This project was supported by Midwestern University, IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) and Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).

1. HSV ceppi e Manipolazione Nota: ricombinante non diffondere HSV-1 (KOS) gL86 e HSV-2 (KOS) 333gJ - con l&#39;attività reporter di beta-galattosidasi utilizzati sono stati forniti da V. Twiari 36,37. <ol><li> Utilizzare virus da un singolo lotto e conservare a -80 ° C in un rapporto 1: 1 di mezzo di Dulbecco modificato Eagle (DMEM) con siero fetale bovino 20% (FBS) e latte scremato fino al momento dell&#39;uso. Prima stoccaggio lot virale, determinare la concentrazione di virus o -nitrophenyl-β-D-galattopiranoside (ONPG) e 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galattopiranoside (X-Gal) dosaggio. </li><li> Determinare la vitalità virus e molteplicità di infezione (MOI) di X-Gal colorazione per ogni seduta sperimentale mediante saggio entrata del virus giornalista, come descritto in precedenza (Figura 1) 14. </li><li> Diluire il virus (Opt-MEM) a MOI desiderato. Fissare monostrati (paraformaldeide; 0,5 ml / pozzetto) prima della colorazione. Posizionare controlli virus redditività in un microti separataPiastra ter in parallelo con le piastre test polimicrobiche. </li></ol> 2. HeLa 299 Manipolazione cellulare <ol><li> Crescere a 37 ° C, 5% CO 2 in DMEM con 4,5 g / L di glucosio, 10% inattivato al calore siero fetale bovino (FBS), gentamicina (50 ug / ml) e L-glutammina. cellule Passage a 80% di confluenza con la soluzione di tripsina (acido etilendiamminotetraacetico, 0,53 M EDTA 0,05% tripsina; 5 ml / fiasco). </li></ol> 3. C. Manipolazione albicans Nota: C. albicans ottenuti da una fonte di laboratorio clinico è conservato a -80 ° C in Remmel latte scremato 2x media. <ol><li> Cultura congelate Stock su Sabouraud destrosio Medium (37 ° C). Dopo 24 ore la sottocultura C. albicans su terreno Fungisel (37 ° C; 48 HR) per l&#39;uso. </li><li> Genera tubo germe (GT) forme (pick colonie rappresentative, 3 ml di FBS, 3 ore; 37 ° C; Abs 600, 0.3). Dopo l&#39;incubazione, lavare GT (HBSS; 2x; 4.000 xg). Aggiungere GT lavata per riscaldato HBSS (37 &amp;# 176; C; 0,32 Abs 600). forme GT dovrebbe essere il 99% delle cellule osservate come determinato dal conteggio emocitometro. </li><li> Fai la forma di lievito (YF) stock sospensioni con la scelta di colonie rappresentative Fungisel (HBSS, 3 ml; 0,32 Abs 600). Contare il numero di forme YF / ml al microscopio con un emocitometro. forme YF dovrebbero essere il 99% delle cellule osservate come determinato dal conteggio emocitometro. </li><li> Fare lavoro stock fungine (250 ml di GT o YF magazzino in 25 ml di HBSS; 37 ° C; 10 5 CFU / ml) </li></ol> 4. S. Manipolazione aureus <ol><li> Conservare S. aureus ATCC 25923 (-80 ° C; Remmel scremato 2x latte). Cultura su agar sangue di pecora (5%; 37 ° C; 24 ore). Scegli colonie rappresentante e trasferimento mannitolo sali media entro 2 giorni per il magazzino (37 ° C; 18 ore). </li><li> Fai S. aureus sospensione madre (3 ml di HBSS; 1.32 Abs 600; 10 8 UFC / ml) <ol><li> Fai S. lavoro aureus azionari (100 pldello stock in 25 ml di HBSS; 10 5 CFU / ml). </li></ol></li></ol> 5. Candida e S. aureus Sospensioni <ol><li> Fare misto