Name: mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining
Uploaded: 2012-11-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
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本研究では、CIHRチームグラント＃82946のCTP、CIHR助成＃102741、MOP、ならびにカナダの椅子＃216684とストラウス財団によってサポートされていました。 ERは、カナダのハート＆ストローク財団からフェローシップによってサポートされていました。

一過性中大脳動脈閉塞（MCAO） 1。手術の手順（ 図1） 一過性中大脳動脈閉塞（tMCAO）が2日に行われる - 3ヶ月の雄のC57BL / 6マウス（22〜28グラム）まで。このプロトコルは、IRCM生命倫理委員会の動物のケアにより承認された。手術器具はオートクレーブ（60分、15 psiで121°C）で滅菌した。それぞれの動物の間に、彼らは熱いビーズ滅菌器（15秒）を使用して滅菌した。手術テーブルと他の機器を70％エタノールを用いて消毒されています。 手術2時間前に、マウスをブプレノルフィン（0.03 mg / kgでbwip）でanalgesizedた。 図1A。 <ol><li>深くイソフルラン5％のマウスをanaesthetizeその後イソフルラン2.5％で麻酔を維持している。マウスの体温は、加熱パッドを備えた手術中に一定に保たれる。 </li><li>毛皮やSKを消毒70％エタノールまたはベタジンとインチシェービングは、脳卒中病態に影響を与える可能性があり毛髪断片リリース、microabrasionsや炎症を生成するので、我々は、マウスの毛皮を剃っていません。 </li><li>正中頸部切開を加え、穏やかに軟組織を引き離す。 </li><li>ステレオ顕微鏡（STEMI 2000、ツァイス）の下では、鈍的切開、気管を露出し、頸動脈を見つけるために筋肉を撤回するために実行されます。 </li><li>左総頸動脈（CCA）を慎重に周囲の組織から解剖され、CCAは、一時的に20ミリメートルのセグメントに5から0絹縫合糸のカットを使用して、一時的な縫合（1）で閉塞されています。細心の注意が迷走神経を害しないよう注意が必要である。 </li><li>左内総頸動脈（ICA）と外部の総頸動脈（ECA）の分岐を分ける。永久的な縫合糸（2）のように遠位になるべく、ECAの周囲に配置されており、ややタイトな別の一時的な縫合（3）から遠位ECAの上に置かれる分岐。 </li><li>出血を避けるために逆作用ピンセットを使用して、左のICA（4）クリップ。細心の注意が迷走神経を害しないよう注意が必要である。 </li><li>永久的な（2）と一時的な（3）縫合糸の間にECA（5）に小さな穴を開けます。 </li></ol>図1B。 <ol start="9"><li> 、12ミリメートル、長さ6から0シリコン被覆（9-10mm程度被覆したシリコンです）ECA（6）にモノフィラメント縫合糸（Doccol株式会社）を導入し、完全に永久的な縫合糸の遠位にECAをカットし、ICAにオクルダーを反転。縫合糸は、しっかりと出血を防ぐためにモノフィラメントの周り縛られ、逆作用ピンセットは削除されます。 </li><li>オクルダーはウィリス動脈輪におけるMCAの起点を閉塞するために導入される。 ECAとCCAの分岐を越えて9〜10ミリメートルの周りにその挿入を停止します。オクルーダは遮断され、もはや移動することはできません。ケアは、翼口蓋動脈を貫通していない注意しなければなりません。 ECAの縫合（3）TIGですhtly位置にモノフィラメントを修正するために接続されています。 </li><li> autoclip創傷閉鎖システムで皮膚を閉じます。 </li><li>皮下に生理食塩水の1ミリリットルを注入し、すべての閉塞後期間（60分）の間、赤外線加熱ランプの下にマウスを置きます。 </li></ol> 2。中大脳動脈の血流の回復 reanesthesia前に、neuroscoreは、手術の成功を評価するためにチェックすることができます。 <ol><li>前述のようにマウスを麻酔し、オートクリップを取り外します。 </li><li>少しモノフィラメント撤退や血液灌流を可能にするためのECAに縫合（3）を開きます。 </li><li>永久に失血を防ぐために、ECAの一時的な縫合糸を結紮する。モノフィラメントは再使用のために保持されます。 </li><li>血液の循環を可能にするために、CCAへの一時的な縫合（1）を取り外します。 </li><li>傷口を閉じます。マウスは、皮下に別の1ミリリットル生理食塩水を受けるべきである。 </li><li> 1時間赤外線加熱ランプ下でマウスを置きます。動物は移動性を取り戻していることを確認した後、マウスをそのケージに戻され、72時間加熱パッドとタオルの下に残しました。ケージの半分だけがマウスは自分の環境を選択できるように加熱パッド上に配置されることに注意してください。手術後の体重減少は、一般的に観察されているので、マッシュポテト食べ物は食べ奨励するペトリ皿に置かれます。 十二時間後に手術、マウスは、ブプレノルフィン（0.03 mg / kgでbwip）の別の投与を受けた。 </li></ol> 3。偽手術偽の操作は、すべての手順がオクルーダーが挿入されていないことを除いて同一である。 4。 Neuroscore 神経障害は、単に再灌流後tMCAOの成功の評価を可能にし、後で傷害の重症度の推定。前述のように神経学的欠損は、5 &lt;を採点される/ sup&gt;の、1、24、48および72時間後に再灌流に出演。拡張された6点スケールは使用されています： <ul><li> 0：正常。 </li><li> 1：軽度の尾が拾うとき、または矛盾した回転せずに動作を旋回、対側に回転させるための&lt;50％の試み。 </li><li> 2：軽度の旋回、一貫性のある反対側に回転させるための&gt; 50％の試み。 </li><li> 3：強力な一貫性と旋回即時、マウスはその鼻がほぼその尾に達して、以上の1〜2秒の回転位置を保持しています。 </li><li> 4：バレルに進んで深刻な回転、反射を歩いたり、立ち直りの損失。 </li><li> 5：昏睡状態または瀕死。 </li></ul> 5。クレジルバイオレット染色（ 図2） PBS溶液灌流後、脳を素早くイソペンタン中で凍結されており、-80℃で保存C.マウスの脳はまた、計画された免疫組織化学の研究に応じて4％パラホルムアルデヒド（PFA）で灌流することができる。冠状脳切片（17μm）のクライオスタット·カットが実行されます。すべての30の1つのセクションのうち、代表的な脳損傷を持っているために、同じスライド上で収集されます。ボリュームの定量のために、2スライドはクレシルバイオレット染色によって染色されており、画像解析システム（サイオン社、フレデリック、メリーランド州）は病変を評価するために使用されていました。傷害ボリュームは任意の単位（ピクセル）で計算され、各セクションの反対側の非病変領域の割合として表した。他のスライドは、免疫組織化学的研究のために-80℃に保たれている。あるいは、PFA固定脳はビブラトームととしてHan ら （2009）6が推奨する測定梗塞体積を用いて30から50μmでカットすることができます。

