우리는 단어 &quot;아나스타시스&quot;세포 사멸의 반전을 설명하는 제안에 대해 목사 랄프 Bohlmann와 목사 제임스 Voelz 감사합니다; 안정적으로 시토크롬 C -GFP을 표현 헬라 세포에 대한 더글라스 R. 녹색; H446 세포 찰스 M. 루딘 에릭 E. 가드너; 비디오에서 만화 그리기에 도움을 헤더 어린 양; 이 원고의 가치있는 토론을위한 유 후이 여진. 이 작품은 선생님 에드워드 Youde 기념 원정대 (HLT), 박사 월터 제토 기념 장학금 (HLT), 풀 브라이트 부여 007-2009 (HLT), 생명 과학 연구 재단의 교제 (HLT)에 의해 지원되었다, NIH는 NS037402 (JMH) 부여 및 NS083373 (JMH), 그리고 홍콩의 대학 보조금위원회 광역 / B-07 / 99 (MCF). 호 램 당나라는 생명 과학 연구 재단의 Shurl와 케이 쿠 르치 재단 연구원이다.

The authors have nothing to disclose.

아나스타시스는 세포 사멸 경로를 활성화 한 세포가 계속해서 죽어가는 과정을 역 생존 현상을 의미한다. 여기서는 생균 촬상 사실 동일인 셀 늦은 단계에서 아폽토시스 세포 사멸의 과정을 역으로 한 후 생존 및 재생을 계속할 수 있음을 확인하기 위해 사용될 수 있다는 것을 증명하고있다. 우리 프로토콜은 아폽토시스를 유도 및 확인을위한 여러 가지 바이오 마커와 세포 사멸의 모니터링 반전 겪는 세포의 큰 비율을 허용하도록 최적화 여러 세포 유형 특정 처리 조건을 설명한다. 기술적 인 문제에 관해서는, 유리 바닥 요리 때문에 높은 배율에서 높은 품질의 촛점 또는 에피 형광 현미경을위한 긴 작동 거리를 수있는 세포와 현미경 목적의 투명성이 높은 얇은 유리,의, 영상 (12, 13)에 대한 배양 세포를 사용 하였다, 미토콘드리아의 분열을 포함하여 고전적인 세포 사멸의 관찰을 용이하게사이토 크롬 c 및 핵 응축과 분열의 릴리스. 유리는 또한 아폽토시스 동안 막에 blebbing, 세포의 세포 수축 및 세포 자멸 체 형성의 모니터링을위한 고품질 DIC 현미경을 허용하도록, 광의 극성을 왜곡하지 않는다. DIC는 셀 모폴로지의 검출 개선, 흠 및 투명 세포 샘플의 콘트라스트를 향상으로 DIC 현미경, 아폽토시스의 형태 학적 특징이 관찰을 위상차 현미경에 비해 많은 장점을 갖는다. DIC 및 위상차 현미경을 사용할 수 없으면, CellTracker 공 초점 또는 에피 형광 현미경 생균의 윤곽 형태 및 세포 형태를 모니터링하는 세포질 염색을 위해 사용될 수있다. 죽음의 자극의 적절한 용량의 응용 프로그램과 자극의 제거의 전략은 아나스타시스의 검출을위한 중요한 단계이다. 우리는 실험 대하여 descr에 대한 죽음의 자극으로 에탄올의 낮은 농도를 사용하기로 선택한여기 ibed 처리 된 세포의 많은 퍼센트 균일 아폽토시스를 겪을 수 있고 잠재적으로이 온화한로부터 복구 할 수 있기 때문에, 데스 자극. 우리는 12, 13 신고되었습니다 그럼에도 불구하고, 이러한 접근 방식은 또한, 다른 죽음의 자극에 성공적으로 적용 할 수 있습니다. 그러나 일부 죽음의 자극은 스타 우로 스포린 (STS), 일반적으로 사용되는 세포 사멸 유도제 등 다른 사람보다 본질적으로 더 많은 도전이다. 이 선호도가 높은 46 ~ 48과의 기판을 결합 아마도 때문에, 반복 세척이 필수적이지만 여전히 효율적으로 세포에서 STS를 제거 할 수 없습니다. 이 경우, 여전히 세포 사멸 죽어가는 과정을 활성화 할 수 있습니다 낮은 약물 농도와 짧은 약물 배양 시간을 사용하여 더 많은 세포가 사멸을 취소 할 수 있도록 허용하는 것이 도움이 될 수 있습니다. 재 급지 또한 신선한 세포 배양 배지보다 아폽토시스의 반전을 향상시킬 수있는 컨디셔닝 된 세포 배양 배지와 세포. 사멸 세포는 일반적으로 느슨하게 특히 유리 SUR에 배양 접시 표면에 부착된다얼굴, 따라서 그것은 세포를 분리하지 않도록 부드럽게 세포 사멸 유도 물질을 씻어하는 것이 중요합니다. 구체적으로 세포에 노출 한 후, 세포 배양 접시의 유리 표면에 적절하게 부착하기 위해, 예컨대 심근 (37)과 같은 특정 유형의 세포를 허용하는 세포 접착 성을 높일 수있는 폴리 -D- 라이신, 콜라겐 및 / 또는 피브로넥틴 유리 접시를 도포 죽음의 자극. 세포 사멸의 과정, 세포 사멸의 가능성이 반전은 온도에 의해 영향을받을 수 효소 활동에 따라 달라집니다. 따라서, 37 ° C에서 또는 정상 배양 조건에서 세포를 유지하는 것은 실험 결과의 재현성을 보장하기 위해 라이브 영상 과정에서 중요하다. 생균 촬상을 시작하기 전에 미리 따뜻한 현미경은 현미경 성분이 열 평형에 도달 할 수 있도록하는 중요한 단계이다. 이는의 열 팽창 및 수축에 포커스 및 XY 평면의 시프트의 편차를 방지 할 수 있습니다라이브 세포 이미징 동안 구성 요소. 