C. albicans e S. sospensione aureus (250 ml YF o GT magazzino e 100 ml di S. aureus magazzino in 25 ml di HBSS). </li></ol> 6. polimicrobiche biofilm Assay <ol><li> Seed 96 pozzetti con 200 ml di 2 x 10 5 HeLa cellule / ml (85% livello di confluenza). Lastre di roccia (30 - 45 min; 37 ° C) prima di incubazione (37 ° C, 5% di CO 2 incubatore; 18 h). Monostrati lavaggio (1x; Opt-MEM) poi sementi con HSV (HSV-1 (KOS) gL86 o HSV-2 (KOS) 33 gJ - in 100 ml Opt-MEM; MOI 50 e 10). Incubare le piastre (3 ore; 37 ° C, 5% di CO 2). Utilizzare un solo ceppo virale al giorno. </li><li> Lavare monostrati infettati (1x; tampone fosfato (PBS) con Mg +2 e Ca +2; 100 ml). Sostituire PBS con caldo HBSS lasciando 25 &amp; #181; l in ciascun pozzetto. <ol><li> Aggiungere YF, GT e / o S. sospensioni aureus lavoro (100 ml; porta a rapporto cellulare = 5: 1; n = 16). come indicato nella Tabella 1 Incubare le piastre (statici; 30 min; 37 ° C; 5% CO 2). </li></ol></li><li> Dopo l&#39;incubazione, aspirare una colonna alla volta immediatamente ricarica da 300 ml PBS con Mg +2 e Ca +2. Ripetere questa operazione due volte, quindi aggiungere la radio-immunoprecipitazione tampone di lisi (RIPA; filtro sterilizzato, 200 ml di una diluizione 1:50). </li><li> Rapidamente triturate il lisato cellulare HeLa poi posto su 50 pl sali mannitolo (MS) e media / o Fungisel (F) (figura 2). Distribuire il lisato utilizzando una bacchetta di vetro piegata a 90 °. Incubare le piastre (18 ore a 37 ° C). contare manualmente il numero di colonie per piastra. I controlli sono costituiti da S. aureus e / o C. albicans aderenza alle cellule HeLa HSV-non infetti. </li></ol> 7. Gli studi di imaging &lt;/ P&gt; <ol><li> Lavare ogni coprioggetto di vetro rotondo (12 mm; 50 ml di acetone in 100 ml bicchiere). coprioggetto secche e sterilizzare (Kimwipes; piatti di vetro Petri). Mettere vetrini sterili a secco nei pozzetti di sterili 24 pozzetti con l&#39;alcool di fiamma pinze sterilizzate. </li><li> Aggiungere cellule HeLa (1 ml; il volume 5x utilizzato per 96 pozzetti) ai pozzetti di 24 pozzetti contenenti i vetrini rotondi sterili lavati. Aggiungere i virus, batteri e funghi secondo la dima (Tabella 2) al 5x il volume usato per le piastre a 96 pozzetti, poi incubare e processo come descritto ai punti 6.2.1 a 6.4 sopra. </li><li> Dopo l&#39;ultimo lavaggio, fissare le cellule per la microscopia inondando il vetrino con metanolo e permettendogli di evaporare. Conservare le piastre a temperatura ambiente fino a colorazione. </li><li> Per microscopia in campo luminoso (1,000x finale ingrandimento originale) riempire i pozzetti contenenti coprioggetto metanolo-fisso con acqua deionizzata. Immediatamente aspirare l&#39;acqua. Coprire ogni vetrino con cristalvioletto Grammi. Lavare coprioggetto libera di macchia non legato (acqua deionizzata). Coprioggetto secchi in situ poi aderire con set mediamente dura ad una slitta etichettato montaggio (Figura 3). </li><li> Per la microscopia a fluorescenza (obiettivo 100X; 1,000x originale ingrandimento finale) lavaggio coprioggetto privo di metanolo essenzialmente come descritto al punto 7.4. Asciugare il coprioggetto nei pozzetti. <ol><li> Dopo l&#39;essiccazione, rimuovere i vetrini e metterli su vetrini