Name: performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
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我々は、FNABの手順のデモをグラフ化する映像の間に援助のために氏ボニーPhetteplace、RNに感謝。

はじめ全身性アミロイドーシスは、総称してアミロイドと呼ばれる様々なタンパク質の細胞外沈着を参照している非常に可変性疾患です。 βプリーツ構成でこれらのアミロイド線維の沈着が関与する臓器に応じて様々な臨床症状につながる。このような心臓、肝臓、および/または腎臓などの重要臓器の関与がある場合に全身性アミロイドーシスの臨床的に最も関連する症状が記載されています。歴史的に、これらの浸潤臓器は、アミロイドの存在を実証するために生検される。これらの適度侵襲的処置は出血を含む重大なリスクを運んだ。脂肪パッドの吸引は、以来、全身性アミロイドーシス1のアミロイドの検出のための信頼性と非侵襲的方法を提供することが示されている。この手順では、小さな血管の壁2に乏しいアミロイドの沈着を評価するための線維脂肪の組織を取得するために局所麻酔下で前腹壁の皮下脂肪の脂肪吸引に本質的に同等です。 組織におけるアミロイドの同定のための最も頻繁に使用方法は、コンゴレッド染色した切片は、偏光顕微鏡3で視覚化するときに見られる特徴的な青リンゴ色の複屈折パターンのまま。脂肪パッドの吸引が行われるときは、コンゴレッド染色は、直接塗抹スライドまたは吸引脂肪組織の細胞ブロック標本のどちらかで行うことができます。しかし、アミロイドーシスの初期段階で患者が大幅に4,5コンゴ赤染色細胞のブロックのセクションの感度を減少させるわずかなアミロイド沈着を、持っている。電子顕微鏡による脂肪パッドの吸引の超微細構造評価は、より良い再現性と感度の向上4とを有している。したがって、セルブロックの両方を調製するため、電子顕微鏡2を実行するためのすべての脂肪パッドの吸引を提出することをお勧めします。 脂肪パッドの吸引は、比較的低コストおよび全身性アミロイドーシスの診断に組織を得るための非侵襲的方法である。この記事では、電子顕微鏡によるコンゴレッド染色と微細構造評価の両方に検体を提出するサンプルの処理についての詳細と一緒に脂肪パッドの吸引の手順を説明します。このビデオでは、我々は最適な診断材料を取得するために、この再現性と簡単な手順を示しています。 1。前歯部脂肪パッドのFNAの実行ローカルエリアのA.の麻酔（図1＆2） <ol><li>アルコール綿棒または特定の機関によって好ま皮膚洗浄剤を使用して、正中線と臍下（図1）の外側腹部の下腹部の領域で皮膚を洗浄。 </li><li>としてマーキングペンで図1に示す2 × 2インチ約菱形形状の領域をマークします。 </li><li> 1％の吸引約10 mLを18G針でリドカイン。 25G 1を取り付けます½シリンジにインチ針を。液体を分配しても気泡が存在しないされるまでプランジャーを押しながら直立シリンジをタップして、任意の閉じ込められた空気を削除します。 </li><li>図2に示すように、既にマーク菱形領域の境界に沿って麻酔する。ちょうどポイントで皮膚の下に25G針を挿入して起動し、慎重にX.を使用すると、容器内にないことを保証するために注射器のプランジャーを後方に引いて指すように、皮下針を押してください。その後徐々に針は、針がポイント（図2A3）で皮膚から出てくるさせることなく参照するように撤退しながらリドカインの2.5mLの（10 mLシリンジのリドカインの¼約）まで潜入するためにプランジャーを押してください。針でも、皮膚の下に点Y（図2A4）に向かって方向を変更するとポイントY（図2B1）に皮下針を押してください。以前と同じようにゆっくりとポイントを介して針を引き出しながら、針が血管内にないことを確認し、リドカインの約2.5 mLを分注する（2B4〜図2B3）。 YにXとB（2D4〜図2C1）に点Bから点Bと調剤リドカイン皮下から始まる同様の手順を繰り返します。呵責からの出血を防ぎ、無菌ゲージピースの会社のアプリケーションによるB。 </li><li>これで、面積は軽く、隣接する無麻酔皮膚と比較することによって、先端/綿のガーゼ片のコーナーで麻酔菱形の中で皮膚に触れることによって麻酔であることを確認することができます。 </li></ol> B.は、脂肪パッドの吸引（図3）の実行 （前の脂肪パッドの吸引のパフォーマンスへの局所麻酔の適用は、地域や個人の好みに応じて、バイパスされる可能性があります。前方脂肪パッドの吸引のための適切に行わFNABの手順が1つの刺し傷で完了することができます。