적용 또는 인해 온도 또​​는 매체의 볼륨의 변화에​​ 여전히 초점 드리프트를 일으킬 수 시간 경과 영상 중 하나 피펫 또는 미리 예열 현미경 시스템에서 관류하여 매체를 배양 접시를 변경하여 죽음의 자극을 제거하는 단계를 포함한다. Z 스택 인수 정확한 초점면에서 화상 세포 것을 도울 수 있지만, 레이저에 의한 형광 세포의 추가적인 노출 광독성의 위험을 증가시킬 것이다. 대안 적으로, 적외선 레이저 기반 자동 초점 보정 시스템 포커스가 드리프트 보정 시스템의 사용은, 추가없이 세포 / 유리과 대물 간의 거리를 유지하면서 시간 경과 생균 촬상 동안 동일한 초점 평면에서 세포를 유지할 수 단파장 광독성에 형광 세포의 노출. 미토콘드리아 사이토 크롬 C와 같은 apoptogenic 단백질의 방출 및 다운 스트림 / 효과 등의 이펙터 카스파의 활성화또는 caspase-3와 caspase-7은 일반적으로 세포 사멸 세포 사멸 과정 2,5,6에서 &quot;니나&quot;로 간주되고있다. 웨스턴 블롯은 카스파 제 -3의 절단 (활성화) 및 세포 사멸 유도시 전체 세포 집단에서 폴리 (ADP) -ribose 폴리머 -1- (PARP) 및 DFF45 / ICAD 같은 자멸사의 제거 후의 기판을 검출하기 위해 사용되어왔다 자극하고, 쪼개진가 카스파 제 -3, ICAD 및 PARP 죽음의 자극에 노출시 세포에서 나타났다 밝혀,하지만 신선한 배양액 (13)와 세포가 된 후 다시 피드를 사라졌다. 그러나 이러한 방법은 세포 인구의 일반 조건을 공개하지만, 궁극적으로 생존 후 세포 사멸 리버스 것이다 것과 죽을 개별 세포를 구분하지 않습니다. 미토콘드리아 시토크롬 C의 자료를 분석하는 생물 분류 비슷한주의 사항이 있습니다. 따라서, 사이토 크롬 C의 방출 및 카스파 AC 후 개별 세포의 운명을 추적tivation, 세포 사멸 2,5,6의 가장 잘 알려진 특징 중 두, 라이브 세포와 결합 NES-DEVD-YFP-NLS 여기에 사용 된 것과 같은 GFP - 태그 시토크롬 C (사이토 C -GFP)와 카스파 바이오 센서, 형태학 현미경 직접 복구와 같은 세포에서 사이토 C -GFP 바이오 센서의 전위를 관찰함으로써 이러한 문제를 회피. 이러한 결과는 미토콘드리아 시토크롬 C 릴리스 및 카스파 제 활성화 후 세포 사멸의 가역성을 나타냅니다. 아나스타시스 연구를위한 현재의 과제는 생체 내 또는 시험관 내에서 그들의 수명 전반에 걸쳐 어느 지점에서 아나스타시스를받은 세포를 검출하기 위해 표지 기술의 부족이다. 카스파 바이오 센서 NES-DEVD-YFP-NLS의 안정적 발현은 카스파가 나중에 다시 활성화되는 경우 또한 카스파 제 활성의 검출을 허용하지만 활성 바이오 센서 susta 않고 떨어질 수 영구적으로 카스파 제 활성을 기록하지 않는다이네 카스파 활동 (13). 이러한 FRET 기반 SCAT 바이오 센서와 같은 다른 이전에보고 된 카스파 바이오 센서 (예 ECFP- [DEVD] -Venus) 26,49뿐만 아니라 형광 기자 Apoliner (CD8-RFP- [DQVD] -GFP) 50 CPV (예 : CD8 - [DEVD] -Venus) (51,52), 및 전체 동물에서 배양 된 세포에서 카스파 제 활성을 검출하기 위해 사용되지만, 유사한 제한을 가질 수있다. 마찬가지로, 사이토 C -GFP 그것이 아폽토시스 동안 세포질로 미토콘드리아로부터 방출되고이어서 열화 같이, 장기적으로 아폽토시스를 반전 세포를 추적 할 수 없다. 아 넥신 V 라벨링은 아폽토시스 세포를 역 추적하는 데 사용하지만, 신호 강도는 시간에 따라 감소되므로 아나스타시스 13,45 장기간 추적하는 데 유용하지 않다되었다. 생체 내 이미징 지속적인 장기 죽음 자극의 노출 후 동일한 세포의 운명을 추적하는 데 사용될 수있다. 그러나 생체 내 이미징의 장기는 여전히 t에 도전한다오 가장 살아있는 동물에서 수행합니다. 따라서 추가적인 접근법이 전체 동물 연구에, 촉진 또는 조직 배양 세포를 사용을 억제 할 수 아나스타시스 약물 스크리닝 아나스타시스 연구를 확장 할 필요 미래에, 장기 세포의 운명을 추적 새로운 프로토콜 및 기술은 개발 아나스타시스의 생리 병리학 및 치료 영향을 테스트하기 위해 필요하다. 우리는 아나스타시스는 성숙한 신경 세포와 심장 세포 (13)로 교체하기 어려운 손상 세포를 구출하기 위해 일반적으로 세포 생존 메커니즘이 될 수 있다고 제안했다. 그러나, 화학 요법 치료 후 세포 사멸 암 세포의 아나스타시스 내성 종양 12, 13의 재발로 이어지는 위험한 세포의 회복이 발생할 수 있습니다. 그들은 세포 사멸 (13)을 반전 한 후 일부 세포가 종양 변환을 표시로 아나스타시스 또한, 종양 발생의 중요한 메커니즘이 될 수 있습니다. 따라서, 아나스타시스을 강화하는 새로운 THERA 수암을 예방 또는 치료하기위한 새로운 방법으로 아나스타시스을 억제하면서, 신경 퇴행 및 심부전의 억제 효과를 나타내는 전략. 바이오 센서를 개발하는 것은 아나스타시스를 변조함으로써 난치성 질환 세포 생존 아나스타시스 메커니즘, 잠재적 치료제의 이해를 사전 것이다 질병 모델 시스템에서 세포 사멸의 반전을 추적.

