜브 70 c m 조각을 연결 합니다.</li>
	<li>20 mL 주사기에 튜브에 부착 된 여성 Luer 잠금 어댑터를 연결 합니다.</li>
	<li>6.1 및 6.2 3 동일한 주사기 튜브 연결을 생성 하는 두 번 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>
주사기 펌프를 사용 하 여 유체 흐름을 생성. 주사기 펌프에 다음과 같은 설정을 입력: 주사기와 흐름 속도의 실내 직경. 참고: 20 mL 주사기는 19.55 m m 내부 직경. 흐름 속도 원하는 전단 속도/전단 응력 및 흐름 챔버의 크기에 따라 계산 됩니다. 1 dyn/cm2 (에서 관찰 된 낮은 정 맥 전단), 달성 하기 위해 현재 연구에 사용 된 흐름 챔버 9.37 µ L/min의 유량이 필요 합니다. 히스톤을 연결 하는 정 맥 혈전 증으로 증거 때문에 4.45 dyn/cm2 의 중간 정 맥 전단 선택 됩니다. 이것은 또한 가정에 기초는 버퍼 물에 비슷한 점도 있다. 유량 계산 하는 다양 한 흐름 챔버 크기의 유량에서 찾을 수 있습니다 하는 데 사용 하는 41.7 µ L/분 방정식 다음입니다.<ol>
<li>펌프 주사기 펌프에 단추 옵션을 사용 하 여 액체를 철회를 설정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3 주사기 주사기 펌프에 튜브에 부착 된 로드 하 고 단단히 주사기와 plungers 브래킷을.</li>
	<li>남성 팔꿈치 Luer 살 균 실리콘 튜브의 두 번째 20 cm 조각의 양쪽 끝에 연결 합니다.</li>
	<li>무딘된 18 게이지 바늘을 한 팔꿈치 루어를 연결 합니다.</li>
	<li>흐름 챔버의 3 개의 차선에 대 한 3 개의 동일한 흡입 시스템을 만드는 두 번 반복 합니다. 참고: 실리콘 튜브와 손잡이 10% 표 백제 뒤에 다시 사용 하기 전에 증류수로 세척 될 수 있다. 흐름 챔버를 다시 사용 하는 권장 하지 않습니다.</li>
</ol>7. 현미경 설정
<ol><li>회전 디스크 현미경을 갖춘 완전 자동화 된 단계를 사용 합니다. 405, 458, 491, 543, 633 nm 레이저 라인을 제공 하는 레이저 출시와 함께 조명을 수행 합니다. 20 X 목적으로 모든 이미지를 캡처하십시오. 분석 소프트웨어 (http://www.well.ox.ac.uk/_asset/file/metamorph-basic-commands.pdf)의 모든 매개 변수를 조정 합니다.</li>
	<li>채널 설정 (배출 필터: 520/35), 491에 여기 nm, 수집에 대 한. 전체 동적 데이터 범위를 얻기 위해 전 하 결합 소자는 전자 멀티 이득의 150, 200 ms의 노출 시간을 곱한 전자를 설정 합니다. 참고: 혈소판 녹색 형광 염료, DiOC6, 파장 맥시 마와 함께 표시 됩니다 (여기, 482 nm; 방출, 504 nm).</li>
	<li>491 nm 레이저 전력 20%로 조정 합니다.</li>
	<li>모든 3 레인의 센터를 표시 하 고 z 범위 1 μ m와 0.5 μ m 단계 크기를 선택 합니다. 모든 10 시간 점 (즉, 기간)의 수와 이미지 캡처 이미지 (즉, 간격) 사이의 시간을 선택 s; 슬라이드 당 "60 시간 점"을 선택 합니다. 3 차선에서 이미지를 캡처하고 지정 된 실험 폴더에 저장을 현미경을 설정 합니다. 참고: 흐름 챔버 3 차선 있기 때문에, 현미경 이미지를 캡처 3 위치 사이 전환 하려면 필요 합니다.</li>
</ol>8. VWF 혈소판 문자열 형성
<ol><li>(4 단계)에서 흐름 상공에서 문화 매체를 제거 단계 4.4 에서처럼 동일한 기술을 사용 하 여.</li>
