認知障害は、側頭葉てんかんにおける最も一般的な共罹患率の1つである。慢性てんかんのマウスモデルを用いて記憶障害を評価する方法を説明するプロトコルを提示する。新しい物体の位置、新しい物体認識およびパターン分離テストは、動物に最小限のストレスを与えることができるシンプルで短いお尻である。
これは、自発的な再発発作のための追加のトリガーなしに、てんかんマウスの記憶機能を評価するために、このテストを最適にします。まず、動物を自宅のケージの低光に少なくとも30分間順応させる。開いているフィールド ボックスを準備します。
1日目に、開いたフィールドボックスの中央に習慣、場所、照度計を配置します。そして、照度を60ルクスに調整します。各マウスの運動活動を評価するには、動物行動ビデオ追跡ソフトウェアを使用します。
ビデオトラッキングソフトウェアを開いたら、開いているフィールドボックスのサイズを調整します。次に、壁に面したオープンフィールドボックスに実験用マウスをそっと置きます。スマートプログラムを開き、[カスタマイズして受け入れる]をクリックします。
[イメージ ソース] をクリックします。インストールされているカメラを選択したら、設定ボタンを押します。カメラの解像度を調整し、押して、受け入れます。
キャリブレーションのクリック後、ボックスサイズに合わせてコンピュータのマウスをドラッグします。そして、内側のボックスのサイズを記入します。[ゾーン定義] をクリックして、各ボックスのサイズを保存して調整し、[保存] をクリックします。
赤いボックスは追跡範囲であるため、内側のボックスサイズに収まり、ピンクのボックスはアウトラインに収まります。[検出設定]を押します。[スナップショット] をクリックし、[テストの開始] をクリックして特定の領域が追跡されているかどうかを確認し、テストの終了を事前に確認してから[承認]をクリックします。
[時刻の設定] をクリックします。事前設定時間を選択した後、3秒の取得時間で待ち時間を15分に設定し、[Accept]を押します。[サブジェクト] を押してコード名を設定します。
[スケジューラ] をクリックして既存の詳細を削除し、サブジェクトで変更したコード名をセッション 1 にドラッグします。[データ収集]をクリックします。[録音]ボタンをクリックし、[開始]をクリックします。
ボックスにマウスを入れて、15分間追跡します。録音の15分後にマウスをホームケージに戻します。明るい光を元に戻します。
[データ取得] をクリックします。次に、[アクティブ解析] コード名 Sham を隣のウィンドウにドラッグします。[レポート定義] ボタンをクリックします。
[新しいレポート定義] ボタンをクリックし、[概要レポート] をクリックして[承認]をクリックします。[サブジェクト名] と [ゾーンの距離] をクリックし、横に送信します。次に、[同意]ボタンを押します。
赤いチェック マークをクリックし、[分析] をクリックします。結果を確認します。2日目と3日目に、習慣セッションを繰り返します。
4日目に慣れ親しんだセッションを実行します。薄暗い光の中で、空のオープンフィールドに各マウスを3分間置きます。この短い習慣の後、その家のケージに動物を返します。
隣接する壁から5センチメートル離れたオープンフィールドアリーナに、2つの同一のオブジェクト、ゴム人形を置きます。両面テープでオブジェクトを固定します。実験マウスを、オブジェクトから最も遠い壁に面したオープンフィールドボックスに導入します。
20 分間の無料探索を許可し、2 つのストップウォッチを使用して両方のオブジェクトを探索するのにかかる時間を手動で測定します。動物の出物が物体を指さない探索的な時間、どんな行動としても定量化しないでください。マウスが 30 秒の最小探索時間に達したら、2 つのオブジェクトの場合、F1 セッションを停止し、マウスをホーム ケージに移します。
マウスが 20 分以内にオブジェクトを 30 秒間探索できない場合は、開いているフィールド ボックスからマウスを削除し、それ以降のセッションから除外します。5 日目に、新規オブジェクトの位置テスト セッションを実行します。マウスを開いたフィールド領域に移動して、3 分間再び使用します。
その後、そのホームケージに戻します。1 つのオブジェクトを対角線位置に移動し、開いたフィールド ボックスの壁に対して実験用マウスを配置します。ビデオ追跡システムで10分間の無料探索と録画を行うことができます。
2つのストップウォッチを使用して、各オブジェクトを探索するのにかかる時間を測定します。次に、尾をつかんでマウスをホームケージに移します。3日間、マウスは食べ物と水への無料アクセスで休ませてください。
9日目に1匹のマウスに対して15分間の習慣セッションを行います。10日目に、簡単な再居住セッションを3分間実行します。その後、一時的に自宅のケージに戻します。
隣接する壁から5センチメートル離れたオープンフィールドに、40ミリリットルの水で満たされた50ミリリットルのプラスチックチューブの2つの同一の物体を置きます。開いたフィールド ボックスに、オブジェクトから最も遠い壁に向かって実験用マウスを導入します。マウスはNOテストの2つの異なるオブジェクト、40ミリリットルの水で満たされた50ミリリットルのプラスチックチューブ、ガラスのコプリン瓶に露出します。
慣れ親しんだセッション中に、グループ内の動物の半分に対して2つの同一のオブジェクト、ガラスコプリン瓶ジャーを提示することによって、オブジェクトのバランスを取ります。次に、2 つの異なるオブジェクトを使用して、20 分間の無料探索を許可し、2 つのストップウォッチを使用して両方のオブジェクトを探索するのにかかる時間を手動で測定します。両方のオブジェクトの最小有効期限が 30 秒に達したら、慣れ親しんだセッションを停止します。