세포 사멸 ( &quot;죽음에 떨어지는&quot;에 대한 그리스어)는 일반적으로 세포 자살 1-7로 끝나는 단방향 프로세스로 간주됩니다. 이미 세포 사멸 경로의 8,9을 시작했다 세포를 포함, 그렇지 않으면 전체 동물에 죽을 것 여분의 세포의 생존에 프로 죽음 유전자 결과의 유전 중단. 마찬가지로, 유전자 조작 인위적으로 표시 신호를 &quot;날 먹고&quot;또는 자신의 세포 외 기질 접착 성을 잃게 건강한 포유 동물 세포는 모든 세포의 식균 작용 또는 entosis 각각 10, 11에 의해 죽음을 탈출 할 수 있습니다. 그러나, 우리와 다른 사람들은 또한 세포 사멸 12-15의 초기 단계에서 복구 할 수 있습니다 유전자 조작 정상적인 건강한 포유 동물 세포 및 세포 선없이 것을 보여 주었다. 세포는 전형적인 중요 체크 포인트를 통과 한 후 각각의 세포를 추적 할 수있는 도구를 사용하여, 우리는 또한, 세포 사멸 (12, 13)의 후반 단계에서 복구를 증명하고있다해동 2-6 &quot;니나&quot;를 표시합니다. 최종 단계의 세포 사멸이 체크 포인트는 미토콘드리아 시토크롬 C의 릴리스, 카스파의 활성화, 핵 분열 및 세포 사멸 기관의 형성을 포함한다. 우리는 세포 사멸 2-6의 위기에서 세포 사멸이 반전을 설명하기 위해, &quot;생활에 상승&quot;을 의미 그리스어 합성어 &quot;아나스타시스&quot;을 채택했다. 전체 죽어 복구 프로세스가 라이브 세포 이미징에 의해 관찰되지 않는 한,이 세포 사멸 이벤트를 경험하지 못한 세포에서 아나스타시스를받은 세포를 구별하기 위해 도전하고있다. 작품의 수십 년 세포 사멸에 의한 세포 자살의 형태 적 특징은 진화 적으로 보존 된 생화학 및 분자 이벤트 16-19에 의해 구동되는 것을 밝혀졌다. 이러한 이벤트는 손상 또는 d 제거하여 단세포와 다세포 생물의 발달과 homoeostatic 과정을 조절하는 세포의 자기 파괴를 촉진angerous 세포 16-19. 사멸 세포에 쉽게 사멸 1,5,6,16,20의 표준화, 형태 학적, 생화학 및 분자 발현에 의해 구별 될 수 있지만, 현재 아나스타시스 12, 13에 해당 알려진 마커가 없습니다. 중요한 것은, 아나스타시스를받은 세포는 정상적인 건강한 세포, 단지 세포 사멸을 반대로 시작 세포 표시와 같은 세포 사멸 죽어가는 세포 (12, 13)로 나타납니다. 따라서, 새로운 도구는 주어진 생존 세포가 이전의 활성 세포 사멸 과정을 경험했다 확실하게 결론을 내릴 필요가있다. 이 신속하고 대규모 파괴 과정이기 때문에 세포 사멸은 일반적으로 돌이킬 수없는 계단식으로 가정한다. 미토콘드리아는 세포질 (21, 22)에 시토크롬 C와 같은 apoptogenic 요인을 발표 한 후에는 일부 세포가 세포 사멸을 시작하는 것이 일 분 정도 걸릴 수 있지만, 카스파는 5 분 23, 24 내에서 활성화 세포질 다음에 할 수 있고,핵 10 분 25 ~ 27 내에서 응결 및 세포 사멸 잠시 후 25-27. 활성화 된 카스파은 절단과 같은 엔도 뉴 클레아 제 억제제 DFF45 / ICAD 29,30로서 셀룰러 철거 2,28의 주요 목적 구조적 및 기능적 구성 요소를 비활성화하여 아폽토시스를 조율. 카스파는 또한 31, 32 크롬 c의 미토콘드리아 방출을 촉진하는 미토콘드리아에 옭 BCL-2 가족의 BID, 같은 프로 세포 사멸 인자를 활성화합니다. 카스파 활동은 또한 탐식 33 대 식세포 또는 인접 세포에 의한 세포 죽음의 말림을 촉진하기위한 &quot;날 먹고&quot;신호로 포스파티딜 세린의 세포 표면에 노출되는 결과를 초래한다. 또한, 세포 사멸 이벤트는 세포 생체 에너지 대사의 34,35,36를 방해하는 역기능 미토콘드리아는, 렌더링합니다. 따라서, 이러한 파괴를 복구 직관적 아닌 것 같습니다. 원래는 달리 기대관리 포인트, 세포도 늦은 단계에서 사멸 세포 사멸 과정을 취소 할 수 있습니다. 지속적으로 배양 세포를 죽음의 운명을 모니터링함으로써, 우리는 일차 전지 및 세포주 12, 13의 범위에서 후기의 세포 사멸의 가역성을 관찰했다. 죽음의 자극의 제거는, 이러한 미토콘드리아의 분열, 염색질 응축, DNA 손상, 세포막에 blebbing, 포스파티딜 세린의 세포 표면에 노출, 미토콘드리아 시토크롬 C의 릴리스, 카스파 제 활성화, 핵 분열, 세포의 수축으로 세포 사멸의 명백한 기능에서 복구를 허용 세포 사멸 몸과 형성. 이러한 관찰은 아나스타시스의 기능, 결과, 및 메커니즘에 관한 대답없는 질문을 올립니다. 이러한 질문을 해결하기 위해, 전제 조건은 안정적 아나스타시스를받은 세포를 식별하는 것입니다. 여기서는 라이브 현미경 방법 및 이전 말기 아폽토시스 번째 반전 한 세포를 검출하기위한 바이오 센서를 카스파 서술욕실은 살아 남았다.

<table><tbody><tr><td>LSM780 confocal microscopy</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glass bottom culture dish</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-0-14-C</td><td></td></tr><tr><td>Transparent CultFoi</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-1116-084</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; independent medium</td><td>Life Technologies</td><td>18045-088</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker</td><td>Life Technologies</td><td>C34552</td><td></td></tr><tr><td>Mitotracker Red CMXRos</td><td>Life Technologies</td><td>M-7512</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Life Technologies</td><td>H1399</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescently labeled annexin V</td><td>Biovision</td><td>K201</td><td></td></tr></tbody></table>

strategies for tracking anastasis, a cell survival phenomenon that reverses apoptosis

아나스타시스 ( &quot;생활에 상승&quot;에 대한 그리스어) 죽어가는 세포의 회복을 의미한다. 이들 세포의 회복 전에, 미토콘드리아 단편화, 세포질 내로 미토콘드리아 사이토 크롬 C의 방출, 카스파 제 활성화, 크로 마틴 응축, DNA 손상, 핵 분열, 세포막에 blebbing, 세포 수축, 세포 표면 노출을 포함한 세포 사멸 중요한 체크 포인트를 통과 한 포스파티딜 세린, 및 세포 사멸 기관의 형성. 세포 사멸 자극함으로써 죽어가는 세포가 사멸하고 잠재적으로 다른 죽음의 메커니즘을 취소 할 수 있도록, 죽음 이전에 제거 될 때 아나스타시스가 발생할 수 있습니다. 따라서, 아나스타시스는 부적절하게 손상된 세포를 유지할 수있는 생리적 치유 과정을 포함 나타납니다. 기능 및 메커니즘 아나스타시스 명백하게 건강한 세포의 복구 후에 과거 사건을 검출하기위한 제한된 도구에 의해 부분적으로 방해, 여전히 불분명하다. 전략 anasta를 검출SIS는 아나스타시스를 변조 생리 메커니즘 연구, 질병 병리 언데드 세포의 유해성과 잠재적 인 치료제를 가능하게 할 것이다. 여기서 우리는 살아있는 세포 현미경 및 포유 동물 세포에 아나스타시스를 식별하고 추적하기위한 포유 동물 카스파 바이오 센서를 사용하여 효과적인 전략을 설명합니다.