<ol>
	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li></ol>

著者らは、開示することは、競合する利害関係はありません。 この記事への生産とフリーアクセスがツァイス社が主催している

異なるストロークモデルは患者の脳卒中の影響を模倣するために開発されてきた。ストロークモデルの選択は、生物学的な問題に応じて異なります。腔内MCAOモデルは、患者における虚血性脳卒中の最も一般的なタイプのいずれかを模倣し、田村モデル4,7と比較して低侵襲、より一貫性があります。それは、神経保護、neurorepairと細胞死の解析のための本当に興味深いモデルです。腔内モデルの成功は、制御されなければならないような動物の性別、年齢、体重、体温、麻酔や手術の時のような多くの要因に依存します。オクルーダ（先端径、長さ、形状及びfexibility）の物理的な礼儀はMCAO 4の整合性を保つために重要です。ここで、我々はDoccolコーポレーション9〜10ミリメートル上にシリコンでコーティングされた12ミリメートル、長さ6から0モノフィラメントを使用しています。その長さはすべてのICAを覆ったので、このモノフィラメントの大きな利点は、くも膜下出血を減少させることであると長さは、ウィリスとPPAのサークルの前部と後部の通信動脈から来る残留血流が防止及び梗塞体積が減少する（我々の手の変動の15％）8の変動しています。 CCAの縫合も梗塞容積9の変動を減少させます。 tMCAO後の脳損傷の程度は様々な方法によって評価することができる。前述したように神経学的欠損を測定することができます。しかし、それはこのようにすることで、効率的な対策を持っていることは困難である。梗塞の範囲は、一般的にTTC染色によって実行されます。さらに最近では、磁気共鳴技術はまた、神経保護治療のために特に興味深い技術を使用しています。そのようなneurorepair、細胞死や細胞増殖、脳卒中に関与基礎細胞のメカニズムを理解するために、免疫組織化学によって異なるマーカーの研究は重要で非常に有益です。したがって、我々のprotoc脳切片標本のOLは、これらの分析を可能にするという大きな利点を持っており、使用したマウスの数を最小限に抑えます。また、Tureyen ら 10クレシルバイオレット染色とTTCとの間に良好な相関関係があることが報告されています。

