Name: targeting biofilm associated staphylococcus aureus using resazurin based drug-susceptibility assay
Uploaded: 2016-05-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
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We thank Saran Kupul for technical assistance. This work was supported in part by NIH grant R01-AI104952 to FW. Further support was provided by the University of Alabama at Birmingham (UAB) Center for AIDS Research (CFAR), an NIH funded program (P30 AI027767) that was made possible by the following NIH Institutes: NIAID, NIMH, NIDA, NICHD, NHLDI, NIA.

1. 바이오 필름 개시 <ol><li> 영양이 풍부한 매체에 바이오 필름 생산 유기체의 문화를 성장. 글리세롤 재고 뮐러 - 힌튼 매체의 10ml에 황색 포도상 구균 균주 뉴먼을 접종한다. S.의 처리와 관련된 모든 작업을 수행합니다 장갑 및 바이오 안전성 캐비닛 내 구균. </li><li> 회전 진탕 (100 ~ 200 RPM)에 37 ℃에서 16 시간 동안 품어. </li><li> 분광 광도계 및 표준 큐벳 (: 1cm 경로 길이)를 사용하여 배양 OD (600)를 결정한다. </li><li> 수식을 사용하여 chelexed 로즈웰 파크 기념 연구소 매체 (CRPMI) 9 0.1 OD 600 (접종)을 접종 20 ㎖를 준비하는 데 필요한 문화의 부피 (V)를 계산 : [V = 20 ㎖ * 0.1 / OD 600 (문화 )] 참고 : 참조 9 CRPMI 준비에 대한 세부 정보를 제공합니다. <ol><li> 10,000 × g으로 1 분간 회전시켜 원심 분리기 튜브 및 펠렛 세포 (위)에서 계산 된 문화 볼륨을 추가합니다. 처리장에생물막 접종 재, 20 ㎖ CRPMI의 소비 성장 매체에 resuspend 세포 펠렛을 대기음. </li></ol></li><li> 25 ml의 저수지로 접종을 따르십시오. </li><li> 조심스럽게 똑바로 잡아 당겨 멸균 96 웰 못 판에서 뚜껑을 제거합니다. 참고 : 관리 아래 뚜껑에서 매달려 못을 오염되지 않도록주의해야합니다. 뚜껑은 바이오 안전성 캐비닛 내에서 깨끗한 표면에 거꾸로 배치 할 수 있습니다. </li><li> 200 ㎕를 멀티 채널 피펫을 사용하여 바닥 판의 G 개의 행 (A)의 각 웰에 125 ㎕의 균액을 추가한다. </li><li> 불임 제어와 같은 행 H의 각 웰에 125 ㎕의 멸균 CRPMI 매체를 입력합니다. </li><li> 페그 - 뚜껑을 타고 아래로 향하게 못 함께 접시 바닥 위를 유지. 조심스럽게 각각의 우물과 개별 못 맞 춥니 다. 플레이트와 못 사이의 물리적 접촉을 피하십시오. 정렬되면, 조심스럽게 아래로 뚜껑을 낮 춥니 다. 말뚝 이후에 수행 재조정이 바닥 판은 계속 할 수 만진로 오정렬을 피행 H.에서 aminate 불임 컨트롤 </li><li> 단단히 밀봉 밀봉 가능한 플라스틱 백에 증발 장소 않도록 파라핀 필름 접시에 뚜껑을 밀봉. 증발을 최소화하기 위해 가능한 한 낮게 가방 풍량 유지. </li><li> 5 % CO 2 인큐베이터에서 48 시간 동안 37 ° C에서 진탕없이 인큐베이션. 참고 : 성장의 48 시간은 S. 최적왔다 아우 레 우스는하지만, 다를 사용 유기체 기초. 참고 : 정적 배양 좋은 출발점이지만 부드럽게 마이크로 통에 150 rpm으로 진탕, 분석을 최적화하는 것은 일부 S.의 biofilm 형성을 향상시킬 수있는 가능한 변화입니다 구균이 분리합니다. </li></ol> 생물막 도전 플레이트 2. 준비 <ol><li> 일관되지 않은 결과를 방지하려면 생물막 도전의 날에 신선한 96 웰 플레이트를 가지고 H.에 B를 행의 각 웰에, 실온으로 평형 CRPMI의 100 μl를 추가, 200 μl를 보유 할 수있는 96 웰 플레이트를 이용미디어의 쐐기 내부이며, 생물막 개시 판의 동일 치수 웰 특징 때. </li><li> 단계 270에서, 최종 희석액을 설명하기 위하여, 원하는 최종 농도의 2 배 CRPMI 1.0 ㎖에 별도로 4 시험 화합물까지 희석. 