しかし、個々の患者の痛みのしきい値に応じて、皮下脂肪組織に前後に18G針を操縦するのは比較的distresです歌う。ここで説明する麻酔の方法は、25G針で2つだけの呵責に効果を発揮し、手順に耐性が向上して痛みをaverts。） <ol><li> 10mLのシリンジに18G 1 ½インチの針を組み立てます。適切なアプリケーションと真空のリリースのための注射器のグリップ（&quot;FNABグリップ/銃&quot;）で注射針を装着してください。 </li><li>クレンジングと麻酔菱形の領域（図3a）内に皮下脂肪に針の先端を挿入します。 </li><li>完全真空（図3b）を生成するために皮下組織に挿入された針と注射器のプランジャーを引っ込める。 </li><li>真空を維持し、皮下脂肪（3iの〜図3C）への様々な方向に前後に針を操縦。各ストロークは、針が皮膚から出てくるさせることなく、選択された針の長さをできるだけ長くしてください。最大のサンプリングは、各ストローク方向（図3iを）変えることによって実現される。漿膜への接線と腹腔のパンクチャを避けるために皮膚表面に平行な針の方向を維持することが重要です。 </li><li>線維脂肪の組織は、注射器内に蓄積する。一度十分な線維脂肪の組織の断片（フラグメントを豊富に含む血液の混合試料の最大1​​ mL）を取得され、完全に真空を解放し、針（3K図）を取り外します。 </li><li>患者またはアシスタントが血液の溢出を防止するためのガーゼのパッドを持つプロシージャの領域でしっかり圧力を適用しています。 </li></ol> 2。検体処理<ol><li>電子顕微鏡のためのグルタルアルデヒド溶液（図4B）で線維脂肪の組織の少なくとも5から6の断片を配置。 </li><li>制度的なプロトコルに応じて、線維脂肪の組織の断片のいくつかの塗抹標本は、2つのスライド（図4A）との間で、それらを拡散させることによって調製することができる。 </li><li>残りの材料は、シリンジ内の血栓（これが凝固時間に応じて、5〜7分かかる場合があります）（図4C）に許可されています。 </li><li>凝固した線維脂肪の組織の材料が注射器とフリーフローティング（図4C2）の壁から外れているように注射器で10％ホルマリンを吸引除去する。注射器（図4C3）からプランジャーを取り外し、ノズルの端（図4C4）反対側のシリンジの開放端から10％ホルマリン容器にクロテッド線維脂肪の組織を移す。 </li><li>適切な容器にラベルを付け、電子顕微鏡のためのグルタルアルデヒドを提出し、H＆Eセクションとコンゴレッドのためのホルマリンは、偏光顕微鏡下で評価するために染色。塗抹標本が準備されている場合、それらは個々の実験室のプロトコルに従って処理される可能性があります。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="図1" /> 図1。前脂肪パッドのFNABのために麻酔になるエリア。 <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="図2" /> 図2。ローカルエリアの麻酔。 <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="図3" /> 図3。前脂肪パッドのFNABを実行。 <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="図4" /> 図4。前脂肪パッドの処理は、アミロイド沈着を検出するための実験室に提出する吸引。 3。代表的な結果<img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="図5" /> 図5。線維脂肪の組織フラグメントの小血管の壁にアミロイド。線維脂肪の組織はホルマリン加工、パラフィンコンゴレッドで染色し、埋め込 ​​み、および光学顕微鏡を偏光により調べた。小血管の壁にアミロイドは、アップルグリーン複屈折（白い矢印）を示しています。 <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="図6" /> 図6。アミロイドーシスを欠いている組織は。青リンゴ色の複屈折は、アミロイドーシスのない別の患者の組織中に存在しない。コラーゲン線維の青の複屈折は（白矢印）、ほぼすべての標本で、通常は存在する。 <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="図7" /> 図7。血管壁にアミロイドと一致して線維。血管壁にアミロイドが形成されたストレート、非分岐、ランダムに散らばって80〜10 nmの直径の線維の電子顕微鏡写真。

