実験的な臓器提供モデルは、一般に、死亡プロセスに関連する組織損傷の孤立した状況および/または臓器の保存と移植に関連するイベントを模倣します。これらのモデルは、寄付の数を増やし、その結果、潜在的なレシピエントの重み付けリストを減らすことを目的とした治療法の開発に非常に役立ちます。そのため、脳死や循環死を誘導するモデルなど、異なるモデルの開発が重要になってきています。
これらのイベントは、提供された臓器や組織の機能を損なうさまざまな有害なプロセスに関連しているためです。麻酔と術前の準備。ラットを5%イソフルランを含む密閉チャンバーに1〜4分間入れます。
つま先挟み反射をチェックして、適切な麻酔を確認します。反射反応がない場合、小児喉頭鏡の助けを借りて口腔挿管、14ゲージ血管腔内挿管を実行します。事前に調整された機械式人工呼吸器と一回換気量10ミリリットル/キログラム、90サイクル/分、およびPEEP 3.0センチメートルH2Oを使用して、気管カテーテルを人工呼吸器に接続し、麻酔薬濃度を2%に調整して、関心領域、頭、首、胸、腹部から毛を取り除きます。
次に、ガーゼを使用して、ジグルコン酸クロルヘキシジンのアルコール溶液で手術野と動物の尾を洗浄し、2%消毒手順を3回繰り返しました。動物の尻尾の先端を切り、親指と人差し指を尻尾の付け根に置き、根元から押してスライドさせます。末梢血サンプルを採取し、総白血球数について尾部から20マイクロリットルを採取します。気管 切開。
頸部気管の縦断を、首の中央3分の1から胸骨上ノッチまで行います。約1.5センチの切開。皮膚と皮下組織を切開した後、気管が露出するまで頸椎の筋肉を解剖します。
2.0シルク結紮糸を気管の下に置きます。マイクロハサミを使用して、気管の上部3分の1を気管切開し、均一な換気を実現します。金属カニューレの直径3.5センチメートルに対応するために、2つの軟骨リングの間の気管を水平に切断します。
換気チューブを挿入し、準備した結紮糸で固定します。換気チューブを小動物換気システムに接続します。一回換気量10ミリリットル/キログラム、毎分70サイクル、3センチメートルH2OのPEEPでラットを換気する。
大腿動脈と静脈のカテーテル検査。そこで、鼠径部の約1.5センチメートルの小さな切開部から大腿骨の三角形を露出させます。大腿血管を特定して分離します。
この手順では、実体顕微鏡を3.2倍の倍率で使用します。血管、静脈、または動脈の下に2つの4.0シルク結紮糸を、1つは遠位に、もう1つは近位に配置します。最も遠位の結紮糸を閉じ、近位結紮糸に事前に調整された結び目を配置して引っ張ります。
血管内の小さな予備切開部からカテーテルを挿入します。脱臼を避けるためにカニューレを固定します。動脈カテーテルを圧力トランスデューサーとバイタルサインモニタリングシステムに接続して、MAPを記録します。
トランスデューサーは、動物の心臓の高さに配置する必要があります。アーチェリーカテーテルを圧力トランスデューサーとバイタルサインモニタリングシステムに接続して、MAPを記録します。トランスデューサーは、動物の心臓の高さに配置する必要があります。
シリンジカテーテルを静脈に3ミリリットル入れ、必要に応じて水分補給と放血を目指します。出血性ショック誘導。静脈軸を通して、ヘパリン処理シリンジを使用して、約50ミリメートルの水銀柱のMAP値に達するまで少量の血液を除去します。.
したがって、出血性ショックを確立する。血液のアリコートは10分間隔で服用する必要があることに注意してください。水銀柱水銀柱約50ミリメートルで360分間、圧力を安定させます。
これを行うには、圧力がそれぞれ上昇または下降した場合に血液のアリコートを除去または追加します。低体温症を避けるために、近くに熱源を置きます。プロトコルの最後に、肺ブロックを総肺活量で採取して採取し、液体窒素で急速凍結するか、さらなる研究のために固定溶液に入れます。
循環死誘導。循環死を誘発するには、静脈ラインから1キログラムあたり150ミリグラムのチオペンタールナトリウムを投与します。.次に、換気システムをオフにします。
MAP が徐々に減少していることに注目してください。動物は室温で180分間温かい虚血状態に保たれるべきです。プロトコルの最後に、肺を人工呼吸器に再接続し、肺ブロックを総肺活量で採取して収集します。
また、液体窒素で瞬間凍結するか、固定液に入れてさらに研究します。脳死誘導。ラットをうつ伏せの位置に置きます。
手術用ハサミを使用して頭蓋骨から皮膚を取り除きます。矢状縫合糸の前方2.8ミリメートル、腹側10ミリメートル、側面1.5ミリメートルに1ミリメートルの口径のボアホールを開けます。バルーンカテーテル全体を頭蓋腔に挿入し、バルーンに生理食塩水(500マイクロリットル)があらかじめ充填されていることを確認します。
注射器の助けを借りて、カテーテルを急速に膨らませます。MAPの急激な上昇を観察して脳死を確認する。クッシング反射、反射の欠如、両側性散瞳、および無呼吸。
確認後、麻酔を中止し、動物を360分間人工呼吸器にかけます。低体温症を避けるために、近くに熱源を置きます。プロトコルの最後に、肺ブロックを総肺活量で採取して収集します。業績。
カテーテル送気後、脳死群は血圧値の急激な上昇を経験した。高血圧のピークは、頭蓋内圧の上昇に関連する特異なイベントであり、脳死の確立の最初の証拠と見なすことができます。このピーク圧力に続いて、MAPが急激に低下しました。
低血圧は約50分間持続し、その後、MAPレベルはベースラインに近い値に戻りました。脳死群とは異なり、出血性ショック群のMAPの減少は、実験の最初の10分間の血液アリコートの離脱と関連しています。血液量減少性ショックは360分間維持された。
出血性ショックの発症から6時間後、動物は肺組織の抵抗力が増加し、続いて呼吸器系のコンプライアンスが低下しました。肺浮腫の変化を評価するために、湿潤体重と乾体重の比率を調べました。これに関連して、脳死は出血性ショックおよび循環死群と比較してより大きな浮腫を示しました。
最後に、出血性ショック群は、ベースライン値と比較して全身性白血球の総数の増加と関連しており、脳死群に関連していた。これは、循環器死よりも脳死群と出血性ショック群でIL1ベータ発現レベルの増加を伴いました。また、出血性ショック群は、脳死群や循環死群と比較してTNFα値が高いことが示されました。
ここで説明する臓器提供者モデルは、さまざまな移植片採取方法に関連する変化の研究における潜在的なツールであり、移植後の転帰に対するこれらの臓器の質の影響を完全に理解するための手段を提供する可能性があります。ここで紹介する方法論の再現性と信頼性を考えると。