	<li>중 히 스타 민 (25 µ M), PMA의 100 µ L를 추가 (100 nM), 어, 홍콩, 또는 실 온 및 주변 O2/CO2에서 15 분 동안 BOEC 단층을 자극 (1.4 단계)에서 혈 청 자유로운 매체에 희석 (25 µ g/mL에서 모두) 인사. 참고: 비록 VWF 릴리스에 대 한 필요 하지 않습니다, 37 ° C에서이 자극 수행 향상 됩니다 VWF exocytosis27.</li>
	<li>셋 중 하나를 확인 흐름 챔버의 별도 차선 유지 실험 컨트롤로 치료.</li>
	<li>1 mL 주사기를 사용 하 여 매체를 제거 하 고 씻어 내 피 단층의 secretagogues PBS의 100-200 µ L로 대체.</li>
	<li>장소에 챔버를 확보 하기 위해 혈관 클립을 사용 하 여 슬라이드 스탠드에 흐름 챔버를 탑재 합니다.</li>
	<li>흐름 챔버의 저수지에 70 cm 튜브 (주사기에 연결)의 끝에 사용할 수 있는 남성 Luer 커넥터를 연결 합니다. 두 개의 다른 흐름 챔버 레인에 대 한 반복 합니다.</li>
	<li>주사기 펌프 PBS 세척 제거를 시작 합니다. 피 펫 레인 건조 실행 할 수 있도록 반대 흐름 챔버 저수지로 추가 PBS</li>
	<li>모든 3 개의 차선에 걸쳐 해당 흐름에 대 한 흐름 시스템을 확인 하 고 주사기 펌프를 일시 중지.</li>
	<li>에 대 한 실험 사이 대략 동일한 지역에서 각 레인의 중간에 이미지를 캡처하는 영역을 선택 합니다. 참고: 현미경을 운영 하는 사람 실험 조건에 멀게 될 수 있다. 이 단계를 수행 하면 현미경은 혈소판 흐름 전에 초점을 맞추고 (7 단계 참조).</li>
	<li>여성 luer 커플러를 연결<a> </a>5 mL 주사기 그리고 무료 남성 luer 커넥터 (단계 6.8) 잠수함 무딘된 바늘 1.5 mL microcentrifuge 튜브 세척된 혈소판 솔루션 (5.13 단계)를 포함 하 고. 천천히 그릴 시스템 내에서 아무 공기 방울을 보장 하기 위해 튜브를 통해 혈소판 솔루션.</li>
	<li>5 mL 주사기를 제거 하 고 남성 Luer 흐름 챔버의 오픈이 저수지에 연결. 3 개의 차선에 대 한 반복 합니다.</li>
	<li>주사기 펌프를 다시 시작 하 고 어둠 속에서 10 분에 대 한 단계 7에서에서 현미경 및 프로토콜 설정을 사용 하 여 혈소판 흐름 중 이미지를 캡처하십시오.</li>
	<li>10 분 후 흐름 챔버 저수지에 섭취 튜브에서는 루어를 분리 하 고 내 피 단층을 통해 흐름을 유지 하기 위해 PBS 저수지를 채울.</li>
</ol>9. VWF 혈소판 문자열 정량화
참고: PBS의 지속적인 흐름 이미지 분석을 위한 VWF 혈소판 문자열 연신 율을 유지 하기 위해 필요 합니다. 흐름의 정지 되는 구형 VWF에 되며 VWF 혈소판 문자열 정량화에 악영향을 줄 것 이다. 그것은 이미지 캡처 동안 PBS 가진 각 저수지를 가기로 필수적 이다. HBSS 셀 축소 또는 초연이이 단계 동안 관찰 되는 경우 PBS를 바꿀 수 있습니다.
<ol><li>첫 번째 레인로 시작 하는 슬라이드의 중간에 주위 20 X 객관적 렌즈를 사용 하 여 중복 없이 슬라이드 당 10 이미지를 캡처합니다. 각 레인에 대 한 반복이. 참고: 저수지 주변 지역 난 류 전단 응력 때문에 피해 야 한다.</li>
	<li>"이미지," "조정," 및 "밝기/대비."를 클릭 하 여 밝기를 조정 하는 이미지 프로세싱 소프트웨어를 사용 하 여 준수 혈소판 정량화 충분히 볼 수 있습니다 때까지 스크롤 막대를 끕니다.</li>
	<li>때 3 개 이상의 정렬 된 혈소판 이미지에는 VWF 혈소판 문자열을 기록 합니다. 이미지의 모든 VWF 혈소판 문자열을 계산 합니다. 모든 10 이미지에 대 한 반복 하 고 실험에 대 한 평균. 참고:는 정량화를 수행 하는 사람 실험 조건에 멀게 될 수 있다. 이것은 독립적인 연구8,,2829에 의해 확인 된 대로, VWF에 대 한 공동 얼룩 필요는 없습니다.</li>
	<li>최소한 각 간접적인 평가를 세 번의 실험을 반복 합니다.</li>
</ol>

