Questo protocollo descrive un metodo per indurre la cardiomiopatia diabetica combinando un'alimentazione con una dieta ricca di grassi e iniezioni di streptozotocina. L'obiettivo è quello di fornire un quadro affidabile per la ricerca scientifica sulla cardiomiopatia diabetica e di esplorare potenziali applicazioni di trattamento clinico. Abbiamo sviluppato un metodo economico e conveniente per creare cardiomiopatia diabetica in topi con cardiomiociti ingrossati e disorganizzati, rottura delle fibre miocardiche, dissonazione, disfunzione miocardiologica e ridotta funzione cardiovascolare.
Rispetto ad altri metodi, il nostro protocollo è conveniente, efficiente e più facile da utilizzare combinando una dieta ricca di grassi e iniezioni di streptozotocina. L'istituzione di questo modello ci aiuterà a comprendere meglio i meccanismi alla base dello sviluppo e della progressione della cardiomiopatia diabetica. Per iniziare, utilizzando una siringa da un millilitro, somministrare iniezioni intraperitoneali di 30 milligrammi per chilogrammo di streptozotocina, o STZ, al giorno per sette giorni ai topi nella dieta ricca di grassi, o gruppo HFD / STZ.
Per misurare il livello di glucosio nel sangue, una settimana dopo l'ultima iniezione, posizionare con cura il mouse su un dispositivo di contenzione, assicurandosi che la coda sia completamente estesa all'esterno. Igienizzare accuratamente il sito di raccolta del sangue sulla coda con un tampone alcolico al 70%. Quindi, inserisci l'ago a punta affilata nella vena della coda, avanzando dalla punta verso la base fino a una profondità di tre o quattro millimetri.
Una volta posizionato l'ago, premere delicatamente la parte superiore della coda per stimolare il flusso sanguigno. Applicare con cura il sangue su una striscia reattiva, lasciandola assorbire completamente. Attendere che il glucometro visualizzi la lettura della glicemia.
Per il test di tolleranza al glucosio orale, o OGTT, digiunare ogni topo durante la notte per 14 ore, consentendo un accesso illimitato all'acqua. Preparare circa 10 millilitri di una soluzione di glucosio al 20%. Somministrare un dosaggio di un grammo per chilogrammo per via orale a ciascun topo durante l'OGTT.
Monitorare i livelli di glucosio nel sangue a zero, 15, 30, 60 e 120 minuti dopo la somministrazione di glucosio. I topi del gruppo HFD/STZ hanno mostrato un picco di peso corporeo a 12 settimane, significativamente più alto rispetto al gruppo ND. Dopo la somministrazione di STZ, il peso corporeo del gruppo HFD/STZ è diminuito, mentre il gruppo ND ha mostrato un aumento costante nell'arco di 12 settimane.
Il gruppo HFD/STZ ha mantenuto livelli casuali di glucosio nel sangue significativamente più elevati rispetto al gruppo ND durante il periodo di alimentazione. La curva OGTT era significativamente più alta per il gruppo HFD/STZ rispetto al gruppo ND, con entrambi i gruppi che raggiungevano il picco a 15 minuti prima di diminuire. I livelli sierici di insulina nel gruppo ND erano inizialmente più alti rispetto al gruppo HFD per le prime 12 settimane, ma si sono invertiti dopo la somministrazione di STZ Per condurre valutazioni ecocardiografiche, posizionare il topo anestetizzato del gruppo STZ/HFD o ND su un termoforo.
Fissare gli artigli del mouse a un elettrodo per garantire una posizione supina stabile. Rimuovere il pelo del topo dal torace usando una crema depilatoria, quindi applicare il gel ad ultrasuoni sulla zona esposta del torace. Per ottenere una visuale ottimale dell'asse lungo del ventricolo sinistro, posizionare la sonda da 50 megahertz sul lato sinistro del torace del topo.
Ruotare la sonda in senso antiorario tra 15 gradi e 45 gradi rispetto alla linea parasternale sinistra, allineando la tacca verso la spalla destra. Regolare l'asse Z e l'asse Y per garantire un'immagine nitida in modalità B. Quindi, premere due volte M-mode per visualizzare la linea di misurazione.
Posiziona la linea di misurazione a livello del muscolo papillare, quindi misura almeno tre battiti cardiaci consecutivi per verificarne la precisione e tocca Salva clip per salvare il cineloop nella serie. Identificare la dimensione telesistolica nella fase allineata con l'onda ECGT e la dimensione telediastolica nella fase allineata con l'onda ECGR. Quindi, inclinare il pad operativo, abbassando l'angolo superiore sinistro e sollevando l'angolo inferiore destro.
Regolare la sonda lungo la direzione dell'apice cardiaco, parallelamente all'asse lungo del cuore, per ottenere una vista transapicale a quattro camere. Dopo aver regolato il volume e la direzione di campionamento, registrare le informazioni emodinamiche della valvola mitrale per acquisire le misurazioni delle onde E e A. Riporta il topo recuperato nella gabbia di casa, alloggiata in un ambiente controllato con un ciclo luce-buio di 12 ore a settimana zero e 12 settimane.
I cuori nel gruppo HFD/STZ mostravano disfunzione sistolica e diastolica, con ampiezza ridotta nel setto interventricolare e pulsazione della parete posteriore del ventricolo sinistro rispetto al gruppo ND.