세포 사멸의 반전을 연구하기 위해, 조직 배양 세포를 처음으로 세포 사멸을 유발하는 죽음의 자극에 노출되어있다. 세포가 세포 사멸의 특징을 표시 할 때, 신선한 배양액 후 자극을 씻어 후 복구 (그림 1A)를 허용하도록 죽어가는 세포를 배양 적용됩니다. 여기서 다루고있는 핵심 문제는 개별 죽어 배양 된 세포가 세포 사멸을 향해 진행 여전히 아나스타시스을받을 수있는 방법까지입니다. 이 질문은 명확하게 설명 된 방법을 이용하여 세포의 운명을 추적 할 수있는 바이오 마커 연속 모니터링함으로써 응답 할 수있다. 우리는 먼저 동안 추적에 필요한 시간 경과 생균 현미경을 사용 전에 개별 세포의 반응을 기록함으로써, 조직 배양 세포에서 아폽토시스의 역전을 검출하도록 우리의 전략을 설명하고 아폽토시스 자극 (12, 13)에 노출 된 후. 여기에 장착 된 기판에 확산 건강 부착 세포 (그림 1Bi) 12, 13, 그리고 사상 미토콘드리아 및 치료 이전에 둥근 핵을 표시 (그림 1Ci, 디, 에이, 인터넷, 승기) 12, 13. 세포 배양 배지 (용적 / 용적)의 3.8-4.5 % 에탄올을 노출시킨 후, DIC 또는 위상차 현미경 세포 세포질 축합, 세포막에 blebbing 및 셀 수축 (도 1Bii, 1Cii- 포함 아폽토시스의 형태 학적 특징을 나타내 밝혀 3, 1Eii-VI) (12, 13). 같은 세포 사멸에 의한 체 형성이 용이 DIC으로 관찰하면 (도 1Eii-VI). MitoTracker 표지 미토콘드리아의 분열은 12, 13뿐만 아니라 훽스트 염색 핵 DNA의 응축 (그림 1Dii-III, FII-III, GII) 12, 13, 및 핵의 분열 (1Dii-III, 1Fii-VI 피규어) (그림을 마련해 1Evi 및 FVI, 흰색 화살표)을, 공 촛점 또는 에피 형광 현미경으로 동시에 검출되었다. 성공적으로 세포 사멸을 반전 세포는 이후 분명히 자신의 피해 복구, 정상적인 형태를 회복하기 위해 관찰되었다 (그림 1Biii, C 및 사업부-VI, E 및 FVII-XII 및 GIII) 12, 13. 이러한 조건에서 세포는 형광 발광 양자 점과 세포 분열 (13)의 섭취에 따라 세포 기관의 운동성, 세포 이동 및 기능 엔도 시토 시스를 회복하기 위해 표시했다. 흥미롭게도, 존경 세포 사멸이 불규칙한 핵 형태 (그림 1Fxii), 또한 비정상적인 세포 분열 소핵 형성을 표시 일부 세포는 13 분할 세포에서 DNA 손상, 염색체 파손 및 전체 염색체 손실의 바이오 마커 인 (1Giv-VII 피규어) 39, 40. 난민 Chromosomes 또는 염색체 단편 외부 핵막 (39) (40)에 의해 둘러싸 딸 세포 핵에 포함하지 못한다. 따라서, 아나스타시스의 결과는 종양과 암의 진행을 선도, 중단 된 세포 사멸하는 동안 손상되​​었다 게놈의 은닉 될 수 있습니다. 소핵의 존재는 또한 암세포 40, 41에서 일반적이다. 미토콘드리아 시토크롬 C의 릴리스는 중재 또는 카스파 제에 의존하는 세포 사멸 20-22를 증폭 할 수있는 중요한 단계입니다. 안정적 GFP 표지 된 시토크롬 C를 발현 HeLa 세포를 사용하여, 우리는 공 초점 현미경으로 세포 사멸과 아나스타시스 중 시토크롬 C의 세포 내 재배치를 모니터링. 죽음의 자극이 2Aii (그림을 적용했다 후보고 23, 24, 그런 다음 (그림 2AI 및 B) 치료 전에 미토콘드리아로 지역화하지만, 사이토 크롬 C -GFP는 세포질에 출시 된2Aiii 및 B). 이러한 미토콘드리아 분열과 세포막과 같은 다른 특성에 blebbing 모폴로지가 또한 사이토 크롬 C -GFP (도 2Aiii)를 발표 한 세포에서 관찰되었다. 이 세포는 사이토 크롬 C 23 ~ 27의 출시 직후 세포 죽음을 받아야보고되었다. 그러나, 데스 자극을 제거한 후, 우리는 세포질 시토크롬 C의 -GFP 레벨 미토콘드리아 필라멘트 구조를 회복하고, 세포막은 정상적인 모양을 회복 거절 관찰 (도 2Aiv-VII, 및 B). 따라서, 사멸 세포는 사이토 크롬 C의 미토콘드리아 출시 후 아나스타시스를받을 수 있습니다. 다운 스트림 DEVD-절단 카스파의 증폭은 일반적으로 세포 사멸 2,5에서 &quot;니나&quot;로 간주됩니다. 따라서, 우리는 카스파 바이오 센서 NES-DEVD-YFP-NLS의 EXPR을 사용가능 이전 카스파 제 활성 (도 3A)을 경험 한 살아남은 세포를 검출 할 수있게, (13)로부터 ESSID와 플라스미드. 이것은 카스파 바이오 센서는 N 말단 핵 제외 신호 (NES)를 가진 링커 카스파 제 -3 옐로우 형광 단백질 (YFP) 뒤에 / 7 컨센서스 절단 부위 (DEVD) 26,42,43과 함께 폴리펩티드 C 말단 핵 지역화 신​​호 (NLS). 건강한 세포,이 바이오 센서는 주로 NES의 함수로서 세포질에 편재도 13 (3Bi, CI-Ⅳ, 및 D를 도시한다). 세포 사멸하는 동안 활성화 된 카스파 효율적 동시에, 또는 이후에, 같은 DNA / 염색질 응축 및 세포 수축 (그림 3B II와 같은 세포 사멸의 다른 기능을 표시 세포에서 핵 세포질에서 옭 YFP-NLS를 해제 DEVD 모티브를 절단 -IV, 및 D) 13. 따라서,자체 세포는 카스파 제 활성화 다음 핵 가져 오기 기능을 유지합니다. 고사 유발 인자를 제거한 후, 카스파 제 활성화는 (발생한 후에도 아나스타시스 표시 형태 학적 회복을 겪는 세포 3Bv-X 피규어 및 D) (13)는 외관상 후기 아폽토시스 반전. 그들은 죽음의 자극 (그림 3Bv-X, 셀 1) (13)의 제거 후 세포 사멸을 반대로 시작하면 정상적인 형태의 복구하는 동안, 핵 YFP 신호는 세포가 가능하여, 카스파 절단 바이오 센서를 저하시킬 것을 제안, 일부 세포에서 강도 감소 사용되는 것과 동일한 메커니즘은시와 아나스타시스 후 다른 카스파 절단 된 제품을 제거합니다. 아나스타시스 또한 생균 현미경없이 검출 할 수있다. 이 결합하고, 마크 아폽토시스에 이른 단계 (AT 포스파티딜 세린 (PS)을 구체화하는 형광 표지 넥신 V 38,44을 이용함으로써 달성 될 수있다 <stroNG&gt; 그림 4A). 예상대로 포스파티딜 건강한 세포 (38)의 세포막의 내부 전단에 한정되는 바와 같이 예를 들면, 건강 및 미처리 된 쥐의 신생아 심장 차 심실 근세포를, 아 넥신 V (도 4b) (13)로 표지 될 수 없다. 반면, 에탄올 - 유도 세포 사멸 죽는 세포 표면 (도 4b) (13) 포스파티딜 세린 노출되므로, 형광 넥신 V 38,44으로 표지 될 수있다. 눈에 띄게, 아 넥신 V 표지 세포는 차 심근 세포 (그림 4B) 13 사멸을 반전 것을 제안, 죽음의 자극을 제거한 후 정상적인 형태를 회복 할 수 있습니다. 다른 사람들은 이전에 생체 내에서 발생할 수있는 세포 사멸로부터의 회복을 제안하는 비슷한 전략을 적용했습니다. 일과성 허혈 손상의 생체 모델에서, 토끼의 심근 세포와 마우스의 카스파 의존 넥신 V 라벨은 분명히 다시살아있는 동물에서 발생할 수있는 아나스타시스을 제안, 일시적인 허혈 (45) 후 세포 생존에 의해 넥신 V의 국제화에 sulted. 또한, 두 개의 다른 연구 (BCL 한 .3B3에서 아폽토시스를 유도하는 항 면역 글로불린 항체에 노출) 한 .3B3 B 림프종 세포는 아 넥신 V 표지 된 마우스 BCL 분획 및 마우스 유방 암종 온도를 발현 MOD 셀을 식별하는 세포 분류를 사용 에 민감한 p53의 (즉 후 허용 온도 이하로 배양 세포 사멸의 원인)가 정상 배양 조건 (14, 15)에 반환 된 후 증식을 계속했다. 종합적으로, 이러한 연구는 아 넥신 V 라이브 세포 현미경 이미징없이 세포 사멸을 반전 한 세포의 운명을 결정하는 데 유용하는 것이 좋습니다. 