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt;説明</strong</td&gt;<td<strong&gt;会社概要</strong</td&gt;<td<strong&gt;カタログ番号</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ステレオ顕微鏡</td&gt;<td&gt;ツァイス</td&gt;<td&gt; STEMI 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ファイバーライト高輝度イルミ</td&gt;<td&gt;ドーラン - ジェナー工業株式会社</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdイソフルラン用&gt;麻酔システム</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;イソフルラン</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;暖房ブランケット</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;赤外線加熱ランプ</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;超微細なピンセット、スタイル5</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vannasはさみ3ミリメートルのCutting Edge、ストレート</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 72932から01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;スタイルLA-1およびMPF-1すべての滑らかなブレード</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ネガティブな作用ピンセット、スタイルKOPINC 5</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdストレート&gt;解剖ハサミ5 1/2 &quot;</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Autoclipスターターセット</td&gt;<td&gt;ハーバード装置</td&gt;<td&gt; 34から0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD Autoclipは閉会ブローネを巻いた。、9mmの長い、100個</td&gt;<td&gt;フィッシャー</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5から0縫合</td&gt;<td&gt;ハーバード装置</td&gt;<td&gt; 517763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;縫合材料のPDS IIのモノフィラメントバイオレット、5-0、RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12ミリメートル、長さ6から0、シリコンコーティングされたモノフィラメント縫合糸</td&gt;<td&gt; Doccol株式会社</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Seringes 1ミリリットル</td&gt;<td&gt;フィッシャー</td&gt;<td&gt; 14-823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;針26G1 / 2</td&gt;<td&gt;フィッシャー</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt;マウス</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

脳卒中は死亡率と世界の障害の主要な原因の3番目の原因である。すべてのストロークの約80％、虚血性脳卒中を占めています。しかし、血栓溶解組織プラスミノーゲンアクチベーター（tPA）が存在する急性虚血性脳卒中の唯一の治療法です。これは、研究者は、様々な種のいくつかの虚血性脳梗塞モデルを開発するために導いた。齧歯類モデルの2つの主要なタイプが開発されている：全脳虚血または限局性脳虚血のモデル。患者における虚血性脳卒中を模倣するために、誰に約80％の血栓または塞栓性脳卒中が中大脳動脈（MCA）の領土で発生し、管腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルでは、脳卒中の研究に大いに関係があります。このモデルは第一小泉らがラットで開発された、1986年1インチそのため、マウスにおける遺伝子操作のしやすさのために、これらのモデルは、この種の2-3に開発されてきた。 このような先端径、長さ、形状、柔軟性などオクルダーの物性は梗塞容積4の再現のために重要であることをコンテンツ&quot;&gt;ここで、我々はC57/BL6マウスにおける過渡MCA閉塞手順を紹介します。これまでの研究で報告されています。ここで、商用シリコンコーティングされたモノフィラメント（Doccolコーポレーション）が使用されている。もう一つの大きな利点は、このモノフィラメントは、くも膜下出血を誘発する危険性を減少させるということです。ツァイスステレオ顕微鏡STEMI 2000を使用し、シリコンコーティングされたモノフィラメントは内頚動脈に導入されました（ICA）を外頸動脈（ECA）のカット経由モノフィラメントは、MCAのベースを閉塞するまで血流は血栓塞栓症における血栓の溶解後の血流の回復を模倣するためにモノフィラメントを除去して1時間後に復元されました人間。脳梗塞の範囲は、神経学的スコアにより、梗塞体積の測定によって最初に評価することができる。虚血マウスは、このように異なる後再灌流時々彼らの神経学的スコアを分析した。 2,3,5 - トリフェニルテトラゾリウムクロライド（TTC）で染色し、梗塞体積を評価するために通常行われた。それは免疫組織化学によって多くの重要なマーカーをテストする機会を提供していますのでここで、我々はクレシルバイオレット染色を使用していました。このビデオでは、MCAO手順を報告し、神経学的スコアとクレシルバイオレット染色による梗塞体積の評価。