참고 : 좋은 출발점이 플랑크톤 세포의 억제 농도 위의 8 배이다. </li><li> A3, 우물 A12에 A10에서 A9에 우물 A7에서 A6에 우물의 A4의 화합물 2, 화합물 3, 화합물 4 웰 A1에서 화합물 1의 200 μl를 추가합니다. </li><li> 직렬 멀티 채널 피펫을 사용하여 시험 화합물을 희석 및 B 로우와 혼합하는 로우 A로부터 100 μl를 옮긴다. </li><li> 이 방식으로, 웰에 웰 100 μL를 전송하는 것을 계속한다. 각 전송 후에 혼합 및 행 F.에서 중지 </li><li> 혼합 한 후, 폐기물 용기에 행 F 100 μl를 추방. 행 G와 H.에 액체를 전송하지 마십시오 </li><li> 멀티 채널 피펫에를 사용하여 플레이트의 각 웰에 CRPMI의 100 μl를 추가200 μL에 볼륨을 가지고. 최종 플레이트 레이아웃 그림 1을 참조하십시오. </li></ol> 3. 바이오 필름 도전 <ol><li> 생물막 개시 판의 동일 치수 웰 특징 신선한 멸균 96- 웰 플레이트에 인산염 완충액 (PBS) 200 μL를 추가한다. </li><li> 배양 생물막 개시 판에서 플라스틱 가방 및 파라핀 필름을 제거합니다. </li><li> 똑바로 덮개를 들어 올립니다. 바이오 필름에 손상을 수도로 못 플레이트 바닥 사이의 접촉을 피하십시오. (3.8 참조) 이후 OD (600) 분석을 위해 바닥 부분을 유지합니다. </li><li> (단계 3.1) PBS를 포함하는 판에 페그 - 뚜껑을 배치하여 플랑크톤 세포를 씻어. PBS에서 들어 올려 5 초 동안 못 잠수함, 그리고 잘 측면에 대해 못을 칠 않도록주의하면서, 한 번 더 잠수함. </li><li> 도전 판에 세정 페그 뚜껑을 놓습니다. 생물막은 선도가 손상 될이 같은 구슬과 바닥면 사이의 불필요한 접촉을 피할 것일관성없는 결과. </li><li> 단계 1.10에 설명 된대로 인감 파라핀 필름 판과는 밀봉 비닐 봉지에 넣습니다. </li><li> 5 % CO 2 인큐베이터에서 37 ° C에서 24 시간 동안 진탕없이 플레이트를 인큐베이션. </li><li> 3.3에서 생물막 개시 판의 바닥을보십시오. 잘 멀티 채널 피펫을 사용하여 각 박테리아를 재현 탁하고 행 H. 모든 우물하지만 불임 컨트롤에서 발생하는 성장을 확인하기 위해 적절한 마이크로 플레이트 리더로 OD 600을 측정 </li></ol> 4. 바이오 필름 결정 <ol><li> 변환을 레사 주린 검출하기위한 배양 챔버와 운동 형광 판독을 복용 할 수있는 장착 된 플레이트 리더를 사용합니다. 530 nm의 여기 및 590 nm의 방출을 사용하여 24 시간 운동 형광 측정을 설정합니다. </li><li> 37 ° C에 챔버 온도를 설정하고 판 매 20 분을 읽을 수 있습니다. 제조자의 설명서 Printed에 따른 플레이트의 바닥에서 측정하는 플레이트 판독기 설정TIONS. </li><li> 멸균 96 웰 플레이트에 멀티 채널 피펫 PBS 200 μl를 추가하여 세척 접시를 준비합니다. </li><li> 0.8 mg을 400 μL를 첨가하여 생물막 복구 매체를 준비 / 16 μg의 / ㎖ 레사 주린 최종 농도 CRPMI 배지 20 ㎖에 원액 레사 주린 ㎖로. 참고 : 레사 주린 알려진 피부 자극을 일으킬 수 있습니다. 처리하는 동안 실험실 코트, 고글, 장갑을 사용합니다. 생물막 복구 매체로서 CRPMI는 낮은 배경 신호를 제공하기 때문에 사용되었지만 적절한 경우는 뮐러 힌튼 배지로 대체 할 수있다. </li><li> 신선한 96- 웰 플레이트의 각 웰에 멀티 채널 피펫 생물막 회복 배지 150 μl를 추가한다. </li><li> 바이오 안전성 캐비닛에 인큐베이터에서 전송 도전 판 조심스럽게 비닐 봉지에 밀봉 필름을 제거합니다. </li><li> 도전 판에서 페그 뚜껑을 제거하고 3.4에 기술 된 바와 같이 PBS에서 플랑크톤 세포를 씻어. 이후 OD 600 아나의 도전 판의 바닥을 유지용해 (4.10 참조). </li><li> 세정 후, 생물막 복구 매체를 포함하는 접시 바닥에 PEG-뚜껑을 놓는다. </li><li> 주변 우물의 바닥을 방해하지 않도록주의, 파라핀 필름 접시의 측면을 감싸. 즉시 판을 배치 한 후, 플레이트 리더에 배치 단계 4.1에서 이전에 운동 프로토콜 레사 주린했다 시작하여 24 시간의 기간 동안 운동 읽기를 시작합니다. </li><li> 또는 도전하는 동안 발생하지 않을 수있다 플랑크톤 세포의 성장을 정량화하기 위해, 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 전체 도전 판 하단의 OD (600)를 참조하십시오. 단계 3.8에 주어진 지시 사항을 따르십시오. 주 : 조심 아니라 바이오 필름을 흘림 세포가 웰의 바닥에 덩어리 성장하는 경향이 각각의 내용을 재현 탁. 잘 내의 기포가 강하게 OD 600 판독을 방해하고 피하거나 읽기 전에 제거해야합니다. </li></ol>