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アミロイドーシスの診断は、通常、腎臓、肝臓、および/または心臓などの影響を受ける臓器の組織生検によって達成される。このアプローチは、高い診断率を持っている、しかし、侵襲的であり、出血2を含む合併症に関連付けることができます。直腸、歯肉、および骨髄生検は、1960年代6,7,8で、比較的少ない侵襲的なアプローチとして、診断のために好まれた。腹部の脂肪パッドの吸引は、全身性アミロイドーシス1の組織診断のための安全、低侵襲、シンプル、そして安価な手順として、1973年に報告された。しかし、取得された検体の処理に手順とアプローチの詳細はコヒーレント報告されていません。このビデオと記事は、ステップでの手順のステップを説明します。 脂肪パッドの吸引でアミロイドを検出するためのアプローチは、同様に、また、1,5,6,7,8を 、様々なアプローチを比較し、評価するいくつかの研究でも標準化されていません。コンゴレッド染色で前方の脂肪パッドの吸引の評価が特に乏しいのアミロイド沈着5のアミロイドーシスの早期の場合には下の観察者間の再現性と影響を受けにくいです。免疫組織化学では、ホルマリン固定パラフィン包埋細胞のブロックのセクションで行われ、細胞診塗抹標本上で実行コンゴ赤色蛍光は、診断感度9,10を改善することが報告されている。電子顕微鏡では脂肪体吸引4,5の線維脂肪の組織における微小血管の壁にわずかアミロイド線維の検出と同定を向上させます。この情報に基づいて、この記事では、セルブロックを（診断リンゴ緑色の複屈折偏光顕微鏡下でコンゴレッド染色したセルブロックセクションの評価のためとも示されている免疫組織化学としての）と電子顕微鏡を準備する試料の処理について説明します。しかしながら、アミロイドのための試料の評価のために選択されたアプローチによって、それは細胞診塗抹標本作製、セルブロックの準備、および電子顕微鏡のための処理を施すことができる。いくつかの研究室では、吸引線維脂肪の組織の断片から調製し、蛍光10を研究するためにコンゴレッドで染色した塗抹標本上でテストを実行。 一般的に遅くアミロイドーシスでは、コンゴレッド偏光顕微鏡と光学顕微鏡では十分な場合もありますが、セルブロックのセクションの偏光顕微鏡による疾患コンゴレッド染色の初期段階で脂肪パッド吸引4,5,11に対して感応性が低く、信頼性です。 。チオフラビンTを含むその他の特別な汚れは、同様の制限事項を考慮に入れて使用することができます。アミロイドを検出する他のアプローチは、コンゴレッド偏光顕微鏡と蛍光10のアミロイドのための吸引塗抹標本の評価が含まれています。我々の経験ではこの方法の方が再現可能です。電子顕微鏡によるアミロイドのための脂肪パッドの血管の評価は、これらの制限を4,11を克服しています 。アミロイドのさらなる特徴は、免疫電子顕微鏡12で報告されているが、これらのメソッドは非三次医療の設定で広く利用できない場合があります。 吸引の手順を実行するために使用する針は、（例えば、- 14G）、（21 - 25G）ファイン中間（18 - 20G）、および大規模な11にそれらのゲージサイズに応じて分類されることがあります。前方脂肪パッドの願望は、中間（18〜20G）から罰金（21〜22G）2,10まで可変ゲージを使用して実行することが報告されている。腫瘤病変のほとんどは、セルのブロックに対して追加のサンプルを取得するために、広いゲージの針（例えば18Gなど）と追加のパスと一緒に良い細胞診塗抹標本を得るために細かいゲージの針（例えば25Gなど）で吸引されています。 前脂肪パッドの吸引時には、凝集線維脂肪の組織は、細かい針でも吸引していません。セルブロックの準備と電子顕微鏡では脂肪吸引の線維脂肪の組織フラグメントの小血管壁の評価のために重要である。広いゲージの針（例えば18Gなど）の診断に十分な材料2,10を得るために推奨されています。手順は、従来のFNABに匹敵するように、脂肪パッドの吸引は、広いゲージの針が5それを実行するために使用されていてもFNABと呼ばれています。