아 넥신 V의 형광 있도록, 죽음의 자극의 제거 후 몇 시간 동안 검출 나머지 (그림 4B) (13), 영구되지 않습니다 그러나,이 전략과주의 사항이있다이 방법은 세포 사멸을 반전 세포의 장기 추적을 제공 할 수 없습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/51964/51964fig1highres.jpg" /> 그림 1 : 라이브 세포 이미징에 의해 세포 사멸의 반전을 추적. (- D, 및 G.도 1a에 대해, 탕 등, MBoC 23 2240년에서 2252년까지 (13)으로부터 허가 재판). 아폽토시스를 유도 및 배양 된 세포 고사 유발 인자를 씻어 후에 복구 할 수 있도록 (A) 어프로치. (미처리) 건강한 마우스 기본 간세포 (B) 저속 생균 위상차 현미경, 처리 한 세포의 동일한 그룹 5 시간 (처리)하고 세척 및 추가 (세척) 24 시간 신선한 배양액으로 배양 용 배지 (부피 / 부피)의 4.5 % 에탄올. 스케일 바, 100 μm의. (C) etha 이전과 같은 기본 마우스 간 세포의 연속 시간 경과 라이브 셀 에피 형광 현미경NOL 2.5 시간 (II 및 III), 및 세탁 후의위한 세포 배양 배지에 4.5 % 에탄올 처리 후 표시된 시간에 처리 (Ⅰ) 및 1 시간 동안 복구를 허용하는 새로운 배지로 배양 (IV - VI). MitoTracker 염색 미토콘드리아 (적색)과 훽스트 염색 핵 (파란색)의 병합 된 이미지는 DIC 현미경에 의한 에피 형광 현미경 및 세포 형태로 시각화 하였다. 스케일 바는, 패널 C에서 10 μm의. (D) 합병 형광 이미지 만 (DIC없이)는 세포 기관 모폴로지를 알 수있다. (E)를 에탄올 처리하기 전에 인간의 작은 세포 폐암 암 H446 세포의 연속 시간 경과 라이브 셀 공 초점 현미경 (i)를 2 시간 28 분 (II-VI)을위한 세포 배양 배지에 3.8 % 에탄올로 처리 한 후, 세척 후 및 복구 (VII-XII)을 허용하는 신선한 배지로 배양. MitoTracker 염색 미토콘드리아 (적색)과 훽스트 염색 핵 (파란색)의 병합 된 이미지는 공 초점 현미경 및 c 시각화했다<html> DIC 현미경으로 엘 형태. 흰색 화살표는 세포 사멸 기관 (VI)의 조각 핵을 나타냅니다. 스케일 바, 10 μm의. (F) 합병 만 (DIC)없이 형광 이미지 패널 E에서이 세포 기관 형태학을 알 수있다. (G)를 연속 부정확 한 세포 분열을 거쳐 하나의 헬라 세포의 흑백 훽스트 염색 핵 이미징을위한 시간 경과 라이브 셀 에피 형광 현미경. 5 시간 동안 세포 배양 배지에 4.3 % 에탄올 처리 에탄올 (I)의 처리 전 (II) 및 에탄올 제거 후 (세척하고, III-VI). 패널 IV는 비정상적인 세포 분열을 보여준다. 빨간색 화살표는 분할 셀 (IV-VI)의 주요 핵을 나타냅니다. 스케일 바, 30 μm의. 시간은 시간으로 표시됩니다. 분 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51964/51964fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> gure 2 &quot;SRC =&quot;/ 파일 / ftp_upload / 51964 / 51964fig2highres.jpg &quot;/&gt; 그림 2 :시 시토크롬 C의 미토콘드리아 릴리스 (A) 안정 (I) 전에 사이토 크롬 c -GFP (사이토 C -GFP)을 표현 헬라 세포의 연속 시간 경과 라이브 셀 공 초점 현미경, 후 세포 사멸의 반전 감지 (II-III) 및 세포 배양 배지에 3.9 % 에탄올로 (III-VII) 노광 후의. CytoC-GFP (녹색), MitoTracker 염색 미토콘드리아 (빨간색) 및 훽스트 염색 핵 (파란색)의 합병 공 초점 이미지는 DIC 이미지 (왼쪽 패널)와 결합된다. 병합되지 않은 버전의 신호 강도의 열지도 (왼쪽 가운데 패널), CytoC-GFP (가운데 패널)의 흑백 이미지 및 미토콘드리아의 흑백 이미지 (오른쪽 가운데 패널)로 제시, CytoC-GFP에 대해 개별적으로 표시됩니다. CytoC-GFP 및 미토콘드리아 (오른쪽 패널)의 병합 된 이미지. (B) 세포, Cel에의 세포질 시토크롬 C-GFP 신호 강도의 변화패널 아이의 흑백 CytoC-GFP 이미지에 표시된대로 리터 1 셀 2. 시간은 시간으로 표시됩니다. 분 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51964/51964fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/51964/51964fig3highres.jpg" /> 그림 3 : (그림 3A에 대한 탕 등, MBoC (23), 2240-2252 (13)으로부터 허가 재판, - D.) 카스파 제 활성화 후 세포 사멸의 반전을 감지. 라이브 핵 수출 신호 (NES) DEVD의 카스파 제 절단 부위, 옐로우 형광 단백질 (YFP)과 핵 이행 시그널 (NLS)로 이루어지는 카스파 바이오 센서 융합 단백질의 (A)의 다이어그램. (B) 연속 경과 동안 카스파 바이오 센서 NES-DEVD-NLS-YFP (I)을하기 전에, 발현 HeLa 세포의 세포 초점 현미경 (ⅱ<html> -IV) 및 세포 배양 배지에 4.3 % 에탄올로 (VX) 노광 후의. 카스파 바이오 센서 (녹색)의 합병 공 초점 이미지, 훽스트 염색 핵 (파란색)과 DIC 이미지 (왼쪽 패널), YFP 신호 (가운데 패널)의 흑백 이미지, YFP 신호 강도를 나타내는 열지도 (오른쪽 패널) . (C) 비 처리시 전에 패널 B. (D) (패널 양방향으로 1과 2 번째의) 개개의 ​​세포에서 활성화 된 핵 카스파 바이오 센서에 대한 형광 강도를 정량 동일하게하여 분석 제어부, 및 에탄올의 노출 후, 미처리 대조군 (CI 패널 3, 4 번째)의 핵 (핵 / 총 세포 YFP 신호 강도 × 100 %)에 존재 YFP의 백분율로 계산 하였다. 시간은 시간으로 표시됩니다 분. 스케일 바, 10 μm의. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51964/51964fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> AYS &quot;&gt; <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/51964/51964fig4highres.jpg" /> 그림 4 : 형광 표지 넥신 V에 의해 세포 사멸의 반전을 감지은 (. - B도 4a에 대해, 탕 등, MBoC 23 2240년부터 2252년까지 (13)으로부터 허가 재판). 패널 B. (B) 주 심장 심실 근세포 5 시간 동안 세포 배양 배지에 4.5 % 에탄올에 노출 후 10 넥신 V-FITC와 함께 인큐베이션 하였다 신생아 래트에서 사용 넥신 V-FITC의 아나스타시스 분석법 (A) 다이어그램 분 에탄올 매체의 제거 전에. 세포 중 하나를 즉시 해결 (처리), 또는 추가로 2 시간 복구를 위해 신선한 배지로 재 이송 후 고정시켰다 (세척). 아 넥신 V-FITC를 노출 처리되지 않은 세포 제어 (처리되지 않은)의 역할을한다. MitoTracker 염색 미토콘드리아 (적색), 훽스트 염색 핵 (파란색)과 아 넥신 V-FITC (녹색)은 공 초점 현미경으로 시각화하고, 세포 형태는 DIC 현미경으로 시각화했다. 사우스 캐롤라이나맥주 바, 10 μm의. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51964/51964fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Strategies for Tracking Anastasis, A Cell Survival Phenomenon that Reverses Apoptosis