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The authors have nothing to disclose.

여기서는 S. 테스트 억제제의 활성을 결정하기 위해 수정 된 생물막 분석을 설명했다 생물막 관련된 세포의 대사 상태에 초점 구균 생물막. 설명 생물막 시작과 도전 절차 주로 모방 제조업체 권장하지만, 24 시간 억제제 도전을 생존 바이오 필름 관련 세포를 감지하고 정량화하는 염료를 레사 주린의 사용은 크게 세포 (물 목욕 음파를 통해) 복구 및 후속 열거의 권장 절차를 간소화 CFUs의 계산을 통해의 생존 세포. 이 제조업체에서 권장하는 절차를 집중하고 자동화하는 것은 비실용적 적어도 5 추가 조작 단계, 그들 각각이 발생하기 쉬운 오류, 노동을 포함한다. 페그 플레이트 분석의 판독 절차를 간소화의 장점은 높은 처리량 운영 및 응용 프로그램에 대한 매력을 증가시킨다. 단계의 수에 의하여 긴 프로토콜이 procedur 비록전자는 몇 가지 중요한 단계와, 오히려 개념적으로 간단합니다. 가장 결정적 반복적으로 동일한 품질의 바이오 필름을 성장하는 능력이 재생 가능한 결과를 얻기 위해 필수적이다. 제거하거나 페그 뚜껑을 교체 할 때마다 또한, 하나는주의를 기울여야한다. 결과를 기울이기, 생물막을 방해 것 잘의 벽 언제든지 문의하십시오. 더 때문에, 적절한 세척이 중요하다 : 어떤 시점에서 플랑크톤 세포를 제거하는 실패는 바이오 필름 관련 박테리아를 측정 할 수있는 능력을 제거합니다. 반대로하지만, 세척이 너무 엄격하지 않아야합니다; 추가 세척 단계는 일관성없는 결과를 생산, 바이오 필름을 제거 시작할 수 있습니다. 페그 플레이트 방식은 원하는 결과 데이터에 따라 여러 용도를 가지고있다. 상기 분석은 형광 염료 (11)에 대사 레사 주린 변환 풍부한 정보 운동 측정으로 여기에서 설명된다. 이 변환은 분홍색 파란색에서 색상 변화 (그림 2C), additi에서와 연관된양적 형광 읽기에에, 간단하게 변환을 관찰함으로써 쉽게 초기 질적 판독이 가능합니다. 페그 뚜껑을 제거한 후,이 변환도 사용할 수없는 기능을 형광해야 내지 600 nm에서의 흡광도를 읽어 정량화 할 수있다. 형광 결국 (생존자)를 각 웰에 최대 염료 변환에 대지 만, 염료 전환의 개시는 처리되지 않은 대조군 (도 3)로 대사 적으로 활성 서바이버 인구 대하여 추정하는데 사용될 수있다. 우리 손에서는 레사 주린 변환의 시작에서 각 ~ 100 분 지연 직렬 플랑크톤 세포 배양에서 결정된 바와 같이 처리되지 않은 대조군에 개시 접종 상대 (의 대사 적 활성 세포의 수는 약 10 배 감소에 대응하는 것을 발견 생물막 복구 매체를 이용하여 10 배 증분으로 희석) (데이터는 보이지 않음). 운동 판독을 넘어,하지만 수정 된 말뚝 판방법은 원래의 프로토콜보다 높은 처리량 약물 화면 프로젝트에 더 많은 의무가있다. 대신 운동의 종점으로 변환 레사 주린 측정함으로써, 사용자는 화합물의 간단한 활동을 추적하기 위해 샘플들의 이진 분석을 생성 할 수있다 (즉, 염료 변환 / 변환 없음) 형광 플레이트 판독기에서 24 시간의 필요성을 제거하고, 기존의 배양을 허용. 이 방법은 초음파 처리 및 도금하지 않고 농도 박멸 최소 생물막 결정을 허용한다. 운동 판독은 처리 조건 및 억제제 농도에 따라 생물막의 대사 상태를 추적한다. 조작 단계의 수가 감소 증가 재현성 정량적 판독 방법 (각 도금 반대로 잘 개별적 12)은 사용자가 단일 농도 화면 잠재적 일당 화합물 수천 선별 할 수있다. 사실, PEG 스타일 플레이트는 이전에 높은 처리량 DR에 사용 된생물막 분산제 용 UG 스크린 (여기에서 사용되는) 레사 주린 (13)를 이용 독점 루시퍼 라제 시약보다 훨씬 더 경제적 인 선택이더라도. 기존 제조 업체 프로토콜을 통해 일반적인 개선, 여기에 기능 분석은 특정 한계를 가지고 않지만 하나는 명심해야합니다. 본질적으로, 우리는 바이오 필름 관련 세포의 신진 대사 능력을 측정한다. 이 분석은 바이오 필름의 질량을 측정하거나 생물막 구조 또는 무결성을 약화하지 않습니다. 그 효과는 반드시 검출 될 수 없다. 바이오 필름 ​​(14, 15)에 존재하는 것으로 나타났다 세포, persister, 대사 적으로 비활성,하지만 여전히 생존도 들키지됩니다. 또한, 실제로 생물막 잘못 유도 된 상태의 길이에 따라, 같은 잘못된 반응을 나타날 수 있습니다 살균하지 않고 정지를 유도하는 화합물. 생존 지표는 궁극적으로 이러한 유동 세포 계측법 또는 CFU 같은 더 철 입은 측정 방법 대용 있습니다열거하고, 적합한 방법을 결정해야 최종 사용자. 레사 주린 변환이 내생 NADH에 의존 마지막으로, 세포 내 매장의 고갈은 박테리아 유해 할 수 있습니다. 우리는 S.에 대한 해로운 효과를 관찰하지 않은 반면 구균은 다른 세균 종은 다르게 반응 할 수 있습니다. 사용자적인 테스트를 통해 신뢰성과 재현성 주어진 다양한 생물 및 실험실 환경이 프로토콜을 확인해야합니다.