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Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

アルコール綿棒、ガーゼパッド、マーキングペン、10 mLの注射器× 2、1％リドカイン（局所麻酔薬、場合リドカインを単独で使用され、それは点眼後、最初の灼熱感を引き起こします。この1％の1:1混合物を使用することによって防ぐことができるリドカインと1％ナトリウム - ビ - 炭酸塩）、18ゲージ（G）1 ½インチの針× 2（FNABを実行するための）、25G 1 ½インチ針（局所麻​​酔薬を注入するため）、FNAのシリンジホルダー（&quot;ガン&quot;）、包帯、グルタルアルデヒドのバイアル（電子顕微鏡用）、および10％ホルマリンの容器を生検。

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

歴史的に、心臓、肝臓、および腎臓の生検はアミロイドーシスにおけるアミロイド沈着を証明するために行われた。この疾患の臨床症状は非常に可変と非特異的であるため、これらの生検のリスクは診断率のために余りに大きいです。このような皮膚や歯肉などの低生検のリスクを持っている他のサイトでは、、また、比較的侵襲的で高価です。さらに、これらの生検は常に診断を確立するために十分なアミロイド沈着を持っていない可能性があります。脂肪パッドの吸引は、低コストと最小限の罹患率との良好な臨床的相関関係を実証してきました。しかし、この手順を実行したり、変数やnonreproducible結果につながる吸引標本を、処理するための標準プロトコルはありません。組織でアミロイドを検出するための最も頻繁に利用さモダリティは、偏光顕微鏡を使用してコンゴレッド染色した切片上に青リンゴ色の複屈折である。この手法は、吸引材料のセルブロックの準備が必要です。残念なことに、アミロイドーシスの初期段階で受診した患者は大幅に脂肪パッドの吸引のコンゴレッド染色細胞のブロックのセクションの感度を減少させるアミロイドの最小限の量を持っている。そのため、電子顕微鏡による脂肪パッドの吸引の超微細構造の評価は、アミロイドの検出のために感度の向上を考えると、利用されるべきである。この記事では、コンゴレッドのセルブロックのセクションの染色および超微細構造識別の​​ための電子顕微鏡の両方を利用してアミロイドの検出のための前脂肪パッドの吸引を行うためのシンプルで再現性の手順を示しています。

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Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

脂肪パッドの吸引は、全身性アミロイドーシスの診断にアミロイドを検出するためには、他の方法に比べて優先、低侵襲、低コストのアプローチです。このビデオの記事では、最適な診断結果のための検体の適切な処理によって脂肪パッドの吸引を行うための手続きの概要を示しています。

アミロイドのための前方脂肪パッドのFNAの実行と処理

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

55.0K ビュー.  Medical College of Wisconsin. 脂肪パッドの吸引は、全身性アミロイドーシスの診断にアミロイドを検出するためには、他の方法に比べて優先、低侵襲、低コストのアプローチです。このビデオの記事では、最適な診断結果のための検体の適切な処理によって脂肪パッドの吸引を行うための手続きの概要を示しています。

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Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical probe that targets the enzyme&#39;s active sites. A reporter tag introduced into the probe allows for the detection of the labeled enzyme by in-gel fluorescence scanning, protein blot, fluorescence microscopy, or liquid chromatography-mass spectrometry. Here, we describe the preparation and use of the compound ARN14686, a click chemistry activity-based probe (CC-ABP) that selectively recognizes the enzyme N-acylethanolamine acid amidase (NAAA). NAAA is a cysteine hydrolase that promotes inflammation by deactivating endogenous peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-alpha agonists such as palmitoylethanolamide (PEA) and oleoylethanolamide (OEA). NAAA is synthesized as an inactive full-length proenzyme, which is activated by autoproteolysis in the acidic pH of the lysosome. Localization studies have shown that NAAA is predominantly expressed in macrophages and other monocyte-derived cells, as well as in B-lymphocytes. We provide examples of how ARN14686 can be used to detect and quantify active NAAA ex vivo in rodent tissues by protein blot and fluorescence microscopy.

