ミツバチから脳ホモジネート ホスホリパーゼ C 活性の検出

この方法は、異なる脳領域におけるPLC活動がミツバチの脳機能にどのように関与しているかなど、神経科学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、このプロトコルは基本的な操作しか必要とするため、研究者が標準的な実験室施設で実験を簡単にプリフォームできることです。まず、ミツバチを含む50mlのチューブを氷の上に30分間置き、ミツバチを麻酔します。次に、歯科用ワックスを半分に折り畳んでプラスチック皿に入れることで、解剖段階を準備します。双眼鏡顕微鏡の下で、ピンセットを使用して、ビーの頭を体から分離します。次に、歯科用ワックスの頭部を固定し、各アンテナのベースに昆虫ピンを挿入して、ヘッドの内部を上向きの位置に保持します。次に、それをカバーするために頭の上に十分な生理液を注ぎます。ピンセットを使用すると、アンテナを取り外します。この後、メスを使用してアンテナのベース付近で水平カットを行い、複合眼の境界で縦切りを行います。頭の上に水平カットを行い、脳の上に窓を開くためにキューティクルを削除します。次に、ピンセットを使用して、脳の内部表面からオシクルからレチンアイと気管を取り除きます。次に、ピンセットを眼球キューティクルの直下に挿入し、複合眼とレチン眼のキューティクルとの間の結合組織を除去する。その後、複合眼のキューティクルとレチンアイを取り除きます。次に、ピンセットを使用して、脳の内部表面から残りの気管を慎重に取り除きます。次に、脳と組織の周りの結合組織を切断し、ヘッドカプセルから脳を解剖する。ピンセットを使用して、脳の後部表面の気管を剥がします。その後、メスを使用して、キノコの体またはMBと垂直ローブの隣の他の脳領域との間の接続を切断します。解剖したMBと残りの脳組織を1.5mlチューブに入れ、ドライアイスで急速に凍結します。まず、凍結した脳組織に10mlの均質化バッファーを加える。プラスチックペゼルを使用して、1.5mlチューブ内の組織を手動で均質化します。この後、均質化された組織溶液をロット内の次の組織に移し、均質化プロセスを繰り返す。次に、30 を追加します。