병원성 미생물이 아닌 급성, 만성 감염 한 선도 생체 바이오 필름을 형성 할 수있다. 바이오 필름 ​​관련 감염은 이물질 (예를 들어, 인공 뼈 대체, 유방 보형물) 또는 기관 튜브 또는 요도 카테터 (2)의 설치의 주입을 포함하는 의료 절차의 심각한 위험 요인이다. 바이오 필름 ​​기반의 감염은 거의 스스로 삭제되지 않습니다 이러한 맥락에서, 항 감염 치료에도 면역 개인에, 거의 항상 필요하다. 황색 포도상 구균이 사용 중에 발생하는 바이오 필름 ​​관련 합병증에 연루 가장 자주 관찰 병원균 중 하나입니다 침습 의료 기기 3. 불행하게도, 보호 장벽 바이오 필름의 본질은 플랑크톤 세포 1,4보다 치료에 더 많은 내성을 만들고, 예측 임상 효능의 평가는 모두 초기의 중요한 부분입니다약물 개발뿐만 아니라 약제 내성 감시. 플랑크톤 배양 집중 실험실 조건이 충실 실제 질환 5 나타내지 수 증가가 확인된다. 상기 문제를 배합 생물막 표현형의 복제가 곤란하고, 기존 생물막 모델 지루한 높은 간 및 검정 내 가변성 6 겪는다. 따라서, 많은 연구자들은 필요성을함으로써 잠재적으로 세균 독성과 질병의 중요한 측면을 무시, 약물 감수성의 플랑크톤 세포 분석에 기본. 여기에서 우리는 특히, 세균을 분석하기위한 S.을 프로토콜을 설명 구균, 96 웰 바이오 필름 ​​기반 시스템을 이용하여 7,8- 미리 성장 생물막있다. biofilm 형성과 도전에 대한 프로토콜은 기본적으로 제조업체의 권장 사항을 따르는 동안, 우리는 biof의 가능성을 정량화하기위한 대안 풍부한 정보 방법론을 제시도전 후 ILM. 간단히, 박테리아 바이오 필름이 접시의 뚜껑에 부착 된 돌출 못에 형성 못 플레이트에서 배양한다. biofilm 형성 한 후, 못 부드럽게 플랑크톤 세포를 제거하는 PBS로 가득 신선한 판의 우물에 담근된다. 페그 뚜껑 부착 생물막으로 분석 될 다양한 농도의 항생제를 함유하는 새로운 도전 판에 전사된다. 제 인큐베이션 후, 뚜껑을 다시 제거하고 세정하고, 그들이 최종 인큐베이션 거쳐 염료, 레사 주린 함유 복구 플레이트에 전달된다. 레사 주린 변환 역학적으로 기록하거나 정의 회복 기간 후 엔드 포인트 판독으로서 수행 될 수있다. 바이오 필름의 가능성을 정량화이 염료 기반 방법은 지루한 CFU (콜로니 형성 단위) 상당히 원래 프로토콜 7에 기재된 계산 기반의 방법론을 다릅니다. 약물 도전 판 및 전환 반응 속도 레사 주린 OD 600 측정 생존 읽기의 역할생물막 생존을위한 빠르고, 신뢰할 수있는, 풍부한 정보와 기술적으로 간단한 분석을 제공하는 각각 플랑크톤과 생물막 세포의 아웃.

<table><tbody><tr><td>&amp;nbsp;Mueller-Hinton Medium</td><td>Oxoid</td><td>CM0405</td><td>Follow recommendations of manufacturer</td></tr><tr><td>RPMI-medium</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>17-105-CV</td><td></td></tr><tr><td>CRPMI</td><td>Ref 9</td><td></td><td>RPMI-1640 medium chelexed for 1 hr with Chelex 100 resin and then supplemented with 10% unchelexed RPMI-1640</td></tr><tr><td>Chelex 100 Resin</td><td>Bio Rad</td><td>142-2822</td><td></td></tr><tr><td>MBEC-plates</td><td>Innovotech</td><td>19111</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin Sodium Salt</td><td>Sigma</td><td>R7017</td><td>800 &amp;micro;g/ml in DI water&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; Filter sterile</td></tr><tr><td>Micro Plate Shaking Platform&amp;nbsp;</td><td>Heidolph Titramax 1000</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytation 3 Plate Reader</td><td>Biotek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gen5 software</td><td>Biotek</td><td></td><td>Recording and analysis of resazurin conversion</td></tr><tr><td>Neocuproine</td><td>Sigma</td><td>N1501&amp;nbsp;</td><td>prepare 10 mM stock in 100% Ethanol, store at -80 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td>Copper sulfate</td><td>Acros Organics</td><td>7758-99-8</td><td>prepare a 100 mM stock solution in water, store at 4 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td>Cu-Neocuproine</td><td>Self-Made</td><td></td><td>Generated by mixing equal molarities of neocuproine and copper sulfate. Mix was diluted in CRPMI medium to desired concentration.</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma</td><td>G3632-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

targeting biofilm associated staphylococcus aureus using resazurin based drug-susceptibility assay

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority of laboratory work is conducted with planktonic cells. Here, we describe a peg plate biofilm assay as performed with Staphylococcus aureus. Bacterial biofilms are grown on pegs attached to a 96-well microtiter plate lid, washed through gentle submersion in buffer, and placed in a drug challenge plate. After subsequent incubation they are again washed and moved to a final recovery plate, in which the fluorescent dye resazurin serves as a viability indicator. This assay offers greatly increased ease-of-use, reliability, and reproducibility, as well as a wealth of data when conducted as a kinetic read. Moreover, this assay can be adapted to a medium-throughput drug screening approach by which an endpoint fluorescent readout is taken instead, offering a path for drug discovery efforts.