neuroscore評価がtMCAO脳卒中後の成功を確認しtMCAO後再灌流の効率を決定する。我々の手では、すべてのマウスは、少なくとも軽度の一貫カーリング（neuroscore 2）、神経障害、最大72時間まで、一般的に安定している提示腔内手続きを行った。ほとんどのマウスは、軽度の一貫カーリング（neuroscore 2）を示す。カーリングの不在を示すマウスは研究から除外されます。しかし、neuroscoreの評価は、私たちは負傷した海馬とそのまま海馬とのそれらを持つマウスを区別することはできません。 死亡例は、くも膜下出血が発生しなかったことを示唆し、手術日の間に観察されなかった。くも膜下出血は、マウスで同定されている場合、このいずれかを系統的に分析から除外されます。自宅に準備モノフィラメントよりスムーズですDoccol株式会社からシリコンコーティングされたモノフィラメントの使用はの成功を増加させるtMCAOとくも膜下出血を減らすことができます。 24時間と72時間の間での死亡率は、一般的に咬合の60分間報告したように、このモデルでは14％です。観察された死亡率は、おそらくこのマウス系統の大梗塞体積が原因です。強い病変の再現性もその効果（s）は、モデルのばらつきによって隠される可能性が神経保護分子を勉強することは非常に興味深いものである（標準偏差が15％）が観察されている。 tMCAO後の脳損傷の程度を評価するために、我々は、関連するマーカー6をテストするための材料の多くを持っているために、むしろTTCよりクレシルバイオレット染色（ 図2）を使用することにしました。病変の程度は比較的一貫している。しかし、我々はいくつかのマウスでは、海馬が（マウスの約30％）負傷したことに気づいた。これは、クレシルバイオレット染色は後1週間まで適用可能であることは興味深いことです。文献では、脳梗塞の割合が1から変化お互いに勉強しています。それは、マウス系統、麻酔、脳切片の厚さ、使用モノフィラメント、または6、7を使用し染色の選択に依存します。 <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="図1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> 図1。シリコン被覆管腔内モノフィラメントを用いて中大脳動脈の閉塞のスキーム。マウス脳とシリコンコーティングされたモノフィラメントの導入を準備するために連続した縫合糸およびクリップを示す脳動脈の簡略化した方式を採用しています。B.は、ウィリス動脈輪を介してモノフィラメントの位置が表されます。ますが、BA、脳底動脈、、CCA、総頸動脈、C.ウィリス、ウィリスのサークル、モノフィラメントは、MCA、ACA、前大脳動脈の根元を閉塞するECA を介してのICAに導入され、ECA、外頸動脈アルテRY、ICA、内頚動脈、MCA、中大脳動脈、PCAは、後交通動脈、PPAは、翼口蓋動脈。 <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="図2" /> 図2。 72時間後の再灌流後クレシルバイオレットで染色したマウスの脳の代表的な冠状断面。梗塞領域（主に線条体、皮質と隣接する脳領域）（クレシルバイオレットで染色さ）白で表示されます。傷害ボリューム（白い部分、右半球）が区切りだったと反対側の非病変領域（左半球）の割合として表される。

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Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

マウスにおける腔内中大脳閉塞モデルは、本明細書に提示されます。脳梗塞の程度は、神経学的スコアとクレジルバイオレット染色は、TTCに代わる染色、並列多くの関心マーカーでテストする大きな利点を提供することによって評価されます。

腔内MCAOのマウスモデル：クレシルバイオレット染色による脳梗塞の評価

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

63.3K ビュー.  Clinical Research Institute of Montreal. マウスにおける腔内中大脳閉塞モデルは、本明細書に提示されます。脳梗塞の程度は、神経学的スコアとクレジルバイオレット染色は、TTCに代わる染色、並列多くの関心マーカーでテストする大きな利点を提供することによって評価されます。

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Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

ラット中大脳動脈の血管縫合閉塞による局所脳虚血モデル

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

神経科学

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

医学

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

マウスにおけるレーザードップラー流量計の指針と虚血性脳卒中に対する腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデル

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

腔内中大脳動脈閉塞のラット脳卒中モデルにおける脳血流モニタリングのための最適化されたシステム

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Stereological and Flow Cytometry Characterization of Leukocyte Subpopulations in Models of Transient or Permanent Cerebral Ischemia

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after stroke. These myeloid cell subpopulations can display different phenotypes and functions and need to be distinguished and characterized to study their regulation and contribution to tissue damage. This protocol provides two different methodologies for brain immune cell characterization: a precise stereological approach and a flow cytometric analysis. The stereological approach is based on the optical fractionator method, which calculates the total number of cells in an area of interest (infarcted brain) estimated by a systematic random sampling. The second characterization approach provides a simple way to isolate brain leukocyte suspensions and to characterize them by flow cytometry, allowing for the characterization of microglia, infiltrated monocytes and neutrophils of the ischemic tissue. In addition, it also details a cerebral ischemia model in mice that exclusively affects brain cortex, generating highly reproducible infarcts with a low rate of mortality, and the procedure for histological brain processing to characterize infarct volume by the Cavalieri method.

