自由に行動するマウスで長期的な感覚の衝突

このプロトコルの全体的な目標は、マウスを自由に振る舞う長期的な学習の研究のための永続的な感覚的競合を生み出すことである。このアプローチは、感覚学習の実験コストと時間を削減し、生体内実験とインビトロ実験の組み合わせを収容します。鎮静マウスのつまみつまみに対する応答の欠如を確認した後、鈍い鉗子のペアを使用して後頭部の皮膚をつかみ、はさみを使用して頭蓋骨を露出させるために1.5cmの縦切開を行います。

メスで骨膜を優しく傷つけ、緑色のアクチベーターの滴を頭蓋骨の真ん中に塗布して骨の透過性を高めます。次に、5滴のモノマーと触媒剤の1滴で移植キットからポリマーのスプーン1杯を混合し、ラムダとブレグマの頭蓋骨のランドマークの間のセメントミックスの寛大な量を磨きます。ラムダからブレグマへのスワイプモーションを使用して、ヘッドポストをセメントに素早く配置し、ポストの下側の部分に追加のセメントを再び適用して、ヘッドポストが頭蓋骨にしっかりと貼り付けられるようにします。

セメントが乾燥している間、樹脂粉末と樹脂液を滑らかな一貫性に混ぜ、得られた樹脂混合物を乾燥したセメントとヘッドポストのまわりに塗布します。樹脂を3分間乾燥させた後、Vicryl 4-0縫合糸を使用して耳の後ろの皮膚を閉じ、綿棒を使用して10〜20%のヨウ素溶液を切開に塗布します。その後、完全に回復するまで監視と赤信号の下に動物を置きます。

手術後48時間後、ストライプデバイスの穴をヘッドポストの穴に合わせ、1.3 mmの六重ドライバーと2本の1.2mmネジを使用してヘッドポストにデバイスを固定します。ヘッドポストをはぎ取ったり、ドライバーで動物を傷つけるリスクを避けるために、2番目のオペレータの助けを借りてヘッドポストにデバイスを固定することをお勧めします。恥の状態を修正するには、デバイスを逆さまにし、デバイスの背面部分をrostral方向に向けて、デバイスの穴をヘッドポストの穴に合わせます。

デバイスが十分に固定されており、動物が取り除くことができないこと、およびデバイスが鼻に直接圧力をかけないことを確認し、痛み、呼吸困難、皮膚損傷を引き起こす可能性があることを確認します。マウスは、装置を装着した最初の48時間の間に何らかの行動異常を示す可能性があるため、この間に動物を注意深く監視し、動物が慣れるまで食物および水に容易にアクセスできるようにする。移植直後のマウスの重さを計り、その後24時間ごとに実験終了まで、ストライプ装置を装着したマウスに特別な注意を払う。

デバイス適合動物の感覚応答を記録するには、ヘッドポストに挿入されたネジで最初のマウスをターンテーブルに固定し、動物の周りにスクリーンドームを配置します。オプトキネティックプロジェクターを除く部屋のすべてのライトをオフにし、時計回りと反時計回りの方向の両方でいくつかの異なる速度で、オプトキネティック反射フルフィールド刺激記録を開始します。録音が終わるとすぐにドームを取り外し、ライトを点灯します。

真っ暗な前庭眼反射を記録するには、動物の目に2%ピロカルピンの低下を適用し、綿棒で軟膏をそっと取り除く前に少なくとも5分待ちます。もう一度すべてのライトを消し、動物を真っ暗に保つためにターンテーブルの上にボックスを置きます。水平前庭眼反射試験を開始する前に、異なる周波数や速度が異なる垂直軸を中心とした正弦角回転を使用します。

2回目の記録セッションが終了したら、動物がピロカルピンの二次血管拡張剤効果から完全に回復するまで、モニタリングを行って赤外線ランプの下でケージにマウスを戻します。シャムまたはストライプのデバイスのいずれかを着用して2週間後、シャムマウスの前庭眼反射応答は適応後も変化されず、ストライプされたデバイス適応動物は劇的に損なわれた反射応答を示す。平均前庭眼反射の定量化は、0.5ヘルツの固定周波数で、視覚前庭ミスマッチプロトコルの前後に毎秒40度で得るが、シャムマウスは有意な利益変化を示さなかった間、ストライプデバイスを身に着けたマウスの強い利益減少を明らかにする。

しかしながら、縞状の装置を装着したマウスのオポカネティック反射は、目視前庭プロトコルの前の期間に観察されたものと、偽動物によって示されたそれに匹敵する。マウスを毎日監視し、デバイスがマウスに正しく配置されていること、およびルーチンが妨げられていないことを確認してください。異なる反射出力を研究するためのセラー適応機構または行動アッセイを同定するための、体外電気生理学または神経細胞イメージングにおけるこの手順に従って行うことができる。