The term anastasis refers to the phenomenon in which dying cells reverse a cell suicide process at a late stage, repair themselves, and ultimately survive. Here we demonstrate protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis.

추적 아나스타시스, 세포 사멸을 취소 세포 생존 현상에 대한 전략

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

18.0K 조회수.  Johns Hopkins University Bloomberg School of Public Health. The term anastasis refers to the phenomenon in which dying cells reverse a cell suicide process at a late stage, repair themselves, and ultimately survive. Here we demonstrate protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis. 

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Using Eye Movements to Evaluate the Cognitive Processes Involved in Text Comprehension

The present article describes how to use eye tracking methodologies to study the cognitive processes involved in text comprehension. Measuring eye movements during reading is one of the most precise methods for measuring moment-by-moment (online) processing demands during text comprehension. Cognitive processing demands are reflected by several aspects of eye movement behavior, such as fixation duration, number of fixations, and number of regressions (returning to prior parts of a text). Important properties of eye tracking equipment that researchers need to consider are described, including how frequently the eye position is measured (sampling rate), accuracy of determining eye position, how much head movement is allowed, and ease of use. Also described are properties of stimuli that influence eye movements that need to be controlled in studies of text comprehension, such as the position, frequency, and length of target words. Procedural recommendations related to preparing the participant, setting up and calibrating the equipment, and running a study are given. Representative results are presented to illustrate how data can be evaluated. Although the methodology is described in terms of reading comprehension, much of the information presented can be applied to any study in which participants read verbal stimuli.

The present article describes how to use eye tracking methodologies to study the cognitive processes involved in text comprehension. Descriptions of eye tracking equipment, how to develop experimental stimuli, and procedural recommendations are included. The information presented can be applied to most any study using verbal stimuli.