Brain myeloid cells characterization following stroke can be performed by stereology using the optical fractionator method, or by a flow cytometric analysis of brain leukocytes suspensions. Both are useful techniques to perform an accurate phenotypical distinction of the main myeloid cell subsets found in the ischemic brain.

一時的または恒久的な脳虚血モデルにおける白血球亜集団の立体解析とフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options are limited to a small proportion of stroke patients within the first hours after stroke. Novel therapeutic strategies are being extensively investigated, especially to prolong the therapeutic time window. These current investigations include the study of important pathophysiological pathways after stroke, such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Over the last decade, there has been increasing concern about the poor reproducibility of experimental results and scientific findings among independent research groups. To overcome the so-called &#8220;replication crisis&#8221;, detailed standardized models for all procedures are urgently needed. As an effort within the &#8220;ImmunoStroke&#8221; research consortium (https://immunostroke.de/), a standardized mouse model of transient middle cerebral artery occlusion (MCAo) is proposed. This model allows the complete restoration of the blood flow upon removal of the filament, simulating the therapeutic or spontaneous clot lysis that occurs in a large proportion of human strokes. The surgical procedure of this &#8220;filament&#8221; stroke model and tools for its functional analysis are demonstrated in the accompanying video.

Different models of middle cerebral artery occlusion (MCAo) are used in experimental stroke research. Here, an experimental stroke model of transient MCAo via the external carotid artery (ECA) is described, which aims to mimic human stroke, in which the cerebrovascular thrombus is removed due to spontaneous clot lysis or therapy.

マウスにおける脳卒中のモデリング:外頸動脈を介した過渡中脳動脈閉塞

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

経頭蓋中大脳動脈閉塞マウスモデルの確立

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. The filament MCAO model typically exhibits a massive cerebral infarction in C57Bl/6 mice that sometimes includes brain tissue in the territory supplied by the posterior cerebral artery, which is largely due to a high incidence of posterior communicating artery atresia. This phenomenon is considered a major contributor to the high mortality rate observed in C57Bl/6 mice during long-term stroke recovery after filament MCAO. Thus, many chronic stroke studies exploit distal MCAO models. However, these models usually produce infarction only in the cortex area, and consequently, the assessment of post-stroke neurologic deficits could be a challenge. This study has established a modified transcranial MCAO model in which the MCA at the trunk is partially occluded either permanently or transiently via a small cranial window. Since the occlusion location is relatively proximal to the origin of the MCA, this model generates brain damage in both the cortex and striatum. Extensive characterization of this model has demonstrated an excellent long-term survival rate, even in aged mice, as well as readily detectable neurologic deficits. Therefore, the MCAO mouse model described here represents a valuable tool for experimental stroke research.

著者スポットライト:脳卒中研究における革新的な技術と将来の方向性 

This protocol demonstrates a unique mouse stroke model with a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This model allows preclinical stroke researchers to extend the ischemia duration, use aged mice, and assess long-term functional outcomes.

高齢マウスの脳卒中転帰を研究するための修正経頭蓋中大脳動脈閉塞モデル

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

腔内MCAOのマウスモデル：クレシルバイオレット染色による脳梗塞の評価

要約

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ラット中大脳動脈の血管縫合閉塞による局所脳虚血モデル

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

マウスにおけるレーザードップラー流量計の指針と虚血性脳卒中に対する腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデル

腔内中大脳動脈閉塞のラット脳卒中モデルにおける脳血流モニタリングのための最適化されたシステム

マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

一時的または恒久的な脳虚血モデルにおける白血球亜集団の立体解析とフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

マウスにおける脳卒中のモデリング:外頸動脈を介した過渡中脳動脈閉塞

高齢マウスの脳卒中転帰を研究するための修正経頭蓋中大脳動脈閉塞モデル

高齢マウスの脳卒中転帰を研究するための修正経頭蓋中大脳動脈閉塞モデル