ここ数年、肝臓工学は移植可能な肝臓移植片を生成する可能性があるため、世界中で話題になっています。しかし、実行可能な長期的な機能と工学的臓器の移植は、まだ将来のビジョンです。最近、生体内肝葉の拡散は、肝臓工学を開始するための有望な戦略となっています。
この技術の主な利点は、インビボが部分的な肝臓足場にスカトロジー血液拡散を施したということです。これは、適切な温度、十分な酸素、栄養素および人工培養培地との元生体拡散とは対照的に成長因子を足場に提供する。別の利点は、肝臓の残りの肝機能を維持し、それによって主に長期生存を可能にすることです.
しかし、インビボ単一葉拡散モデルは技術的に困難であり、術後の生存はまだ達成されていない。ここでは、さらなるインビボ単一肝葉工学の基礎として、長期生存を有する別の外科モデルを提示する予定です。手術モデルを実証する前に、ラット肝解剖学の概要を説明したいと思います。
私たちの単一の肝臓葉の拡散モデルを確立するために、我々は左横葉を選択しました。これは、バイパスを作成することを可能にする明確な血管供給と排水を持つ唯一の肝臓の葉です。これはラットにおける門脈静脈系の3次元再構成である。
ここでの私たちの焦点は、後で流体入口として機能する左のポータル静脈にあります。ラットにおける肝静脈系の3D再構成である。ここでは、後で流体出口として機能する左横肝静脈に焦点を当てています。
肝臓血管解剖学のこの図は、部分灌流モデルに使用される血管アクセスポイントを強調している。このアニメーションは、生体内左葉灌流モデルを生成するスキームを示す。外科モデルを確立するために、左横葉内に回路バイパスを生成する。
この目的のために、左門脈、左肝動脈、左胆管、左中央分離帯の前頭静脈、肝動脈および胆管、および左側肝静脈の次の血管を遮断する必要がある。その後、左門脈を24ゲージカテーテルでカニューレ化する必要があります。その後、左横肝静脈は22ゲージカテーテルを用いてカニューレ化される。
次に、左門脈のカテーテルは、灌流ポンプに接続される。乾燥ガーゼは、左側面肝静脈のカテーテルの出口に置かれ、廃液を吸収する。この方法でバイパスが作成されます。
その後、左横葉は1分間0.5ミリリットルの流量でヘパリン化食塩水を透過する。左横葉への生理的灌流は、閉塞した血管を再び開いた後に回復する。今、外科灌流モデルが確立されています。
このビデオで示されたすべての手順は、地元当局によって評価され、承認されました。腹部の手術フィールドは、ヨウ素チンキの3ラウンドに続いて70%アルコールの2ラウンドでディスアフェクトされます。滅菌ガーゼは、手術場のみを露出させたまま腹部に置かれる。
ラットの腹壁に横切りが行われる。4-0プロレン縫合は、xiphoidプロセスを固定し、頭の方に引っ張るために使用されます。上腹部壁の両側は、器官の完全な露出に達するために2つの沿岸部フックを使用して引き込まれます。
その後、肝臓の葉が見えます。選択的灌流に使用される左横葉を次に示します。腹腔内の十二指腸と小腸を湿らせたガーゼで覆い、乾燥を取り入れた。
湿らせたガーゼで中央値の葉を持ち上げることによって肝臓のヒラムを露出させる。ラットは無菌顕微鏡の下に置かれる。左ポータルの静脈を解剖します。
その後、左の前頭静脈を6-0シルク縫合糸でリゲートします。左肝動脈、左胆管、左中央分離帯の門脈、左中央分離帯の肝動脈、および左中央分離型胆管はマイクロクランプを使用してブロックされる。左横葉の根底にマイクロクランプで左横肝静脈をブロックします。
流体入口を作成するために、門脈の茎は24ゲージ針の住居カテーテルで穿刺される。しかし、カテーテルは挿入されません。その後、カテーテルから針を取り出し、カテーテルを灌流ポンプに接続します。
チューブとカテーテルから空気を排出するために、ヘパリン化された生理食糸を1分間浸透します。その後、ポンプをオフにします。次に、輸液ポンプに接続されている針フリーカテーテルが左門脈に挿入されます。
このようにして、カニューレ化された容器の操作を最小限に抑えます。ここでは、同様の方法でカニュールしようとしている左横肝静脈の露出領域があります。まず、左横肝静脈に22ゲージまたは24ゲージの針住居カテーテルで穿刺して排水穴を作ります。
カテーテルは容器より少し小さいことをお勧めします。その後、1分間に0.5ミリリットルの流量でヘパリン化食塩水で左横葉を浸透させ始めます。流出流流の廃液はガーゼで吸収される。
廃液による腹腔内汚染を最小限に抑えるために、針を含まないカテーテルを左横肝静脈に再挿入します。したがって、カニューレート左横肝静脈は流体出口として機能する。左横葉にヘパリン化した生理的な生理を浸透させ続けます。
流出口から血まみれの液体が滴り落ちているのが見える。矢印は、ヘパリン化生理食前の灌流中に左横葉が黄色に変わったことを示している。灌流の終わりにカテーテルは血管から取り出される。
左横肝静脈の排水開口部は、単一の11-0の白血星縫合糸で閉じている。左門脈の入口は11-0の花粉縫合糸で閉鎖される。再灌流は、左側肝静脈のクランプを取り外した後、上皮性静脈からの逆流から始まる。
生理的灌流は、左肝動脈および胆管からクランプを取り除いた後、さらに回復するとともに、左中央分離血管構造も同様である。完全な再灌流は、濃い赤への色の変化によって示されるように左門脈を再開した後に達成される。左葉の灌流後。
この画像の白い矢印は、標的の肝臓葉が実際に選択的に浸透したことを示しています。ここで白い矢印は、肝臓の約70%を占める残りの葉が、全手順を通して生理学的灌流を保持していることを示している。左横葉の再灌流。
ここで赤色の矢印は、左横葉が閉塞した血管を再開封した後に生理的に再浸透することを示す。青い矢印は、左中央分離帯が虚血を持続したことを示しています。選択的に浸透した左横葉をHE染色を用いて組織学的に調べた。
図Aは、透過した左横葉では、門脈および静脈内の枝に血液細胞が検出可能でなさすることを示す。予想どおり、肝動脈の枝に赤血球が見える。図Bでは、下のコーデントローブがコントロールとして機能します。
血液細胞ははっきりと見え、前頭静脈と肝動脈の枝だけでなく、シヌサイド.図Cは、浸透した左横葉に中央静脈に血球が見えないことを示す。対照的に、図Dは、コントロール下のコーデートローブ血液細胞が中央静脈に見えることを示している。
12回連続で1週間生存率を100%達成しました。生体内肝葉灌流モデルをPanらのモデルと比較した。パンと私たちのグループの間の方法論と結果の主な違いは:彼らは右の下葉を選択し、左横葉をターゲット肝葉として選択しました。
対照的に、我々は肝臓の70%の門脈灌流を維持し、彼らはラットを手術中に犠牲にしたが、我々の1週間の生存率は100%であるが、我々の新しい外科モデルの利点は:それは技術的に挑戦的であるが実現可能であり、それは100%生存率によって示されるように十分に許容される。しかし、1つの制限は、左中央分離帯が門脈の閉塞のために虚血を持続していることである。我々の技術の潜在的な用途は、薬物との灌流による生体内部分臓器治療に使用することができる;化学的切除としてインビボ部分臓器脱細胞化;生体内細胞培養系は、元生体内の肝臓工学と比較して。