눈 의 움직임을 사용하여 텍스트 이해에 관련된 인지 프로세스를 평가합니다.

The present article describes how to use eye  tracking methodologies to study the cognitive processes involved in text  comprehension. Measuring eye ...

연구

행동분석학

Sit-to-stand-and-walk from 120% Knee Height: A Novel Approach to Assess Dynamic Postural Control Independent of Lead-limb

Individuals with sensorimotor pathology e.g., stroke have difficulty executing the common task of rising from sitting and initiating gait (sit-to-walk: STW). Thus, in clinical rehabilitation separation of sit-to-stand and gait initiation - termed sit-to-stand-and-walk (STSW) - is usual. However, a standardized STSW protocol with a clearly defined analytical approach suitable for pathological assessment has yet to be defined.
Hence, a goal-orientated protocol is defined that is suitable for healthy and compromised individuals by requiring the rising phase to be initiated from 120% knee height with a wide base of support independent of lead limb. Optical capture of three-dimensional (3D) segmental movement trajectories, and force platforms to yield two-dimensional (2D) center-of-pressure (COP) trajectories permit tracking of the horizontal distance between COP and whole-body-center-of-mass (BCOM), the decrease of which increases positional stability but is proposed to represent poor dynamic postural control.
BCOM-COP distance is expressed with and without normalization to subjects&#39; leg length. Whilst COP-BCOM distances vary through STSW, normalized data at the key movement events of seat-off and initial toe-off (TO1) during steps 1 and 2 have low intra and inter subject variability in 5 repeated trials performed by 10 young healthy individuals. Thus, comparing COP-BCOM distance at key events during performance of an STSW paradigm between patients with upper motor neuron injury, or other compromised patient groups, and normative data in young healthy individuals is a novel methodology for evaluation of dynamic postural stability.

Here, we present a novel protocol to measure positional stability at key events during the sit-to-stand-to-walk using the center-of-pressure to the whole-body-center-of-mass distance. This was derived from the force platform and three-dimensional motion-capture technology. The paradigm is reliable and can be utilized for the assessment of neurologically compromised individuals.

앉아 - 투 - 독립 및-거리에 120 % 무릎 높이에서 : 소설 접근을 동적 자세 제어 독립적 인 리드 사지의 평가에

Individuals with sensorimotor pathology e.g., stroke have difficulty executing the common task of rising from sitting and initiating gait (sit-to-walk: ...

Enactive Phenomenological Approach to the Trier Social Stress Test: A Mixed Methods Point of View

The single Trier Social Stress Test (TSST) and the TSST for groups (TSST-G) are the most used protocols to experimentally induce psychosocial stress. These tests are based on uncontrollability and social-evaluative threat, inducing psychological and physiological consequences (e.g., anxiety, emotional states, salivary cortisol increases). Many quantitative experimental studies have investigated these stress inducers and these consequences. But, as far as we know, this study is the first to provide a qualitative analysis to access the participants' voices so as to understand the dynamics of their experience throughout the TSST and the TSST-G. This paper outlines a mixed methods approach to the TSST. This approach can help to maximize the information that can be gained from the TSST, which researchers often use without looking more closely at what is qualitatively happening psychologically for participants during the stressor itself. In this way, this protocol is an example of mixed methods, showing the added value of using the enactive phenomenological approach to analyze experimental protocols more deeply. This kind of mixed methods is helpful to access the experience, to understand the actor's point of view, and to analyze in-depth the dynamics of cognitive processes like intentions, perceptions, enacted knowledge, and emotion. The discussion section shows the different uses of a mixed methods protocol, exploiting the enactive phenomenological approach to analyze a protocol or to give a cross vision of the same research subject. This section deals with different existing applications, pointing out some critical steps in this mixed methods approach.

Here, we present an original mixed method combining a quantitative and a qualitative approach to examine accurately participants&#39; experiences during the Trier Social Stress Test and the Trier Social Stress Test for groups.

트리에 사회 스트레스 테스트에 enactive 현상 학적 접근: 혼합된 방법의 관점

The single Trier Social Stress Test (TSST) and the TSST for groups (TSST-G) are the most used protocols to experimentally induce psychosocial stress. ...

Multimodal Protocol for Assessing Metacognition and Self-Regulation in Adults with Learning Difficulties

Learning disabilities (LDs) encompass disorders of those who have difficulty learning and using academic skills, exhibiting performance below expectations for their chronological age in the areas of reading, writing, and/or mathematics. Each of the disorders making up the LDs involve different deficits; however, some commonalities can be found within that heterogeneity, such in terms of learning self-regulation and metacognition. Unlike in early ages and later educational levels, there are hardly any evidence-based evaluation protocols for adults with LDs. LDs influence academic performance but also have serious consequences in professional, social, and family contexts. In response to this, the current work proposes a multimodal evaluation protocol focused on metacognitive, self-regulation of learning, and emotional processes, which make up the basis of the difficulties in adults with LDs. The assessment is carried out through analysis of the on-line learning process using a variety methods, techniques, and sensors (e.g., eye tracking, facial expressions of emotion, physiological responses, concurrent verbalizations, log files, screen recordings of human-machine interactions) and off-line methods (e.g., questionnaires, interviews, and self-report measures). This theoretically-driven and empirically-based guideline aims to provide an accurate assessment of LDs in adulthood in order to design effective prevention and intervention proposals.

The current work proposes a multimodal evaluation protocol focused on metacognitive, self-regulation of learning, and emotional processes, which make up the basis of the difficulties in adults with LDs.

Learning disabilities (LDs) encompass disorders of those who have difficulty learning and using academic skills, exhibiting performance below expectations ...

Active Place Avoidance Test를 사용한 생쥐의 공간 학습 이해

The Active Place Avoidance (APA) Test, an Effective, Versatile and Repeatable Spatial Learning Task for Mice

Hippocampus-dependent spatial learning in rodents has been tested using a variety of methods. These include the Morris water maze (MWM), Y-maze, and novel object location (NOL) tasks. More recently, the active place avoidance (APA) task has been developed as an alternative to these more traditional approaches. In the APA task, mice must use spatial cues placed around a rotating arena to avoid a stationary shock zone. Due to the multiple parameters that can be adjusted, the APA task has been demonstrated to be a very versatile approach. It lends itself to being used longitudinally and repeatedly for the same cohort of mice. Here, we provide a detailed protocol to successfully conduct the APA task. We also highlight alternative APA approaches that can be used to examine different components of spatial learning. We describe the data collection and analysis processes. Critical steps during the APA task are discussed to increase the likelihood of successfully conducting the test. The APA task has several advantages over more traditional spatial navigation tests. It is appropriate to use with aged mice or those with disease phenotypes such as Alzheimer's disease. The complexity of the task can be easily altered, allowing a wide range of mouse strains to be tested. Further, the APA task is suitable for testing animals that have undergone surgery or experimental interventions that may have affected motor or neural function, such as stroke or traumatic brain injury.