etichettati. Quindi aggiungere una quantità sufficiente di diluizione 1:20 di isotiocianato di fluorescina (FITC) coniugata Herpes simplex virus di tipo 1 + 2 GD anticorpi per coprire il vetrino (1 - 5 ml). </li><li> Incubare i vetrini in una camera umida a 37 ° C per 30 min. Dopo l&#39;incubazione, lavare i coprioggetti in 4 cambi di PBS. </li><li> Dopo l&#39;ultimo lavaggio, restituire il vetrino alla diapositiva etichettati. Macchia con 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI; camera umida; 37 ° C per 30 min). Dopo l&#39;incubazione lavare i coprioggetti in 4 chanGES di PBS, poi apporre la diapositiva etichettato con set dura mezzo di montaggio. </li><li> Lasciare che il mezzo di montaggio per la cura per 24 ore a temperatura ambiente al buio. Esaminare i coprioggetti sotto dell&#39;obiettivo olio sia su un microscopio a campo chiaro o microscopio a fluorescenza con filtri di taglio FITC e DAPI. Esaminate immagini di almeno 50 campi (100 cellule per minimo organismo) per co-localizzazione (Figura 4). </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Al momento non sono disponibili informazioni sulle interazioni complesse tra permanente ai membri semi-permanenti del microbiome host che attraversano più domini tassonomici, vale a dire, procarioti, eucarioti e virali. Perciò abbiamo sviluppato un nuovo sistema modello in vitro per lo studio del biofilm iniziazione da S. aureus e C. albicans on HSV-1 oppure HSV-2 infettato 229 cellule HeLa 38 (HeLa). Il sistema modello cellule HeLa presenta un vantaggio unico. Ciò è dovuto alla loro mancanza di fibronectina superficie, che serve come un recettore per entrambi S. aureus e C. albicans 39-41. Dal momento che l&#39;apicale 42 della superficie degli epiteli delle mucose manca normalmente fibronectina, questo sistema più da vicino imita quella osservata in infezione naturale e della colonizzazione 43-47. Così, siamo in grado di esaminare in modo più diretto le specifiche commedie virale fatturato recettore voce di ruolo nella successiva adesione da parte di altri membri del microbioma. Iscrizione Uso abile non diffondere HSV-1 e HSV-2, questi risultati mostrano che l&#39;ingresso cella di HSV-1 oppure HSV-2 rende cellule refrattari a super-infezione da S. aureus, migliorando C. albicans aderenza in un modo dipendente dalla concentrazione di virus (Figura 4). È interessante notare che gli effetti di HSV-1 sulle forme GT vs YF, era il contrario di quello misurato per HSV-2, una scoperta che potrebbe avere un impatto significativo sulla promozione di candidosi vaginale nelle presentazioni cliniche 48-51. Da una prospettiva patogenesi, è generalmente accettato che il fenotipo GT di C. albicans è la forma patogena, con l&#39;YF lo stato commensale 51-54. L&#39;aderenza del C. albicans GT che sono stati co-incubate con S. aureus mostrato un modello alterato di legarsi alle cellule HeLa infettate da HSV, rispetto a quello misurato per YF - S. vincolanti aureus. HSV-1 migliorata aderenza del GT alle cellule HeLa, ma per un sigsignificativamente minore misura (p &lt;0,05) di quella misurata per YF aderenza, come discusso sopra, cioè, il controllo 270% per YF aderenza e controllo 190% per aderenza GT. Inoltre, mentre S. aureus non