레사 주린 분석은 확실하게 공격 후 약물없는 매체에 복제 할 수있는 거의 가능한 세포를 검출 할 정도로 민감하다. 이 방법에서는 더 레사 주린 변환이 24 시간 내에 보지되는 최저 농도와 최소 농도 생물막 근절을 정의한다. 레사 주린 분석은 분홍색 파란색에서 염료 색상을 변환 대사 활성 세포에서 발견 산화 분자에 의존한다. 염료 변환 따라서 세포 증식의 지표이며, 형광 마이크로 플레이트 판독기를 사용하여 정량화 할 수있다. 본 논문에서는 neocuproine 및 Cu-neocuproine은 (neocuproine 구리와 복합) 바이오 필름 ​​관련 S.으로 자신의 활동에 대해 시험 하였다 아우 레 우스는도 1에 기초한 레이아웃을 적용. 프로토콜의 실행 중에 얻은 데이터는 품질 관리 역할 생물막 개시 플레이트의 OD 판독 (600)이다 (데이터는 도시하지 않음)도전 후 접시 바닥의 OD 600 독서는 (그림 2A) 완료 및 복구 플레이트 (그림 2B)의 그것의 형광 대사 레조 루핀 (resorufin)에 레사 주린 변환의 운동 기록하고있다. 또한, 상기 도전 판의 포인트 이미지는 예는 / 레사 주린 변환에는 평가 실험의 목적을 위해 충분하지 않을 경우 레사 주린 변환 (도 2C)의 육안 검사에 사용될 수있다. 대안 적으로, 운동 기록 기능이 불가능하거나 여러 경우 플레이트가 병렬로 실행되는 형광 단일 엔드 포인트 읽기 24 시간 후에 측정 할 수있다. 도 2a에 도시 된 바와 같이, 도전 판에서 OD 수치는 단독 neocuproine은 플랑크톤 세포의 성장을 억제하지 않는다는 것을 나타낸다; (10) 예상대로하지만, CU-neocuproine는 1.3 μM에서 성장을 억제한다. 유사한 패턴을 나타내는 바이오 필름 판의 레사 주린의 운동에서 관찰만 CU-neocuproine은 대사 활성 생물막 관련 세포 (그림 2B)를 제거 할 수 있습니다. 생물막 박멸 농도를 제공하는 것 이외에, 운동 분석은 생존 균수 나타내는 생물막의 대사 상태에 대한 정보를 제공한다. 처리되지 않은 컨트롤에 농도를 증가에서 겐타 마이신으로 치료 바이오 필름을 비교하면, 레사 주린 전환의 지연 (그림 3)을 볼 수 있습니다. 웰은 미처리 대조군으로 레사 주린 동일한 전환에 도달 할 때까지 2.5 μg의 / ㎖ 젠타 마이신의 경우, 13 시간의 지연이있다. 이 지연은 치료 가능성에 비해 처리 된 생물막에 존재하는 생존 세포의 수가 감소에서 온다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53925/53925fig1.jpg" /> 그림 1. 도전 플레이트 레이아웃. Exampl여섯 별개의 농도 세중 네 화합물의 병렬 테스트를 수용 도전 판의 전자 레이아웃. 치료 및 불임 컨트롤도 포함되어 있습니다. 레이아웃 설계는 멀티 채널 피펫을 사용하여 계열 희석 편리에서 플레이트 제조를 지원한다. 농도는 μM에 있습니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53925/53925fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/53925/53925fig2.jpg" /> 그림 2. 최소 생물막 박멸 농도를 결정. Neocuproine 및 Cu-neocuproine는 생물막 박멸 가능성에 대해 시험 하였다. (A)에 OD 600 생물막 해리 된 세포의 성장을 정량화하기 위해 PEG-뚜껑을 제거한 후, 도전 판으로부터 하였다. (B) 레사 주린 변환은 INDIVI에 역학적으로 모니터링 하였다24 시간에 걸쳐 이중 우물. 개인 minigraphs 시간 (24 시간) 이상 형광 (RFU)를 보여줍니다. 레사 주린 전환의 부족은 생존자의 부재를 나타낸다. 레사 주린 변환 생물막을 발산하고 복구 배지에서 성장하는 생존 세포의 존재를 나타낸다. 키네틱 판독이 다음 간단한 예 / 가능한 세포의 존재에 대한 응답 없음이 핑크, 환원 된 형태의 블루 레사 주린의 색 변환에서 시각적으로 확인할 수 있습니다 필요한 가능 여부가 아닌 경우 (C). <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53925/53925fig2large.jpg" target="_blank">여기를 클릭하십시오 이 그림의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53925/53925fig3.jpg" /> 그림 3. 운동 레사 주린 분석은 화합물이 완전히 생물막 포함 된 세포를 근절하지 않을 수 있습니다. 생물막에서 세균에 대한 억제 효과를 보여, 여전히를 줄일 수 있습니다적외선 생존. 겐타 마이신의 다양한 농도로 처리 웰 변환 레사 주린의 지연을 비교할 때 알 수있다. 레사 주린 변환 지연이 웰 생존 세포 수의 감소를 나타낸다. 블랙 (전용 미디어), 오렌지 (μg의 0 / ㎖), 녹색 (0.3 μg의 / ㎖), 청 (0.6 μg의 / ㎖), 보라색 (2.5 μg의 / ㎖) 그레이 (5 μg의 / ㎖). ΔT가 대략 절반 최대 형광 값의 치료 및 겐타 마이신 처리 된 샘플 사이의 지수 레사 주린 변환의 시간 차이를 의미한다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53925/53925fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

바이오 필름 관련 타겟팅<em&gt; 황색 포도상 구균</em&gt; 사용 레사 주린 기반 약물 감수성 분석

Most bacterial infections produce a biofilm. By virtue of their environment, biofilm associated bacteria are often phenotypically drug resistant. Novel antibacterial molecules that kill bacteria in biofilms are thus a high priority. We establish an assay to quickly screen for antimicrobial compounds that are effective at eradicating biofilms.