저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.

VWF 혈소판의 생리 적인 관련성 VWF 고착 효소 ADAMTS13의 그들의 급속 한 해체로 인해 논란이 남아 문자열, 그들은 사이트에서 VWF에 의해 혈소판 모집의 정량 생체 외에서 모델 역 히스톤 레벨5에 증가 지역화는 혈전의 존재 양식을 수 있습니다. 또한, 병 리 thrombotic thrombocytopenic 혈관 (TTP)으로-또는 염증 성 microenvironments-ADAMTS13 활동 같은 부족에 ADAMTS13 활동 저해 VWF 혈소판 문자...

혈전 증 사망률 전세계1 의 주요 원인이 되 고 응답 todysregulated 혈소판 활성화 및 트 롬 빈 세대에 모두 veinsand 동맥에서 개발할 수 있습니다. VWF의 플라스마 수준 혈액 응고의 키 레 귤 레이 터, 그것에 의하여 낮은 수준 (< 50%)로 알려진 폰 Willebrand 질병 (VWD)2 그리고 상부 출혈 장애 발생 (> 150%) 정 맥3 의 위험 증가와 관련 된 고 4 동맥 혈전 증입니다.
VWF는 없으며 및 내 피 세포에 의해 합성 및 혈소판 α과 립 및 WPBs에 각각 저장 multimeric 당단백질 이다. Hemostatic 도전 시 VWF 순환 혈소판 활성화 된 내 피 세포5 또는6의 배 벽 노출 된 콜라겐을 밧줄로 내 피 WPBs에서 발표 될 수 있습니다. 내 피 세포에 VWF의 앵커 P selectin7 그리고 integrin αvβ38에 의해 중재에 표시 되었습니다. 혈소판 알파과 립 점포의 후속 릴리스 더욱 혈소판 혈소판 혈소판 플러그 형성, 응고 캐스케이드 및 섬유 소의 전파에 필요한 비 계에 대 한 상호 작용을 안정 된 VWF 농도 높일 수 있습니다. 증 착입니다. VWF의 혈소판 바인딩 활동 큰 hemostatic 활동9,10를 가진 높은 분자 무게 multimers와 그것의 multimeric 구조에 의해 통제 된다. 혈액 순환, VWF 또한 행위로 VIII 응고 인자에 대 한 캐리어.
유체 전단 응력 VWF 생리학의 필수 레 귤 레이 터 이다. 전단 응력의 부재, VWF 혈소판 당단백질 Ib 접착11에 대 한 바인딩 도메인 은폐 구형 형태로 존재 합니다. 전단 응력은 존재, metalloprotease, disintegrin 및 thrombospondin 모티브 (ADAMTS13), metalloprotease에 대 한 분열 사이트 노출 됩니다. ADAMTS13의 hemostatic 활동12줄일 적나라 하 고 혈소판 장식 VWF 문자열 multimer 크기 조절을 앞.
VWF 이라면 급성 상 단백질, 그리고 수많은 자극, hypoxia13, 감염14및 proinflammatory cytokines를 포함 하 여 내 피 세포에서 VWF 릴리스를 중재에 표시 되었습니다. 다른 비슷한 염증 성 에이전트, extracellular 히스톤 또한 표시 되었습니다 조직의 VWF 릴리스 마우스15,16 와 혈소판 생체 외에서17,18, 의 활성화를 유도 하 19.이 리에 차이점으로 히스톤 하위에 종속 되도록 표시 했다 및 아르기닌 콘텐츠 기능15에 영향을 미칠 수 있습니다. 우리의 연구 목표로 설정 흐름 챔버 리-리치 (홍콩)의 영향을 조사 하 모델과 아르기닌이 풍부한 (HR) 히스톤 하위 및 내 피 VWF 릴리스 및 실시간 혈소판에 secretagogues에 잠재적인 초기 이벤트 캡처 염증 유발 혈전 증
이 흐름 챔버 방법론 생체 외에서 시스템에 시각, 재현성, 고 정량에 vivo에서 상호 subendothelial 콜라겐, 내 피 세포, VWF, 및 혈소판이. VWF 혈소판 상호 작용, WPB 분 비, 혈소판 활성화, VWF 베이스 등을 조절 하는 통로의 모든 측면의 실시간 평가 대 한 수 있습니다. 제어 전단 응력 조건 하에서 VWF의 연구 VWF 릴리스 및 혈소판 바인딩 함수20, WPB 생리학21, VWF 분열 손상 VWD 돌연변이 평가 하 ADAMTS135에 의해 사용 되었습니다. 계량 한 염증 성 자극의 결과로 VWF 혈소판 문자열 형성이이 방법론 사용: extracellular 히스톤.