aveva effetto sulla HSV-1 valorizzazione del legame GT, il cocco negato l&#39;aderenza migliorata mediato dalla presenza di HSV-2. Il modello inversa è stata osservata per S. effetto aureus sull&#39;interazione YF con le cellule infettate da virus. Questa predilezione per diverse forme fungine di HSV-1 (YF) vs. HSV-2 (GT) può svolgere un ruolo dirigere mantenimento dello stato commensale in vivo. Per quanto riguarda l&#39;effetto della forma GT su S. vincolante aureus, la GT quasi completamente abolito l&#39;inibizione HSV-1 di adesione stafilococchi alle cellule HeLa. Al contrario, anche se la capacità di GT associare a HSV-2 cellule infettate era significativamente aumentata rispetto a HSV-1, la presenza di S. aureus bloccato l&#39;aumento mediato HSV-2 in aderenza. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; La questione se eventuali modifiche microbo aderenza sono il risultato di specifici recettori putativi alterati presenti, oa causa di ostacolo meccanico-sterico si può rispondere in questo modello. Attraverso l&#39;uso combinato di quantificazione delle interazioni microbo-cellula (conteggio CFU) e l&#39;esame microscopico delle interazioni, siamo stati in grado di determinare che HSV-1 e HSV-2 sembrano bloccare S. aureus -cell interazione, poiché S. aureus aderito esclusivamente alle cellule HeLa non infetti. Inoltre, l&#39;esame microscopico delle cellule mostrano che Candida e HSV-1 e HSV-2 co-localizzate. Usato insieme qui i risultati di questo studio parallelo in vivo osservazioni sito specificità per la colonizzazione indica l&#39;utilità di questo modello per lo studio delle interazioni polimicrobiche. L&#39;uso efficace del protocollo qui descritto dipende da una varietà di fattori. In primo luogo, l&#39;uso di diffusione del virus carente. Ciò permette ad un Examina pulitozione della voce e delle cellule virali segnalazione effetto ha su successive interazioni microbo, senza la complicazione di cambiamenti che possono verificarsi a causa di avvolgere acquisizione prima di lasciare la cella. Inoltre, l&#39;uso di virus difettoso permette un ambiente più sicuro per la movimentazione di biosicurezza classe due patogeni. In secondo luogo, questo protocollo consente l&#39;uso di entrambe le varianti di aderenza virali e microbiche. Uso di varianti che legano solo a recettori specifici consente delineazione dei recettori condivise tra microbi, o, in alternativa, il rilevamento di nuovi recettori. Attraverso l&#39;uso di anticorpi monoclonali ai recettori, c&#39;è il potenziale per la visualizzazione della localizzazione adhesin sulla superficie microbica e fornisce uno strumento per studiare l&#39;espressione adhesin alterata. Questo protocollo non è adatto per lo studio dei microbi che non può essere isolato selettivamente sul terreno differenziale. La metodologia dipende anche dalla disponibilità di anticorpo monoclonale proteine ​​virus-specifici. Sebbene unnalisi in questo studio è stata rafforzata dal differenziale di dimensioni tra lieviti e batteri, uso del differenziale fluorescente tag, ad esempio Texas rosso, microbo anticorpo monoclonale specifico sarebbe un efficace lavoro-around dovrebbero microbi in questione è simile nella morfologia e le dimensioni.