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

13.0K 조회수.  University of Alabama at Birmingham. Most bacterial infections produce a biofilm. By virtue of their environment, biofilm associated bacteria are often phenotypically drug resistant. Novel antibacterial molecules that kill bacteria in biofilms are thus a high priority. We establish an assay to quickly screen for antimicrobial compounds that are effective at eradicating biofilms. 

비디오: Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings. In fact, life in a biofilm probably represents the predominate mode of growth for microbes in most environments. Mature biofilms have a few distinct characteristics. Biofilm microbes are typically surrounded by an extracellular matrix that provides structure and protection to the community. Microbes growing in a biofilm also have a characteristic architecture generally comprised of macrocolonies (containing thousands of cells) surrounded by fluid-filled channels. Biofilm-grown microbes are also notorious for their resistance to a range of antimicrobial agents including clinically relevant antibiotics.
The microtiter dish assay is an important tool for the study of the early stages in biofilm formation, and has been applied primarily for the study of bacterial biofilms, although this assay has also been used to study fungal biofilm formation. Because this assay uses static, batch-growth conditions, it does not allow for the formation of the mature biofilms typically associated with flow cell systems. However, the assay has been effective at identifying many factors required for initiation of biofilm formation (i.e, flagella, pili, adhesins, enzymes involved in cyclic-di-GMP binding and metabolism) and well as genes involved in extracellular polysaccharide production. Furthermore, published work indicates that biofilms grown in microtiter dishes do develop some properties of mature biofilms, such a antibiotic tolerance and resistance to immune system effectors.
This simple microtiter dish assay allows for the formation of a biofilm on the wall and/or bottom of a microtiter dish. The high throughput nature of the assay makes it useful for genetic screens, as well as testing biofilm formation by multiple strains under various growth conditions. Variants of this assay have been used to assess early biofilm formation for a wide variety of microbes, including but not limited to, pseudomonads, Vibrio cholerae, Escherichia coli, staphylocci, enterococci, mycobacteria and fungi.
In the protocol described here, we will focus on the use of this assay to study biofilm formation by the model organism Pseudomonas aeruginosa. In this assay, the extent of biofilm formation is measured using the dye crystal violet (CV). However, a number of other colorimetric and metabolic stains have been reported for the quantification of biofilm formation using the microtiter plate assay. The ease, low cost and flexibility of the microtiter plate assay has made it a critical tool for the study of biofilms.

The assay describes a rapid means to measure early biofilm formation in bacteria and fungi. This method uses a microtiter plate as the substratum for microbial biofilm formation, and the biofilm is visualized using crystal violet strain. The assay provides either a qualitative or quantitative assay for early biofilm formation.

Microtiter 디시 Biofilm 형성 분석

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

연구

면역학 및 감염병학

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) antibody conjugated latex beads have been utilized to create a biosensor designed for discrimination of methicillin resistant (MRSA) and sensitive (MSSA) S. aureus species 1,2. The lytic phages have been converted into phage spheroids by contact with water-chloroform interface. Phage spheroid monolayers have been moved onto a biosensor surface by Langmuir-Blodgett (LB) technique 3. The created biosensors have been examined by a quartz crystal microbalance with dissipation tracking (QCM-D) to evaluate bacteria-phage interactions. Bacteria-spheroid interactions led to reduced resonance frequency and a rise in dissipation energy for both MRSA and MSSA strains. After the bacterial binding, these sensors have been further exposed to the penicillin-binding protein antibody latex beads. Sensors analyzed with MRSA responded to PBP 2a antibody beads; although sensors inspected with MSSA gave no response. This experimental distinction determines an unambiguous discrimination between methicillin resistant and sensitive S. aureus strains. Equally bound and unbound bacteriophages suppress bacterial growth on surfaces and in water suspensions. Once lytic phages are changed into spheroids, they retain their strong lytic activity and show high bacterial capture capability. The phage and phage spheroids can be utilized for testing and sterilization of antibiotic resistant microorganisms. Other applications may include use in bacteriophage therapy and antimicrobial surfaces.

Lytic phage biosensors and antibody beads are able to discriminate between methicillin resistant (MRSA) and sensitive staphylococcus bacteria. The phages were immobilized by a Langmuir-Blodgett method onto a surface of a quartz crystal microbalance sensor and worked as broad range staphylococcus probes. Antibody beads recognize MRSA.

항생제 내성 황색 포도상 구균 박테리아의 검출을위한 바이오 센서

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

생체공학

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

위반 항생제 효능을 테스트하는 인공 가래 매체의 사용<em&gt; 녹농균</em&gt; 낭성 섬유증의 폐 관련성이 높은 조건에서

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Stress-induced Antibiotic Susceptibility Testing on a Chip

We have developed a rapid microfluidic method for antibiotic susceptibility testing in a stress-based environment. Fluid is passed at high speeds over bacteria immobilized on the bottom of a microfluidic channel. In the presence of stress and antibiotic, susceptible strains of bacteria die rapidly. However, resistant bacteria survive these stressful conditions. The hypothesis behind this method is new: stress activation of biochemical pathways, which are targets of antibiotics, can accelerate antibiotic susceptibility testing. As compared to standard antibiotic susceptibility testing methods, the rate-limiting step -&#160;bacterial growth -&#160;is omitted during antibiotic application. The technical implementation of the method is in a combination of standard techniques and innovative approaches. The standard parts of the method include bacterial culture protocols, defining microfluidic channels in polydimethylsiloxane&#160;(PDMS), cell viability monitoring with fluorescence, and batch image processing for bacteria counting. Innovative parts of the method are in the use of culture media flow for mechanical stress application, use of enzymes to damage but not kill the bacteria, and use of microarray substrates for bacterial attachment. The developed platform can be used in antibiotic and nonantibiotic related drug development and testing. As compared to the standard bacterial suspension experiments, the effect of the drug can be turned on and off repeatedly over controlled time periods. Repetitive observation of the same bacterial population is possible over the course of the same experiment.