<table><tbody><tr><td>Calf-thymus unfractionated histones (UH)</td><td>Worthington Biochemical</td><td>HLY</td><td>Reconstituted in serum-reduced media (5 mg/mL)</td></tr><tr><td>Calf-thymus lysine-rich histones (HK)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H5505</td><td>Reconstituted in serum-reduced media (5 mg/mL)</td></tr><tr><td>Calf-thymus arginine-rich histones (HR)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4830</td><td>Reconstituted in serum-reduced media (5 mg/mL)</td></tr><tr><td>Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8139</td><td>Reconstituted in DMSO (20 mM)</td></tr><tr><td>Histamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7125-1G</td><td>Reconstituted in water (50 mg/mL)</td></tr><tr><td>3,3&#039; Dihexyloxacarbocyanine Iodide (DiOC6)</td><td>Invitrogen</td><td>D273</td><td>Reconstituted in methanol (20 mM)</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-VWF Coating Antibody</td><td>DAKO</td><td>A0082</td><td>For VWF ELISA</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-VWF Detection Antibody, HRP conjugated</td><td>DAKO</td><td>P0026</td><td>For VWF ELISA and histone-VWF binding assay</td></tr><tr><td>Nunc MaxiSorp flat-bottom 96-well microplates</td><td>eBioscience</td><td>44-2404-21</td><td>For histone-VWF binding assay</td></tr><tr><td>Immulon 4 HBX Flat Bottom Microtiter 96-Well Plates</td><td>Thermo Scientific</td><td>3855</td><td>For VWF ELISA</td></tr><tr><td>Humate-P</td><td>CSL Behring</td><td>N/A</td><td>Plasma-derived human von Willebrand factor/factor VIII complex</td></tr><tr><td>Normal Reference Plasma</td><td>Precision BioLogic</td><td>CCNRP-05</td><td>For VWF ELISA standard curve</td></tr><tr><td>O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) reagent</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8287</td><td>Equivalent product available through ThermoFisher Scientific (Catalogue Number: 34006)</td></tr><tr><td>EGM-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>For culturing and initial seeding of BOEC</td></tr><tr><td>Hank&#039;s Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14025092</td><td></td></tr><tr><td>Rat-tail Collagen Type 1</td><td>Corning</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Opti-MEM I Reduced Serum Media</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31985070</td><td>For endothelial cell stimulations</td></tr><tr><td>METAMORPH Microscopy Automation and Image Analysis Software</td><td>Molecular Devices</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer Blood Collection Tubes, No Additive</td><td>BD Biosciences</td><td>366703</td><td></td></tr><tr><td>&amp;micro;-Slide III 0.1 (flow chambers)</td><td>Ibidi</td><td></td><td>This product has been discontinued. We suggest using &amp;micro;-Slide VI 0.1 (#80661) or 0.4 (# 80601) and recalculating flow rate and platelet volume needed to maintain a shear stress of 4.45 dyn/cm2</td></tr><tr><td>Silicone Tubing 1.6 mm ID: 5 m, sterilized</td><td>Ibidi</td><td>10842</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lock Connector Female: natural Polypropylene, sterilized</td><td>Ibidi</td><td>10825</td><td></td></tr><tr><td>Elbow Luer Connector Male: white Polypropylene, sterilized</td><td>Ibidi</td><td>10802</td><td></td></tr><tr><td>Blunted 18G Needle</td><td>BD Biosciences</td><td>305180</td><td></td></tr><tr><td>20 mL syringes</td><td>BD Biosciences</td><td>302830</td><td></td></tr><tr><td>Syringe Pump</td><td>New Era Pump Systems Inc. NE-1600 Multi-PhaserTM</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Quorum WaveFX- 4X1 spinning disk microscope</td><td>Quorum Technologies</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Image Processing Software</td><td>ImageJ</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

investigating von willebrand factor pathophysiology using a flow chamber model of von willebrand factor-platelet string formation