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Here, we describe the preparation and use of an activity-based probe (ARN14686, undec-10-ynyl-N-[(3S)-2-oxoazetidin-3-yl]carbamate) that allows for the detection and quantification of the active form of the proinflammatory enzyme N-acylethanolamine acid amidase (NAAA), both in vitro and ex vivo.

調製と<em&gt;インビボ</em&gt;アクティビティベースのプローブの使用のために<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine酸アミダーゼ

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

生化学

Imaging Amyloid Tissues Stained with Luminescent Conjugated Oligothiophenes by Hyperspectral Confocal Microscopy and Fluorescence Lifetime Imaging

Proteins that deposit as amyloid in tissues throughout the body can be the cause or consequence of a large number of diseases. Among these we find neurodegenerative diseases such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s disease afflicting primarily the central nervous system, and systemic amyloidosis where serum amyloid A, transthyretin and IgG light chains deposit as amyloid in liver, carpal tunnel, spleen, kidney, heart, and other peripheral tissues. Amyloid has been known and studied for more than a century, often using amyloid specific dyes such as Congo red and Thioflavin T (ThT) or Thioflavin (ThS). In this paper, we present heptamer-formyl thiophene acetic acid (hFTAA) as an example of recently developed complements to these dyes called luminescent conjugated oligothiophenes (LCOs). hFTAA is easy to use and is compatible with co-staining in immunofluorescence or with other cellular markers. Extensive research has proven that hFTAA detects a wider range of disease associated protein aggregates than conventional amyloid dyes. In addition, hFTAA can also be applied for optical assignment of distinct aggregated morphotypes to allow studies of amyloid fibril polymorphism. While the imaging methodology applied is optional, we here demonstrate hyperspectral imaging (HIS), laser scanning confocal microscopy and fluorescence lifetime imaging (FLIM). These examples show some of the imaging techniques where LCOs can be used as tools to gain more detailed knowledge of the formation and structural properties of amyloids. An important limitation to the technique is, as for all conventional optical microscopy techniques, the requirement for microscopic size of aggregates to allow detection. Furthermore, the aggregate should comprise a repetitive &#946;-sheet structure to allow for hFTAA binding. Excessive fixation and/or epitope exposure that modify the aggregate structure or conformation can render poor hFTAA binding and hence pose limitations to accurate imaging.

Amyloid deposition is a hallmark of different diseases and afflicts many different organs. This paper describes the application of luminescent conjugated oligothiophene fluorescence staining in combination with fluorescence microscopy techniques. This staining method represents a powerful tool for detection and exploration of protein aggregates in both clinical and scientific setups.

アミロイド組織イメージング ステンド グラス ハイパー スペクトルで発光共役オリゴチオフェンと共焦点顕微鏡と蛍光寿命イメージング

Proteins that deposit as amyloid in tissues throughout the body can be the cause or consequence of a large number of diseases. Among these we find ...

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks of Alzheimer's disease. The central component of neuritic plaques is a small filamentous protein called amyloid &beta; protein (A&beta;)1, which is derived from sequential proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &beta;-secretase and &gamma;-secretase. The amyloid hypothesis entails that A&gamma;-containing plaques as the underlying toxic mechanism in AD pathology2. The postmortem analysis of the presence of neuritic plaque confirms the diagnosis of AD. To further our understanding of A&gamma; neurobiology in AD pathogenesis, various mouse strains expressing AD-related mutations in the human APP genes were generated. Depending on the severity of the disease, these mice will develop neuritic plaques at different ages. These mice serve as invaluable tools for studying the pathogenesis and drug development that could affect the APP processing pathway and neuritic plaque formation. In this protocol, we employ an immunohistochemical method for specific detection of neuritic plaques in AD model mice. We will specifically discuss the preparation from extracting the half brain, paraformaldehyde fixation, cryosectioning, and two methods to detect neurotic plaques in AD transgenic mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thiofalvin S staining method.

One of the pathological characteristics of AD is the formation of Amyloid &#x03B2; protein positive neuritic plaques. In this protocol we describe two methods to detect neuritic plaques in transgenic AD model mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thioflavin S staining method.