翌日、新規オブジェクト認識テストセッションを実行します。まず、マウスを開いたフィールドに移して、3分間、再び住み、それからホームケージに戻します。隣接する壁から5センチメートル離れた場所で、チューブをガラスのコプリン瓶瓶に交換して、マウスが1つのチューブと1つのガラスコプリン瓶に露出するようにします。
最初の慣れ親しんだセッション中にガラスコプリン瓶にさらされた半分の動物については、ガラスのコプリン瓶を40ミリリットルの水で満たされた50ミリリットルのプラスチックチューブに置き換えます。マウスが1つのチューブと1つのガラスコプリン瓶に露出するように。ビデオ追跡システムを使用して録画しながら、10分間の無料探索を可能にします。
次に実験用マウスの尾をつかみ、ホームケージに移します。3日間、マウスは食べ物と水への無料アクセスで休ませます。NL 分析の場合は、[プログラムのカスタマイズを開始] を開いて[受け入れる]をクリックします。
[イメージ ソース] をクリックします。インストールされているカメラを選択したら、設定ボタンを押します。カメラの解像度を押して[同意]を押します。
[ビデオフォルダを開く] ボタンをクリックして、保存した動画を開きます。保存したビデオをマウスが入った時間から 10 分間視聴し、各オブジェクトの探索に費やした時間を測定します。15日目に、最初にPSテストの最初の慣れ親しんだセッションを行いました。
これは、マウスが再生息するためのオープンフィールド領域に3分間です。広いグリッドと 2 つの同一のオブジェクトを持つフロア プレートを配置します。50ミリリットルの水で満たされたプラスチックTフラスコは、オープンフィールドボックスに。
次に、実験用マウスを、オブジェクトから最も遠い壁に面したオープンフィールドボックスに導入しました。20分間無料で探索できます。また、2つのストップウォッチを使用して両方のオブジェクトを探索するのに費やす時間を手動で測定します。
マウスが両方のオブジェクトの 30 秒の最小探査時間に達したら、最初の慣れ親しんだセッションを停止し、そのホーム ケージに動物を転送します。動物の半分のオブジェクトとパターンの分離テストのバランスを取るために、広いグリッドと2つの同一のオブジェクトで床板を配置し、オープンフィールドボックスでカウンターバランス実験のためのガラスボトル。次に、実験用マウスを開いたフィールドボックスに導入し、20分間無料で探索できるようにします。
マウスが2つのオブジェクトの最低探査時間である30秒に達したら、最初の慣れ親しんだセッションを停止し、動物を自宅のケージに移します。翌日、マウスをフィールドエリアに移して3分間再居住します。そして、そのホームケージにそれを返します。
次に、狭いグリッドフロアに2つのガラス瓶を使用して2回目の慣れ親しんだセッションを行います。カウンターバランス実験では、狭いグリッドフロアに水で満たされた2つのTフラスコで2回目の慣れ親しんだセッションを行います。次の日にパターン分離テストセッションを実行します。
オブジェクトを持たないオープンフィールドエリアにマウスを移動し、3分間再生息します。そして、そのホームケージにそれを返します。次に、水とガラス瓶で満たされたTフラスコを狭いグリッドフロアに置きます。
Tフラスコを水で満たして、新しい物体にします。カウンターバランス実験の場合は、狭いグリッドの床に各オブジェクトを配置して、ガラス瓶を新規のオブジェクトにします。その後、実験用マウスを10分間オープンフィールド領域に進めて探索する。
ビデオトラッキングシステムを使用して、10分間の無料探索と記録を許可します。実験マウスの尾をつかみ、ホームケージに移します。2 つのストップウォッチを使用して各オブジェクトの探索に費やした時間を測定します。
そして、新しいオブジェクトと使い慣れたオブジェクトの間の時間差を2つのオブジェクトを探索する合計時間で割った差別比を計算します。ピロカルピンの導入から6週間後に急性発作を誘発した。マウスは、新しいオブジェクトの位置テストを受けます。
新規物体認識試験とパターン分離試験その順序でテストの間に3日間の休息期間で区切られる。2つのオブジェクトの間に有意な好みがないことを確認した。
てんかんマウスは、シャム対照と比較して3つの試験における差別比において有意な減少を示した。空間記憶障害のデモンストレーション。運動活動の測定は、てんかん動物の有意な増加を示した。
一方、オブジェクトを探索する動機は、シャムとてんかん動物の間で比較されました。最後に海馬細胞死を、ピロカルピン誘導状態てんかんの後に、結晶紫色染色を用いて、発作誘発神経損傷を確認した後に評価した。ピロカルピン処理動物は、シャムコントロールとは異なり、海馬のCA3サブフィールドとピノスティック細胞に実証した。
NOとPSテストでカウントアップは、このデバイス固有のオブジェクトに可能な固有のバイアスを減らすために重要です。さらに、慢性てんかんマウスは、実験設定に十分な賞賛国家のための複数の習慣的なステップを必要とする高められた不安を示しています。プロトコル内のオブジェクトの数や場所などの時間変更は、メモリテストを提供することができます。
これは、認知機能の低下に関連するてんかんの複雑なメカニズムを精巧にするのに役立ちます。このビデオを見た後, てんかんの記憶障害のさまざまな側面を評価する方法をよく理解している必要があります。.