폰 Willebrand 인자 (VWF) multimeric 당단백질 응고 요소를 혈소판 접착 력 및 내 피 손상의 사이트에서 집계 하는 중재 하 고 그 순환에 VIII 인자 이다. VWF 내 피 세포에 의해 합성 플라즈마에 constitutively 발표 하거나 또는 hemostatic 도전 하 응답에 온 디맨드 출시 Weibel Palade 시체 (WPBs) 라는 특수 세포에 저장 됩니다. Procoagulant 및 proinflammatory 자극 WPB exocytosis, VWF 출시에 급속 하 게 유도할 수 있다. 대부분 내 피 세포에 의해 풀어 놓인 VWF의 플라즈마;에서 순환 그러나, VWF의 비율 내 피 세포 표면에 고정은 됩니다. 생리 전단의 조건 하에서 내 피 고정 VWF 혈전 형성의 nidus 나타내는 VWF 혈소판 문자열을 형성, 혈소판에 바인딩할 수 있습니다. 시각적으로 재현 하 고 중재 하는 VWF 혈전 형성의 이상에 관련 된 방식으로 캡처 후속 혈소판 및 내 피 세포에서 VWF의 릴리스를 관찰 하는 흐름 챔버 시스템을 사용할 수 있습니다. 이 방법론을 사용 하 여, 내 피 세포는 교양 흐름 챔버에 고 이후에 WPB exocytosis 유도 하 secretagogues와 자극. 씻어 혈소판은 다음 활성화 endothelium에 끼얹는다. 혈소판 활성화 되 고 이후에 유체 흐름의 방향으로 길쭉한 VWF 문자열에 바인딩합니다. Procoagulant 및 proinflammatory 자극으로 extracellular 히스톤을 사용 하 여, 히스톤 치료 내 피 세포 치료 내 피 세포에 비해 증가 VWF 혈소판 문자열 형성을 관찰 합니다. 이 프로토콜 모델의 혈전 증 및 hemostasis 상호 작용 VWF 혈소판의 활성화의 양적, 시각, 그리고 실시간 평가 설명합니다.

직접 내 피 세포에서 VWF 석방에 히스톤의 효과 평가, 우리 2 h 혈 청 무료 중간 포함 PMA (긍정적인 통제), 어, 시간, 및 홍콩에 confluent BOECs 노출. 우리는 홍콩 VWF 단백질 (VWF:Ag) 치료 내 피 세포 (그림 1)의 중간에 2-fold 증가 유도 보였다. 흥미롭게도, BOECs 어와 HR 자극 했다 때 거기 VWF:Ag 덜 발견 되었다 치료 조건에 보다 매체에. 우리는 히스톤 VWF<sup class="x...

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Investigating von Willebrand Factor Pathophysiology Using a Flow Chamber Model of von Willebrand Factor-platelet String Formation

이 문서에서 설명 하는 내 피 폰 Willebrand 평가 하는 방법 요소 릴리스 및 다음 혈소판 유체 전단 응력은 생체 외에서 흐름 챔버 시스템을 사용 하 여 염증 성 자극에 대 한 응답에서에서 캡처.

조사 폰 Willebrand 요소 이상 모델을 사용 하는 흐름 챔버의 폰 Willebrand 요인-혈소판 문자열 형성

Von Willebrand factor (VWF) is a multimeric glycoprotein coagulation factor that mediates platelet adhesion and aggregation at sites of endothelial damage ...

investigating-von-willebrand-factor-pathophysiology-using-flow

Research

JoVE Journal

Medicine

11.1K 조회수.  Queen's University. 이 문서에서 설명 하는 내 피 폰 Willebrand 평가 하는 방법 요소 릴리스 및 다음 혈소판 유체 전단 응력은 생체 외에서 흐름 챔버 시스템을 사용 하 여 염증 성 자극에 대 한 응답에서에서 캡처.

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Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells

Platelet aggregation occurs in response to vascular injury where the extracellular matrix below the endothelium has been exposed. The platelet adhesion cascade takes place in the presence of shear flow, a factor not accounted for in conventional (static) well-plate assays. This article reports on a platelet-aggregation assay utilizing a microfluidic well-plate format to emulate physiological shear flow conditions. Extracellular proteins, collagen I or von Willebrand factor are deposited within the microfluidic channel using active perfusion with a pneumatic pump. The matrix proteins are then washed with buffer and blocked to prepare the microfluidic channel for platelet interactions. Whole blood labeled with fluorescent dye is perfused through the channel at various flow rates in order to achieve platelet activation and aggregation. Inhibitors of platelet aggregation can be added prior to the flow cell experiment to generate IC50 dose response data.

The platelet adhesion cascade takes place in the presence of shear flow, a factor not accounted for in conventional (static) well-plate assays. This article reports on a platelet-aggregation assay utilizing a microfluidic well-plate format to emulate physiological shear flow conditions.

Microfluidic 흐름 전지를 사용하여 흐름에서 혈소판 접착 및 집계

Platelet aggregation occurs in response to vascular injury where the extracellular matrix below the endothelium has been exposed. The platelet adhesion ...