アルツハイマー病のマウスモデルにおける神経突起斑の検出

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

神経科学

A Guide to Examining Intramuscular Fat Formation and its Cellular Origin in Skeletal Muscle

Fibro-adipogenic progenitors (FAPs) are mesenchymal stromal cells that play a crucial role during skeletal muscle homeostasis and regeneration. FAPs build and maintain the extracellular matrix that acts as a molecular myofiber scaffold. In addition, FAPs are indispensable for myofiber regeneration as they secrete a multitude of beneficial factors sensed by the muscle stem cells (MuSCs). In diseased states, however, FAPs are the cellular origin of intramuscular fat and fibrotic scar tissue. This fatty fibrosis is a hallmark of sarcopenia and neuromuscular diseases, such as Duchenne Muscular Dystrophy. One significant barrier in determining why and how FAPs differentiate into intramuscular fat is effective preservation and subsequent visualization of adipocytes, especially in frozen tissue sections. Conventional methods of skeletal muscle tissue processing, such as snap-freezing, do not properly preserve the morphology of individual adipocytes, thereby preventing accurate visualization and quantification. To overcome this hurdle, a rigorous protocol was developed that preserves adipocyte morphology in skeletal muscle sections allowing visualization, imaging, and quantification of intramuscular fat. The protocol also outlines how to process a portion of muscle tissue for RT-qPCR, enabling users to confirm observed changes in fat formation by viewing differences in the expression of adipogenic genes. Additionally, it can be adapted to visualize adipocytes by whole-mount immunofluorescence of muscle samples. Finally, this protocol outlines how to perform genetic lineage tracing of Pdgfr&#945;-expressing FAPs to study the adipogenic conversion of FAPs. This protocol consistently yields high-resolution and morphologically accurate immunofluorescent images of adipocytes, along with confirmation by RT-qPCR, allowing for robust, rigorous, and reproducible visualization and quantification of intramuscular fat. Together, the analysis pipeline described here is the first step to improving our understanding of how FAPs differentiate into intramuscular fat, and provides a framework to validate novel interventions to prevent fat formation.

The replacement of healthy muscle tissue with intramuscular fat is a prominent feature of human diseases and conditions. This protocol outlines how to visualize, image, and quantify intramuscular fat, allowing the rigorous study of the mechanisms underlying intramuscular fat formation.

骨格筋における筋肉内脂肪形成とその細胞起源を調べるためのガイド

Fibro-adipogenic progenitors (FAPs) are mesenchymal stromal cells that play a crucial role during skeletal muscle homeostasis and regeneration. FAPs build ...

発生生物学

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular plasticity or damage occurring overtime and in relation to neuronal activity or blood flow. In vivo two-photon microscopy allows the study of the structural and functional plasticity of large cellular units in the living brain. In particular, the thinned-skull window preparation allows the visualization of cortical regions of interest (ROI) without inducing significant brain inflammation. Repetitive imaging sessions of cortical ROI are feasible, providing the characterization of disease hallmarks over time during the progression of numerous CNS diseases. This technique accessing the pial structures within 250 &#956;m of the brain relies on the detection of fluorescent probes encoded by genetic cellular markers and/or vital dyes. The latter (e.g., fluorescent dextrans) are used to map the luminal compartment of cerebrovascular structures. Germane to the protocol described herein is the use of an in vivo marker of amyloid deposits, Methoxy-O4, to assess Alzheimer&#39;s disease (AD) progression. We also describe the post-acquisition image processing used to track vascular changes and amyloid depositions. While focusing presently on a model of AD, the described protocol is relevant to other CNS disorders where pathological cerebrovascular changes occur.

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

This manuscript describes a procedure to track the remodeling of the cerebrovasculature during amyloid plaque accumulation in vivo using longitudinal two-photon microscopy. A thinned-skull preparation enables the visualization of fluorescent dyes to assess the progression of cerebrovascular damage in a mouse model of Alzheimer&#39;s disease.

縦<em&gt;インビボ</em&gt;脳血管系のイメージング：中枢神経系疾患との関連

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

医学

Quantitative 3D In Silico Modeling (q3DISM) of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible for phagocytosis and clearance of debris and detritus. These cells include CNS-resident macrophages known as microglia, and mononuclear phagocytes infiltrating from the periphery. Light microscopy has generally been used to visualize phagocytosis in rodent or human brain specimens. However, qualitative methods have not provided definitive evidence of in vivo phagocytosis. Here, we describe quantitative 3D in silico modeling (q3DISM), a robust method allowing for true 3D quantitation of amyloid-&#946; (A&#946;) phagocytosis by mononuclear phagocytes in rodent Alzheimer&#39;s Disease (AD) models. The method involves fluorescently visualizing A&#946; encapsulated within phagolysosomes in rodent brain sections. Large z-dimensional confocal datasets are then 3D reconstructed for quantitation of A&#946; spatially colocalized within the phagolysosome. We demonstrate the successful application of q3DISM to mouse and rat brains, but this methodology can be extended to virtually any phagocytic event in any tissue.