저자 스포트라이트: Investigating the Impact of Aging on Hippocampal-Dependent Spatial Learning (저자 스포트라이트: 노화가 해마 의존적 공간 학습에 미치는 영향 조사)

Here, we present a protocol for the active place avoidance test, a hippocampus-dependent spatial learning paradigm designed for rodents. Altering key parameters allows for re-testing of animals before and after treatments or over time.

APA(Active Place Avoidance) 테스트는 생쥐를 위한 효과적이고 다재다능하며 반복 가능한 공간 학습 과제입니다.

Hippocampus-dependent spatial learning in rodents has been tested using a variety of methods. These include the Morris water maze (MWM), Y-maze, and novel ...

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death processes that are generally assumed to be intrinsically irreversible. Promoting anastasis could in principle rescue or preserve injured cells that are difficult to replace such as cardiomyocytes or neurons, thereby facilitating tissue recovery. Conversely, suppressing anastasis in cancer cells, undergoing apoptosis after anti-cancer therapies, may ensure cancer cell death and reduce the chances of recurrence. However, these studies have been hampered by the lack of tools for tracking the fate of cells that undergo anastasis in live animals. The challenge is to identify the cells that have reversed the cell death process despite their morphologically normal appearance after recovery. To overcome this difficulty, we have developed Drosophila and mammalian CaspaseTracker biosensor systems that can identify and permanently track the anastatic cells in vitro or in vivo. Here, we present in vivo protocols for the generation and use of the CaspaseTracker dual biosensor system to detect and track anastasis in Drosophila melanogaster after transient exposure to cell death stimuli. While conventional biosensors and protocols can label cells actively undergoing apoptotic cell death, the CaspaseTracker biosensor can permanently label cells that have recovered after caspase activation - a hallmark of late-stage apoptosis, and simultaneously identify active apoptotic processes. This biosensor can also track the recovery of the cells that attempted other forms of cell death that directly or indirectly involved caspase activity. Therefore, this protocol enables us to continuously track the fate of these cells and their progeny, facilitating future studies of the biological functions, molecular mechanisms, physiological and pathological consequences, and therapeutic implications of anastasis. We also discuss the appropriate controls to distinguish cells that undergo anastasis from those that display non-apoptotic caspase activity in vivo.

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Anastasis is technically challenging to detect in vivo because the cells that have reversed the cell death process can be morphologically indistinguishable from normal healthy cells. Here we describe protocols for detecting and tracking cells that undergo anastasis in live animals by using our newly developed in vivo CaspaseTracker biosensor system.

Anastasis에서 Vivo에서 CaspaseTracker 바이오 센서에 의해 감지

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death ...

의학

Evaluating Postural Control and Lower-extremity Muscle Activation in Individuals with Chronic Ankle Instability

Computerized dynamic posturography (CDP) is an objective technique for the evaluation of postural stability under static and dynamic conditions and perturbation. CDP is based on the inverted pendulum model that traces the interrelationship between the center of pressure and the center of gravity. CDP can be used to analyze the proportions of vision, proprioception, and vestibular sensation to maintain postural stability. The following characters define chronic ankle instability (CAI): persistent ankle pain, swelling, the feeling of &#8220;giving way,&#8221; and self-reported disability. Postural stability and fibular muscle activation level in individuals with CAI decreased due to lateral ankle ligament complex injuries. Few studies have used CDP to explore the postural stability of individuals with CAI. Studies that investigate postural stability and related muscle activation by using synchronized CDP with surface electromyography are lacking. This CDP protocol includes a sensory organization test (SOT), a motor control test (MCT), and an adaption test (ADT), as well as tests that measure unilateral stance (US) and limit of stability (LOS). The surface electromyography system is synchronized with CDP to collect data on lower limb muscle activation during measurement. This protocol presents a novel approach for evaluating the coordination of the visual, somatosensory, and vestibular systems and related muscle activation to maintain postural stability. Moreover, it provides new insights into the neuromuscular control of individuals with CAI when coping with real complex environments.

Individuals with chronic ankle instability (CAI) exhibit postural control deficiency and delayed muscle activation of lower extremities. Computerized dynamic posturography combined with surface electromyography provides insights into the coordination of the visual, somatosensory, and vestibular systems with muscle activation regulation to maintain postural stability in individuals with CAI.

만성 발목 불안정을 가진 개별에 있는 자세 통제 및 낮은 사지 근육 활성화 평가

Computerized dynamic posturography (CDP) is an objective technique for the evaluation of postural stability under static and dynamic conditions and ...

신경과학

T-Cell Kinetics의 해명: 실시간 이동 분석 방법

Real-Time In Vitro Migration Assay for Primary Murine CD8+ T Cells

The adaptive immune response is reliant on a T cell&#39;s ability to migrate through blood, lymph, and tissue&#160;in response to pathogens and foreign bodies. T cell migration is a complex process that requires the coordination of many signal inputs from the environment and local immune cells, including chemokines, chemokine receptors, and adhesion molecules. Furthermore, T cell motility is influenced by dynamic surrounding environmental cues, which can alter activation state, transcriptional landscape, adhesion molecule expression, and more. In vivo, the complexity of these seemingly intertwined factors makes it difficult to distinguish individual signals that contribute to T cell migration. This protocol provides a string of methods from T cell isolation to computer-aided analysis to assess T cell migration in real-time&#160;under highly specific environmental conditions.&#160;These conditions&#160;may help&#160;elucidate mechanisms that regulate migration, improving our&#160;understanding of T cell kinetics and providing&#160;strong mechanistic evidence that is difficult&#160;to attain through animal experiments. A deeper understanding of the&#160;molecular interactions that impact cell&#160;migration is important to develop improved therapeutics.

저자 스포트라이트: T 세포 이동의 실시간 분석을 통한 질병 메커니즘 이해

This protocol providesa method of primary murine T cell isolation and time-lapse microscopy of T cell migration under specific environmental conditions with quantitative analysis.

일차 쥐 CD8+ T 세포에 대한 Real-Time In Vitro Migration Assay

The adaptive immune response is reliant on a T cell&#39;s ability to migrate through blood, lymph, and tissue&#160;in response to pathogens and foreign ...

추적 아나스타시스, 세포 사멸을 취소 세포 생존 현상에 대한 전략

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