연구

생물학

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of (indirect) in vitro experiments, but none of these is as comprehensive as microfluidic flow chambers. In this protocol, the reconstitution of thrombocytopenic fresh blood with stored blood bank platelets is used to simulate platelet transfusion. Next, the reconstituted sample is perfused in microfluidic flow chambers which mimic hemostasis on exposed subendothelial matrix proteins. Effects of blood donation, transport, component separation, storage and pathogen inactivation can be measured in paired experimental designs. This allows reliable comparison of the impact every manipulation in blood component preparation has on hemostasis. Our results demonstrate the impact of temperature cycling, shear rates, platelet concentration and storage duration on platelet function. In conclusion, this protocol analyzes the function of blood bank platelets and this ultimately aids in optimization of the processing chain including phlebotomy, transport, component preparation, storage and transfusion.

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Platelet transfusion and hemostasis was modeled using blood reconstitution and microfluidic flow chambers to investigate the function of blood banking platelets. The data demonstrate the consequences of platelet storage lesion on hemostasis, in vitro.

미세 유체 흐름 챔버 지혈 및 혈소판 수혈을 모델링하기 위해 재구성 된 혈액을 사용하여<em&gt; 체외</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

생체공학

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the shear stress of flowing blood.
To identify the bacterial and host factors that contribute to vascular adhesion of microorganisms, appropriate models that study these interactions under physiological shear conditions are needed. Here, we describe an in vitro flow chamber model that allows to investigate bacterial adhesion to different components of the extracellular matrix or to endothelial cells, and an intravital microscopy model that was developed to directly visualize the initial adhesion of bacteria to the splanchnic circulation in vivo. These methods can be used to identify the bacterial and host factors required for the adhesion of bacteria under flow. We illustrate the relevance of shear stress and the role of von Willebrand factor for the adhesion of Staphylococcus aureus using both the in vitro and in vivo model.

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

To study the interaction of bacteria with the blood vessels under shear stress, a flow chamber and an in vivo mesenteric intravital microscopy model are described that allow to dissect the bacterial and host factors contributing to vascular adhesion.

생체 외 및 생체 내 모델에서 혈관 벽에서 흐름 조건에 세균 부착을 연구하기 위해

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

면역학 및 감염병학

A Microfluidic Flow Chamber Model for Platelet Transfusion and Hemostasis Measures Platelet Deposition and Fibrin Formation in Real-time

Microfluidic models of hemostasis assess platelet function under conditions of hydrodynamic shear, but in the presence of anticoagulants, this analysis is restricted to platelet deposition only. The intricate relationship between Ca2+-dependent coagulation and platelet function requires careful and controlled recalcification of blood prior to analysis. Our setup uses a Y-shaped mixing channel, which supplies concentrated Ca2+/Mg2+ buffer to flowing blood just prior to perfusion, enabling rapid recalcification without sample stasis. A ten-fold difference in flow velocity between both reservoirs minimizes dilution. The recalcified blood is then perfused in a collagen-coated analysis chamber, and differential labeling permits real-time imaging of both platelet and fibrin deposition using fluorescence video microscopy. The system uses only commercially available tools, increasing the chances of standardization. Reconstitution of thrombocytopenic blood with platelets from banked concentrates furthermore models platelet transfusion, proving its use in this research domain. Exemplary data demonstrated that coagulation onset and fibrin deposition were linearly dependent on the platelet concentration, confirming the relationship between primary and secondary hemostasis in our model. In a timeframe of 16 perfusion min, contact activation did not take place, despite recalcification to normal Ca2+ and Mg2+ levels. When coagulation factor XIIa was inhibited by corn trypsin inhibitor, this time frame was even longer, indicating a considerable dynamic range in which the changes in the procoagulant nature of the platelets can be assessed. Co-immobilization of tissue factor with collagen significantly reduced the time to onset of coagulation, but not its rate. The option to study the tissue factor and/or the contact pathway increases the versatility and utility of the assay.

This paper describes an experimental model of hemostasis that simultaneously measures platelet function and coagulation. Platelet and fibrin fluorescence is measured in real-time, and platelet adhesion rate, coagulation rate, and onset of coagulation are determined. The model is used to determine platelet procoagulant properties under flow in concentrates for transfusion.

혈소판 수혈 및 지혈을위한 미세 유체 유량 용기 모델은 실시간으로 혈소판 증착 및 섬유소 형성을 측정합니다

Microfluidic models of hemostasis assess platelet function under conditions of hydrodynamic shear, but in the presence of anticoagulants, this analysis is ...

Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets

The recruitment of leukocytes upon injury or inflammation to sites of injury or tissue damage has been investigated during recent decades and has resulted in the concept of the leukocyte adhesion cascade. However, the exact molecular mechanisms involved in leukocyte recruitment have not yet been fully identified. Since leukocyte recruitment remains an important subject in the field of infection, inflammation, and (auto-) immune research, we present a straightforward laminar flow-based assay to study underlying mechanisms of the adhesion, de-adhesion, and transmigration of leukocytes under venous and arterial flow regimes. The in vitro assay can be used to study the molecular mechanisms that underlie the interactions between leukocytes and their cellular partners in different models of vascular inflammation. This protocol describes a laminar flow-based assay using a parallel-flow chamber and an inverted phase contrast microscope connected to a camera to study the interactions of leukocytes and endothelial cells or platelets, which can be visualized and recorded then analyzed offline. Endothelial cells, platelets, or leukocytes can be pretreated with inhibitors or antibodies to determine the role of specific molecules during this process. Shear conditions, i.e. arterial or venous shear stress, can be easily adapted by the viscosity and flow rate of the perfused fluids and the height of the channel.

Leukocytes avidly interact with vascular cells and platelets after vessel wall injury or during inflammation. Here, we describe a straightforward laminar flow-based assay to characterize the molecular mechanisms that underlie the interactions between leukocytes and their cellular partners.

교양된 혈관 세포에 부착 혈소판 백혈구 신규 모집 조사 하 층 플로우 기반 분석

The recruitment of leukocytes upon injury or inflammation to sites of injury or tissue damage has been investigated during recent decades and has resulted ...

Pneumococcus Infection of Primary Human Endothelial Cells in Constant Flow

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von Willebrand Factor (VWF). This glycoprotein changes its molecular conformation in response to shear stress, thereby exposing binding sites for a broad spectrum of host-ligand interactions. In general, culturing of primary endothelial cells under a defined shear flow is known to promote the specific cellular differentiation and the formation of a stable and tightly linked endothelial layer resembling the physiology of the inner lining of a blood vessel. Thus, the functional analysis of interactions between bacterial pathogens and the host vasculature involving mechanosensitive proteins requires the establishment of pump systems that can simulate the physiological flow forces known to affect the surface of vascular cells.
The microfluidic device used in this study enables a continuous and pulseless recirculation of fluids with a defined flow rate. The computer-controlled air-pressure pump system applies a defined shear stress on endothelial cell surfaces by generating a continuous, unidirectional, and controlled medium flow. Morphological changes of the cells and bacterial attachment can be microscopically monitored and quantified in the flow by using special channel slides that are designed for microscopic visualization. In contrast to static cell culture infection, which in general requires a sample fixation prior to immune labeling and microscopic analyses, the microfluidic slides enable both the fluorescence-based detection of proteins, bacteria, and cellular components after sample fixation; serial immunofluorescence staining; and direct fluorescence-based detection in real time. In combination with fluorescent bacteria and specific fluorescence-labeled antibodies, this infection procedure provides an efficient multiple component visualization system for a huge spectrum of scientific applications related to vascular processes.

This study describes the microscopic monitoring of pneumococcus adherence to von Willebrand factor strings produced on the surface of differentiated human primary endothelial cells under shear stress in defined flow conditions. This protocol can be extended to detailed visualization of specific cell structures and quantification of bacteria by applying differential immunostaining procedures.

일정한 흐름에 있는 1 차적인 인간 내피 세포의 폐렴구균 감염

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von ...

In Vitro Microfluidic Disease Model to Study Whole Blood-Endothelial Interactions and Blood Clot Dynamics in Real-Time

The formation of blood clots involves complex interactions between endothelial cells, their underlying matrix, various blood cells, and proteins. The endothelium is the primary source of many of the major hemostatic molecules that control platelet aggregation, coagulation, and fibrinolysis. Although the mechanism of thrombosis has been investigated for decades, in vitro studies mainly focus on situations of vascular damage where the subendothelial matrix gets exposed, or on interactions between cells with single blood components. Our method allows studying interactions between whole blood and an intact, confluent vascular cell network.
By utilizing primary human endothelial cells, this protocol provides the unique opportunity to study the influence of endothelial cells on thrombus dynamics and gives&#160;valuable insights into the pathophysiology of thrombotic disease. The use of custom-made microfluidic flow channels allows application of disease-specific vascular geometries and model specific morphological vascular changes. The development of a thrombus is recorded in real-time and quantitatively characterized by platelet adhesion and fibrin deposition. The effect of endothelial function in altered thrombus dynamics is determined by postanalysis through immunofluorescence staining of specific molecules.
The representative results describe the experimental setup, data collection, and data analysis. Depending on the research question, parameters for every section can be adjusted including cell type, shear rates, channel geometry, drug therapy, and postanalysis procedures. The protocol is validated by quantifying thrombus formation on the pulmonary artery endothelium of patients with chronic thromboembolic disease.