We have developed a microfluidic platform for rapid antibiotic susceptibility testing. Fluid is passed at high speeds over bacteria immobilized on the bottom of a microfluidic channel. In the presence of stress and antibiotic, susceptible strains of bacteria die rapidly. However, resistant bacteria can survive these stressful conditions.

칩에 스트레스 유발 항생제 감수성 테스트

We have developed a rapid microfluidic method for antibiotic susceptibility testing in a stress-based environment. Fluid is passed at high speeds over ...

A Platform of Anti-biofilm Assays Suited to the Exploration of Natural Compound Libraries

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of antibiotic-tolerant infections. Biofilms have displayed an exceptionally high tolerance for chemotherapy, which is thought to be multifactorial. For instance, the matrix provides a physical barrier that decreases the penetration of antibiotics into the biofilm. Also, cells within the biofilms are phenotypically diverse. Likely, biofilm resilience arises from a combination of these and other, yet unknown, mechanisms. All of the currently existing antibiotics have been developed against single-cells (planktonic) bacteria. Therefore, so far, a very limited repertoire of molecules exists that can selectively act on mature biofilms. This situation has driven a progressive paradigm shift in drug discovery, in which searching for anti-biofilms has been urged to occupy a more prominent place. An additional challenge is that there are a very limited number of standardized methods for biofilm research, especially those that can be used for large-throughput screening of chemical libraries. Here, an experimental anti-biofilm platform for chemical screening is presented. It uses three assays to measure biofilm viability (with resazurin staining), total biomass (with crystal violet staining), and biofilm matrix (using a wheat germ agglutinin, WGA-fluorescence-based staining of the poly-N-acetyl-glucosamine, PNAG, fraction). All the assays were developed using Staphylococcus aureus as the model bacteria. Examples of how the platform can be used for primary screening as well as for functional characterization of identified anti-biofilm hits are presented. This experimental sequence further allows for the classification of the hits based upon the measured end-points. It also provides information on their mode of action, especially on long-term versus short-term chemotherapeutic effects. Thus, it is very advantageous for the quick identification of high-quality hit compounds that can serve as starting points for various biomedical applications.

Biofilm infections show high tolerance towards chemotherapy. No single assay captures the complexity of biofilms. Instead, complementary assays are needed. We present a screening platform (developed for S. aureus) that combines assays for viability, biomass, and biofilm matrix. It allows anti-biofilm drug discovery, including the assessment of long-term chemotherapeutic effects.

천연 화합물 라이브러리의 탐험에 적합 안티 바이오 필름 분석 실험의 플랫폼

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread of multi drug-resistant TB (MDR-TB), there is a real urgency to develop new therapeutic strategies against M. tuberculosis infections. Traditionally, compounds are evaluated based on their antibacterial activity under in vitro growth conditions in broth; however, results are often misleading for intracellular pathogens like M. tuberculosis since in-broth phenotypic screening conditions are significantly different from the actual disease conditions within the human body. Screening for inhibitors that work inside macrophages has been traditionally difficult due to the complexity, variability in infection, and slow replication rate of M. tuberculosis. In this study, we report a new approach to rapidly assess the effectiveness of compounds on the viability of M. tuberculosis in a macrophage infection model. Using a combination of a cytotoxicity assay and an in-broth M. tuberculosis viability assay, we were able to create a screening system that generates a comprehensive analysis of compounds of interest. This system is capable of producing quantitative data at a low cost that is within reach of most labs and yet is highly scalable to fit large industrial settings.

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

We have developed a modular high-throughput screening system for discovering novel compounds against Mycobacterium tuberculosis, targeting intracellular and in-broth growing bacteria as well as cytotoxicity against the mammalian host cell.

세포 내 타겟팅 억제제의 효능 및 세포 독성 검사를위한 시스템<em&gt; 결핵균</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus Biofilms

Neutrophils are the first line of defense deployed by the immune system during microbial infection. In vivo, neutrophils are recruited to the site of infection where they use processes such as phagocytosis, production of reactive oxygen and nitrogen species (ROS, RNS, respectively), NETosis (neutrophil extracellular trap), and degranulation to kill microbes and resolve the infection. Interactions between neutrophils and planktonic microbes have been extensively studied. There have been emerging interests in studying infections caused by biofilms in recent years. Biofilms exhibit properties, including tolerance to killing by neutrophils, distinct from their planktonic-grown counterparts. With the successful establishment of both in vitro and in vivo biofilm models, interactions between these microbial communities with different immune cells can now be investigated. Here, techniques that use a combination of traditional biofilm models and well-established neutrophil activity assays are tailored specifically to study neutrophil and biofilm interactions. Wide-field fluorescence microscopy is used to monitor the localization of neutrophils in biofilms. These biofilms are grown in static conditions, followed by the addition of neutrophils derived from human peripheral blood. The samples are stained with appropriate dyes prior to visualization under the microscope. Additionally, the production of ROS, which is one of the many neutrophil responses against pathogens, is quantified in the presence of a biofilm. The addition of immune cells to this established system will expand the understanding of host-pathogen interactions while ensuring the use of standardized and optimized conditions to measure these processes accurately.

Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus Biofilms

The present protocol describes the study of neutrophil-biofilm interactions. Staphylococcus aureus biofilms are established in vitro and incubated with peripheral blood-derived human neutrophils. The oxidative burst response from neutrophils is quantified, and the neutrophil localization within the biofilm is determined by microscopy.

인간 호중구와 황색포도상구균 생물막 사이의 상호작용을 시각화하고 정량화하기 위한 표준화된 체외 분석

Neutrophils are the first line of defense deployed by the immune system during microbial infection. In vivo, neutrophils are recruited to the site of ...

A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms

Candida species are the fourth-most common cause of systemic nosocomial infections. Systemic or invasive candidiasis frequently involves biofilm formation on implanted devices or catheters, which is associated with increased virulence and mortality. Biofilms produced by different Candida species exhibit enhanced resistance against various antifungal drugs. Therefore, there is a need to develop effective immunotherapies or adjunctive treatments against Candida biofilms. While the role of cellular immunity is well established in anti-Candida protection, the role of humoral immunity has been studied less.
It has been hypothesized that inhibition of biofilm formation and maturation is one of the major functions of protective antibodies, and Candida albicans germ tube antibodies (CAGTA) have been shown to suppress in vitro growth and biofilm formation of C. albicans earlier. This paper outlines a detailed protocol for evaluating the role of antibodies on biofilms formed by C. tropicalis. The methodology for this protocol involves C. tropicalis biofilm formation in 96-well microtiter plates, which were then incubated in the presence or absence of antigen-specific antibodies, followed by a 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-carboxanilide-2H-tetrazolium (XTT) assay for measuring the metabolic activity of fungal cells in the biofilm.
The specificity was confirmed by using appropriate serum controls, including Sap2-specific antibody-depleted serum. The results demonstrate that antibodies present in the serum of immunized animals can inhibit Candida biofilm maturation in vitro. In summary, this paper provides important insights regarding the potential of antibodies in developing novel immunotherapies and synergistic or adjunctive treatments against biofilms during invasive candidiasis. This in vitro protocol can be used to check the effect of potential new antifungal compounds on the metabolic activity of Candida species cells in biofilms.

A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms

A 96-well microtiter plate-based protocol using a 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-carboxanilide-2H-tetrazolium (XTT) reduction assay is described herein, to study antibodies' effects on biofilms formed by C. tropicalis. This in vitro protocol can be used to check the effect of potential new antifungal compounds on the metabolic activity of Candida species cells in biofilms.

칸디다 트로피칼리스 생물막에 대한 항체의 효과를 평가하기 위한 가용성 테트라졸륨 기반 환원 분석

Candida species are the fourth-most common cause of systemic nosocomial infections. Systemic or invasive candidiasis frequently involves biofilm formation ...

Improved Enzyme Protection Assay to Study Staphylococcus aureus Internalization and Intracellular Efficacy of Antimicrobial Compounds

Staphylococcus aureus expresses virulence factors to trigger its internalization into eukaryote cells and to survive inside different subcellular compartments. This paper describes an enzyme protection assay to study the extent of S. aureus internalization and its intracellular survival in adherent non-professional phagocytic cells (NPPCs) as well as the intracellular efficacy of antimicrobial compounds. NPPCs are grown in a multi-well plate until they reach 100% confluence. S. aureus cultures are grown overnight in cell culture medium. The bacterial suspension is diluted according to the number of cells per well to inoculate the cells at a controlled multiplicity of infection. Inoculated cells are incubated for 2 h to allow the bacteria to be internalized by the NPPCs, following which lysostaphin is added to the culture medium to selectively kill extracellular bacteria. Lysostaphin is present in the culture medium for the rest of the experiment. 
At this point, the infected cells could be incubated with antimicrobial compounds to assess their intracellular activities against S. aureus. Next, the cells are washed three times to remove the drugs, and intracellular S. aureus load is then quantified by culturing on agar plates. Alternatively, for studying staphylococcal virulence factors involved in intracellular survival and cell toxicity, lysostaphin could be inactivated with proteinase K to eliminate the need for washing steps. This tip improves the reliability of the intracellular bacterial load quantification, especially if cells tend to detach from the culture plate when they become heavily infected because of the multiplication of intracellular S. aureus. These protocols can be used with virtually all types of adherent NPPCs and with 3D cell culture models such as organoids.

Improved Enzyme Protection Assay to Study Staphylococcus aureus Internalization and Intracellular Efficacy of Antimicrobial Compounds

This protocol aims to describe how to study the extent of Staphylococcus aureus internalization and its ability to survive inside the human host cell, as well as the intracellular efficacy of antimicrobial compounds.

황 색포도상구균 내산화 및 항균 화합물의 세포 내성 효능을 연구하는 향상된 효소 보호 분석

Staphylococcus aureus expresses virulence factors to trigger its internalization into eukaryote cells and to survive inside different subcellular ...

생물학

In Vitro Biofilm Synthesis by Staphylococcus aureus

Source: Rana, P. S. et al., <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/63773">Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus Biofilms.</a> J. Vis. Exp. (2022)
In this video, we demonstrate the preparation of in vitro biofilm by S. aureus in a poly-L-Lysine-coated multi-well plate. The biofilm-formed plate can be used for downstream experiments.

황색포도상구균(Staphylococcus aureus)에 의한 체외 생물막 합성(In vitro Biofilm Synthesis)

Source: Rana, P. S. et al., Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus ...

바이오 필름 관련 타겟팅

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