Quantitative 3D In Silico Modeling q3DISM of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

We developed a methodology for quantitative 3D in silico modeling (q3DISM) of cerebral amyloid-&#946; (A&#946;) phagocytosis by mononuclear phagocytes in rodent models of Alzheimer&#39;s disease. This method can be generalized for the quantitation of virtually any phagocytic event in vivo.

定量的3D<em&gt;インシリコ</emアルツハイマー病の齧歯類モデルにおける脳アミロイドベータ食作用の&gt;モデリング（q3DISM）

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible ...

Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into extracellular plaques of the brain. The A&#946; peptides, composed of 40 amino acids, are generated from amyloid precursor proteins (APP) by &#946;- and &#947;-secretases. A&#946; is deposited not only in cerebral parenchyma but also in leptomeningeal and cerebral vessel walls, known as cerebral amyloid angiopathy (CAA). While a variety of A&#946; peptides were identified, the detailed production and distribution of individual A&#946; peptides in pathological tissues of AD and CAA have not been fully addressed. Here, we develop a protocol of matrix-assisted laser desorption/ionization-based imaging mass spectrometry (MALDI-IMS) on human autopsy brain tissues to obtain comprehensive protein mapping. For this purpose, human cortical specimens were obtained from the Brain Bank at the Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology. Frozen cryosections are cut and transferred to indium-tin-oxide (ITO)-coated glass slides. Spectra are acquired using the MALDI system with a spatial resolution up to 20 &#181;m. Sinapinic acid (SA) is uniformly deposited on the slide using either an automatic or a manual sprayer. With the current technical advantages of MALDI-IMS, a typical data set of various A&#946; species within the same sections of human autopsied brains can be obtained without specific probes. Furthermore, high-resolution (20 &#181;m) imaging of an AD brain and severe CAA sample clearly shows that A&#946;1-36 to A&#946;1-41 were deposited into leptomeningeal vessels, while A&#946;1-42 and A&#946;1-43 were deposited in cerebral parenchyma as senile plaque (SP). It is feasible to adopt MALDI-IMS as a standard approach in combination with clinical, genetic, and pathological observations in understanding the pathology of AD, CAA, and other neurological diseases based on the current strategy.

Molecular imaging with matrix-assisted laser desorption/ionization-based imaging mass spectrometry (MALDI-IMS) allows the simultaneous mapping of multiple analytes in biological samples. Here, we present a protocol for the detection and visualization of amyloid &#946; protein on brain tissues of Alzheimer&#39;s disease and cerebral amyloid angiopathy samples using MALDI-IMS.

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量顕微鏡を用いたひと脳のアミロイド β の堆積物の可視化

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into ...

Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find preventive and curative measures. The most effective way to achieve this is through direct examination of diseased and healthy brain tissue. The authors present a protocol to obtain, process, characterize and store good quality brain tissue donated by individuals registered in an antemortem brain donation program. The donation program includes a face-to-face empathic approach to people, a collection of complementary clinical, biological, social and lifestyle information and serial multi-dimensional assessments over time to track individual trajectories of normal aging and cognitive decline. Since many neurological diseases are asymmetrical, our brain bank offers a unique protocol for slicing fresh specimens. Brain sections of both hemispheres are alternately frozen (at -80 &#176;C) or fixed in formalin; a fixed slice on one hemisphere corresponds to a frozen one on the other hemisphere. With this approach, a complete histological characterization of all frozen material can be obtained, and omics studies can be performed on histologically well-defined tissues from both hemispheres thus offering a more complete assessment of neurodegenerative disease mechanisms. Correct and definite diagnosis of these diseases can only be achieved by combining the clinical syndrome with the neuropathological evaluation, which often adds important etiological clues necessary to interpret the pathogenesis. This method can be time consuming, expensive and limited as it only covers a limited geographical area. Regardless of its limitations, the high degree of characterization it provides can be rewarding. Our ultimate goal is to establish the first Italian Brain Bank, all the while emphasizing the importance of neuropathologically verified epidemiological studies.