We present an in vitro vascular disease model to investigate whole blood interactions with patient-derived endothelium. This system allows the study of thrombogenic properties of primary endothelial cells under various circumstances. The method is especially suited to evaluate in situ thrombogenicity and anticoagulation therapy during different phases of coagulation.

시험관 에서 미세 유체 질환 모델 전체 혈액 내피 상호 작용 및 혈전 역학을 실시간으로 연구

The formation of blood clots involves complex interactions between endothelial cells, their underlying matrix, various blood cells, and proteins. The ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the formation of thrombi that occlude the vasculature and injure organs, with life-threatening consequences. This motivates scientific research on platelet function and the development of methods to track cell-biological processes as they occur under flow conditions.
A variety of flow models are available for the study of platelet adhesion and aggregation, two key phenomena in platelet biology. This work describes a method to study real-time platelet degranulation under flow during activation. The method makes use of a flow chamber coupled to a syringe-pump setup that is placed under a wide-field, inverted, LED-based fluorescence microscope. The setup described here allows for the simultaneous excitation of multiple fluorophores that are delivered by fluorescently labeled antibodies or fluorescent dyes. After live-cell imaging experiments, the cover glasses can be further processed and analyzed using static microscopy (i.e., confocal microscopy or scanning electron microscopy).

This work describes a fluorescence microscopy-based method for the study of platelet adhesion, spreading, and secretion under flow. This versatile platform enables the investigation of platelet function for mechanistic research on thrombosis and hemostasis.

흐름하에있는 혈소판 탈식 및 분비의 라이브 셀 이미징

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the ...

A Uniform Shear Assay for Human Platelet and Cell Surface Receptors via Cone-plate Viscometry

Many biological cells/tissues sense the mechanical properties of their local environments via mechanoreceptors, proteins that can respond to forces like pressure or mechanical perturbations. Mechanoreceptors detect their stimuli and transmit signals via a great diversity of mechanisms. Some of the most common roles for mechanoreceptors are in neuronal responses, like touch and pain, or hair cells which function in balance and hearing. Mechanosensation is also important for cell types which are regularly exposed to shear stress such as endothelial cells, which line blood vessels, or blood cells which experience shear in normal circulation. Viscometers are devices that detect the viscosity of fluids. Rotational viscometers may also be used to apply a known shear force to fluids. The ability of these instruments to introduce uniform shear to fluids has been exploited to study many biological fluids including blood and plasma. Viscometry may also be used to apply shear to the cells in a solution, and to test the effects of shear on specific ligand-receptor pairs. Here, we utilize cone-plate viscometry to test the effects of endogenous levels of shear stress on platelets treated with antibodies against the platelet mechanosensory receptor complex GPIb-IX.

We describe an in-solution method to apply uniform shear to platelet surface receptors using cone-plate viscometry. This method may also be used more broadly to apply shear to other cell types and cell-fragments and need not target a specific ligand-receptor pair.

원뿔형 플레이트 점도를 통한 인간 혈소판 및 세포 표면 수용 체에 대 한 균일 한 전단 분석

Many biological cells/tissues sense the mechanical properties of their local environments via mechanoreceptors, proteins that can respond to forces like ...

<meta charset="utf8"></head><body>Trauma and Transfusion에서 혈소판 기능을 평가하기 위한 플랫폼

Microfluidics in Assessing Platelet Function

Microfluidics incorporate physiologically relevant substrates and flows that mimic the vasculature and are, therefore, a valuable tool for studying aspects of thrombosis and hemostasis. At high-shear environments simulating arterial flow, a microfluidic assay facilitates the study of platelet function, as platelet-rich thrombi form in a localized stenotic region of a flow channel. Utilizing devices that allow for small sample volume can additionally aid in evaluating platelet function under flow from volume-limited patient samples or animal models. Studying trauma patient samples or samples following platelet product transfusion may aid in directing therapeutic strategies for patient populations in which platelet function is critical. Effects of platelet inhibition via pharmacological agents can also be studied in this model. The objective of this protocol is to establish a microfluidic platform that incorporates physiologic flow, biological surfaces, and relevant hemostatic mechanisms to assess platelet function with implications for the study of trauma induced coagulopathy and transfusion medicine.

<meta charset="utf8"></head><body>혈소판 기능 평가에서의 미세유체역학(Microfluidics in Assessing Platelet Function)

Platelet function under flow can be assessed and simulated hemostatic resuscitation can be modeled using a microfluidic device, which has applications in trauma and transfusion medicine.

혈소판 기능 평가에서의 미세유체역학(Microfluidics in Assessing Platelet Function)

Microfluidics incorporate physiologically relevant substrates and flows that mimic the vasculature and are, therefore, a valuable tool for studying ...