This protocol describes a method to track individual brain-aging trajectories through a brain donation program and proper characterization of brains. Brain donors are involved in a long-term longitudinal study including serial multi-dimensional assessments. The protocol contains a detailed description of brain processing and an accurate diagnostic methodology.

老化脳の収集、処理、特徴付けのためのアッビアテグラッソブレインバンクプロトコル

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Detecting Amyloid-&#946; Accumulation via Immunofluorescent Staining in a Mouse Model of Alzheimer's Disease

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that contributes to 60-70% dementia around the world. One of the hallmarks of AD undoubtedly lies on accumulation of amyloid-&#946; (A&#946;) in the brain. A&#946; is produced from the proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &#946;-secretase and &#947;-secretase. In pathological circumstances, the increased &#946;-cleavage of APP leads to overproduction of A&#946;, which aggregates into A&#946; plaques. Since A&#946; plaques are a characteristic of AD pathology, detecting the amount of A&#946; is very important in AD research. In this protocol, we introduce the immunofluorescent staining method to visualize A&#946; deposition. The mouse model used in our experiments is 5&#215;FAD, which carries five mutations found in human familial AD. The neuropathological and behavioral deficits of 5xFAD mice are well-documented, which makes it a good animal model to study A&#946; pathology. We will introduce the procedure including transcardial perfusion, cryosectioning, immunofluorescent staining and quantification to detect A&#946; accumulation in 5&#215;FAD mice. With this protocol, researchers can investigate A&#946; pathology in an AD mouse model.

<meta charset="utf8"></head><body>アルツハイマー病マウスモデルにおける免疫蛍光染色によるアミロイドβ蓄積の検出

In the neuropathology of Alzheimer's disease, one of the most crucial characteristics is the deposition of amyloid-&#946;. In this protocol, we describe the method of immunofluorescent staining in 5&#215;FAD transgenic mouse to detect amyloid-&#946; accumulation in plaques. The process of perfusion, cryosectioning, staining and quantification will be described in detail.

アルツハイマー病マウスモデルにおける免疫蛍光染色によるアミロイドβ蓄積の検出

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that contributes to 60-70% dementia around the world. One of the hallmarks of AD undoubtedly lies ...

アミロイドのための前方脂肪パッドのFNAの実行と処理

要約

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調製と

アミロイド組織イメージングステンドグラスハイパースペクトルで発光共役オリゴチオフェンと共焦点顕微鏡と蛍光寿命イメージング

アルツハイマー病のマウスモデルにおける神経突起斑の検出

骨格筋における筋肉内脂肪形成とその細胞起源を調べるためのガイド

縦

定量的3D

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量顕微鏡を用いたひと脳のアミロイド β の堆積物の可視化

老化脳の収集、処理、特徴付けのためのアッビアテグラッソブレインバンクプロトコル

アルツハイマー病マウスモデルにおける免疫蛍光染色によるアミロイドβ蓄積の検出

アルツハイマー病マウスモデルにおける免疫蛍光染色によるアミロイドβ蓄積の検出

アミロイドのための前方脂肪パッドのFNAの実行と処理

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アミロイド組織イメージング ステンド グラス ハイパー スペクトルで発光共役オリゴチオフェンと共焦点顕微鏡と蛍光寿命イメージング

アルツハイマー病のマウスモデルにおける神経突起斑の検出

骨格筋における筋肉内脂肪形成とその細胞起源を調べるためのガイド

縦

定量的3D

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量顕微鏡を用いたひと脳のアミロイド β の堆積物の可視化

老化脳の収集、処理、特徴付けのためのアッビアテグラッソブレインバンクプロトコル

アルツハイマー病マウスモデルにおける免疫蛍光染色によるアミロイドβ蓄積の検出

アルツハイマー病マウスモデルにおける免疫蛍光染色によるアミロイドβ蓄積の検出

アミロイド組織イメージングステンドグラスハイパースペクトルで発光共役オリゴチオフェンと共焦点顕微鏡と蛍光寿命イメージング