<html> Il microbioma umano comprende diversi organismi da più regni tassonomici che condividono aree geografiche nel corpo. L&#39;adesione alla superficie delle cellule è un primo passo essenziale nella formazione di biofilm, che è parte del processo microbiome colonizzazione. Incluso nel microbiome può essere virus che causano infezioni croniche e persistenti. L&#39;infezione cronica a cellule da questi virus può causare un&#39;alterazione putativo disponibilità del recettore. 1,2 Inoltre, l&#39;ingresso delle cellule da patogeni intracellulari potrebbe anche influenzare la fluidità di membrana host / idrofobia che a loro volta possono alterare l&#39;attaccamento degli altri membri microbiome, compresi batteri e funghi . Al fine di comprendere le interazioni che possono verificarsi tra questi molteplici agenti patogeni che co-localizzano nelle stesse regioni geografiche del ospite umano, dobbiamo essere in grado di studiare l&#39;interazione di agenti patogeni che rappresentano lo spettro di regni tassonomici presenti sulla superficie della mucosa. t &quot;&gt; Il Herpesviridae sono una famiglia di microbi presenti nel 100% degli esseri umani come membri permanenti del microbiome 3,4. Inoltre, esse possono anche essere persistentemente versato sia in presenza che in assenza di sintomi. In particolare, herpes simplex virus-1 e herpes simplex virus 2 (HSV-1 e HSV-2, rispettivamente) sono membri permanenti del microbiome nella oronasopharynx e del tratto genitale. in individui immuno-competenti, sia HSV-1 e HSV-2 causa gengivostomatite, nonché herpes genitale 5-8. in questi siti, HSV provoca un&#39;infezione latente caratterizzata da persistente asintomatica virale spargimento 9. ingresso di HSV in cellule provoca alterazioni nell&#39;espressione superficiale di nectins, eparan solfato, raft lipidici e herpesvirus ingresso mediatore necrosi cronica / tumorale recettore del fattore (HVEM / TNFR) 10-25. Questi recettori potenzialmente rappresentano condivise per alcuni batteri e funghi, per esempio S. aureus e C. albicans, che pur patogeni opportunisti,può anche risiedere come membri del microbioma mucosa del oronasopharynx 26,27. All&#39;interno del oronasopharynx S. aureus e C. albicans occupano due siti distinti di colonizzazione. In host con denti naturali, la mucosa orale è condiviso da HSV-1 e C. albicans, mentre le narici nasali anteriori sono occupati da S. aureus 28. Tuttavia, nonostante i risultati in vitro in cui S. aureus aderisce alle cellule epiteliali della bocca, 29,30 S. aureus è raramente isolata da campioni orali quando il tessuto normale è presente 29,30. Poco si sa riguardo a genitali nicchie tratto co-colonizzazione al di là dei risultati clinici che S. aureus è associata a vaginite aerobica, caratterizzata da infiammazione genitale, scarico e dispareunia, mentre C. albicans produce lesioni della mucosa simile a quello osservato nella cavità orale 31-35. Così, anche se questi membri della Microbi orale e genitaleome croce regni tassonomici poco si sa sulla loro interazione come urta la loro capacità di avviare la formazione di biofilm attraverso l&#39;adesione alla superficie della cellula ospite 5. Questo protocollo è stato efficacemente applicato a determinare le conseguenze funzionali di co-colonizzazione / infezione.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;C.albicans&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BBL Sabouraud Dextrose</td><td>BD</td><td>211584</td><td></td></tr><tr><td>Fungisel Agar</td><td>Dot Scientific</td><td>7205A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;S.aureus&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mannitol Salt Agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>7143B</td><td></td></tr><tr><td>Sheep blood agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>221239</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Hela cells&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DMEM (Dubelcco&#039;s Modified Eagle Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td><td>Corning</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin 50 mg/ml</td><td>Sigma</td><td>1397</td><td>50 &amp;micro;g/ml final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA (0.05% Trypsin, 0.53 M EDTA)Solution 1x</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>10% final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Other medium and reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ONPG</td><td>Thermo Scientific</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Pure X gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520-018</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS (Hanks&#039; Balanced Salt Solution)</td><td>Corning</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Dot Scientific</td><td>30042-500</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Lysis</td><td>Life Technologies</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Staining&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A433P-4</td><td></td></tr><tr><td>HSV 1&amp;amp;2, specific for gD</td><td>ViroStat</td><td>196</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>SIGMA</td><td>D8417-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Gram Crystal Violet</td><td>Troy Biologicals</td><td>212527</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Supplies&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 100 x 15</td><td>Dot Scientific</td><td>229693&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 150 x 15</td><td>Kord Valmark</td><td>2902</td><td></td></tr><tr><td>96-Well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8030-01F</td><td></td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8044-01F</td><td></td></tr><tr><td>Culture tubes 100 x 13</td><td>Thomas Scientific</td><td>9187L61</td><td></td></tr><tr><td>Cover slip circles, 12 mm</td><td>Deckglaser</td><td>CB00120RA1</td><td></td></tr></tbody></table>

determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi

Lo studio delle interazioni polimicrobiche attraverso i regni tassonomici che includono funghi, batteri e virus non sono stati precedentemente esaminati rispetto a come i membri virali del microbiome influenzano le successive interazioni microbo con queste cellule ospiti infettate da virus. La convivenza virus con batteri e funghi è principalmente presente sulle superfici mucose della cavità orale e genitale. le cellule delle mucose, in particolare quelli con infezioni virali latenti croniche o persistenti persistenti, potrebbero avere un impatto significativo sulla membri della microbiome attraverso l&#39;alterazione del virus in numero e tipo di recettori espressi. Modifiche nell&#39;architettura membrana della cellula ospite comporterebbe capacità alterato di successivi componenti della flora normale e patogeni opportunisti di avviare il primo passo nella formazione di biofilm, cioè, l&#39;aderenza. Questo studio descrive un metodo per la quantificazione e esame visivo effetto di HSV sulla apertura di Biofilformazione m (aderenza) di S. aureus e C. albicans.

Il livello di solidità dei dati ottenibili da sistema descritto in questa relazione è illustrata nella Figura 2 af 38. Attraverso l&#39;utilizzo di questo sistema di modulazione di interazione stafilococco e funghi con le cellule infettate da virus e il loro effetto sulla reciproca aderenza può essere delineata. Questi tipi di studi richiedono esame microscopico dell&#39;interazione come mostrato nelle figure 3 e 4, 38 al fine di determinare se l&#39;interazione polymicrobial avviene sulle stesse cellule. In questo studio dell&#39;interazione cella differenziale si osserva come risultato di HSV-modulazione di aderenza stafilococcica e fungina che è la specie virali specifici. S. aureus e C. albicans (GT e YF) aderito alle stesse cellule di controllo HeLa HSV-non infetti. Questa co-localizzazione su cellule indica una mancanza di phys<html> inferenza iCal con reciproca adesione delle cellule HeLa e che i livelli misurati di aderenza differenziale misurati erano probabilmente HSV-mediata (figura 3A, A1) 38. Tuttavia, su HSV-1 o HSV-2 infettate cellule HeLa non co-localizzazione di stafilococchi e C. è stata osservata albicans. (Figure 3B, B1, B2, B3, C1, C2). Utilizzando la microscopia a fluorescenza (FITC-coniugato anti-HSV-gD anticorpo monoclonale) ha inoltre confermato che S. aureus non sembra di co-localizzare con C. albicans né HSV-1 oppure HSV-2 (figure 4A, A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3). Questa cooperazione tra HSV e Candida estesa ad entrambi lievito e germi forme tubo (Figure 2A-F) di C. albicans. Questa specificità di associazione tra il triade di microbi riflette la specificità della colonizzazione visto su una scala molto più ampia nella mucosa oronasopharynx host. <html> 1 &quot;&gt; <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig1.jpg" /> Figura 1. X-gal colorazione Immagini di dosaggio dipendente HSV-1 infezione in cellule HeLa. Cellule HeLa infettate con HSV-1 a vari MOI e X-Gal macchiato. Cellule (A) HeLa in ben 96 dei pozzetti con controllo cellulare X-Gal macchiato mock-infettati HeLa; 20x di ingrandimento iniziale; (B) cellule HeLa in pozzetto di 96 pozzetti con cellule HeLa X-Gal tinto infettati con HSV-1 ad una molteplicità di infezione (MOI) di 10; 20x di ingrandimento iniziale; Cellule (C) HeLa in pozzetto di 96 pozzetti con cellule HeLa X-Gal tinto infettati con HSV-1 ad una molteplicità di infezione (MOI) di 50; 20x di ingrandimento iniziale; scala grafica si applica a tutti. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54162/54162fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> file / ftp_upload / 54162 / 54162fig2.jpg &quot;/&gt; Figura 2. Effetto di HSV-1 (pannelli A, C, E) e HSV-2 (pannelli B, D, F) alla molteplicità di infezione (MOI) di 50 e 10 sulla aderenza S. aureus e / o C. albicans a cellule HeLa. (A) S. aureus (Sa) legandosi a HSV-1 cellule infettate in presenza di C. tubi albicans germinali (GT) o forme di lievito (YF); (B) S. aureus (Sa) legandosi a HSV-2 cellule infettate in presenza di C. tubi albicans germinali (GT) o forme di lievito (YF); (C) C. tubi albicans germinali (GT) vincolanti per HSV-1 le cellule infettate in presenza di S. aureus (Sa); (D) C. tubi albicans germinali (GT) vincolanti per HSV-2 cellule infettate in presenza di S. aureus (Sa); (E) C. forme di lievito albicans (YF) vincolanti per HSV-1 le cellule infettate in presenza di S. aureus (Sa); (F) C. forme di lievito albicans (YF) vincolanti per HSV-2 cellule infettate in presenza di S. aureus (Sa). Tutti i punti di dati sono media +/- SEM, n = 16 normalizzato al controllo privo di virus. * = Significativamente differenti (p &lt;0,05) dal controllo delle cellule HeLa non infetta. # = Significativamente differenti (p &lt;0.05) dal punto accoppiato indicato dalla staffa; barra della scala si applica a tutti. 38 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54162/54162fig2large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig3.jpg" /> Figura 3. Mancanza di S. aureus e C. albicans Interactions on HSV-1 e HSV-2 cellule HeLa infetti. HSV-1 e HSV-2 infettate (MOI 50) monostrati di cellule HeLa con S. aureus e C. albicans (5: 1 target per cella). Per il campo luminoso<html> microscopia, monostrati di cellule sono state colorate con violetto di cristallo di Gram, poi esaminate al microscopio ottico. Le cellule che erano positivi per la Candida o S. aureus (100 cellule individuali a segnale microbo / per vetrino) sono stati secondariamente analizzato per la presenza di ulteriori segnali microbo co-localizzazione (1,000x ingrandimento iniziale). (A e A1) S. aureus (Sa) e C. forme albicans lievito (YF) o forme di tubi di germe (GT) co-localizzare sulle cellule HeLa non infettate; (A2, inserire). Percentuale di cellule HeLa con il co-localizzate o singoli microbi; (B - B3) Mancanza di S.. aureus e C. albicans co-localizzazione in presenza di HSV-1; (C - C2) Mancanza di S. aureus e C. albicans co-localizzazione in presenza di HSV-2. Media ± SEM; barra della scala si applica a tutti. 38rget = &quot;_ blank&quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig4.jpg" /> Figura 4. La mancanza di co-localizzazione di S. aureus con C. albicans su HSV-1 o HSV-2 cellule HeLa infetti. HSV-infezione HeLa monostrati cellulari sfida con S. aureus e C. albicans (5: 1 obiettivo di cella) macchiata (anticorpo anti HSV gD FITC-coniugato, e DAPI). Le immagini sono rappresentative di risultati di screening delle cellule che erano segnale positivo per HSV poi scansionato per la Candida e S. aureus (100 cellule individuali a segnale microbo per vetrino), che sono stati poi secondariamente analizzato per la presenza di ulteriori segnali microbo di co-localizzazione (1,000x ingrandimento iniziale; Nikon). (A - A4) C. albicans (A2, inserto; colorazione DAPI) co-localizzare con HSV-1; (B- B3) C. albicans co-localizzato con HSV-2 (B1, inserto, C. albicans colorazione DAPI). Media ± SEM; barra della scala si applica a tutti. 38 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54162/54162fig4large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 11 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> tubi </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MEDIA </td><td> F </td><td> F </td><td> SIGNORINA </td><td> SIGNORINA </td><td> F </td><td> SIGNORINA </td><td> F </td><td> F </td><td> F </td><td> SIGNORINA </td><td> SIGNORINA </td><td> F </td><td> SIGNORINA </td><td> F </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> UN </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> C </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> F </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> sol </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> H </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 1. Generale Determinazione Modello di microbica aderenza in polimicrobiche Interazioni GT = Candida albicans tubo germe fenotipo.; YF = C. albicans forma di lievito fenotipo; MSSA = meticillina sensibile aureus Staphylococcus; MS = sali mannitolo media; F = Fungisel media. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54162/54162table1.xlsx" target="_blank">Cliccate qui per scaricare questo file.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> piastra 1 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td></tr><tr><td&gt; Controllo </td><td> solo le cellule HeLa </td><td> HeLa + GT </td><td> HeLa + YF </td><td> HeLa + Sa </td><td> HeLa + GT + Sa </td><td> HeLa + YF + Sa </td></tr><tr><td> UN </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> C </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tavola 2 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HSV </td><td> cellule HeLa + HSV </td><td> HSV + HeLa + GT </td<html> &gt; <td> HSV + HeLa + YF </td><td> HSV + HeLa + Sa </td><td> HSV + HeLa + GT + Sa </td><td> HSV + HeLa + YF + Sa </td></tr><tr><td> UN </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> C </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 2. Modello generale per Visual Analisi polimicrobiche interazioni con cellule HSV-infetti e non infetti HeLa GT = Candida albicans tubo germe fenotipo.; YF = C. albicans forma di lievito fenotipo; SA = meticillina sensibili Staphylococcus aureus; HSV = virus herpes simplex.ve.com/files/ftp_upload/54162/54162table2.xlsx &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clicca qui per scaricare il file.

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Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

Determinazione del biofilm iniziazione su cellule infettate da virus da batteri e funghi

The study of polymicrobial interactions across the taxonomic kingdoms that include fungi, bacteria and virus have not been previously examined with ...

determination-biofilm-initiation-on-virus-infected-cells-bacteria

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.6K Views.  Midwestern University. A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

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Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, biofilms can reduce industrial productivity, destroy structures, and threaten human life. 1-3 On the other hand, harnessing the power of biofilms can help clean the environment and generate sustainable energy. 4-8
The ability of S. cerevisiae to colonize surfaces and participate in complex biofilms was mostly ignored until the rediscovery of the differentiation programs triggered by various signaling pathways and environmental cues in this organism. 9, 10 The continuing interest in using S. cerevisiae as a model organism to understand the interaction and convergence of signaling pathways, such as the Ras-PKA, Kss1 MAPK, and Hog1 osmolarity pathways, quickly placed S. cerevisiae in the junction of biofilm biology and signal transduction research. 11-20 To this end, differentiation of yeast cells into long, adhesive, pseudohyphal filaments became a convenient readout for the activation of signal transduction pathways upon various environmental changes. However, filamentation is a complex collection of phenotypes, which makes assaying for it as if it were a simple phenotype misleading. In the past decade, several assays were successfully adopted from bacterial biofilm studies to yeast research, such as MAT formation assays to measure colony spread on soft agar and crystal violet staining to quantitatively measure cell-surface adherence. 12, 21 However, there has been some confusion in assays developed to qualitatively assess the adhesive and invasive phenotypes of yeast in agar.
Here, we present a simple and reliable method for assessing the adhesive and invasive quality of yeast strains with easy-to-understand steps to isolate the adhesion assessment from invasion assessment. Our method, adopted from previous studies, 10, 16 involves growing cells in liquid media and plating on differential nutrient conditions for growth of large spots, which we then wash with water to assess adhesion and rub cells completely off the agar surface to assess invasion into the agar. We eliminate the need for streaking cells onto agar, which affects the invasion of cells into the agar. In general, we observed that haploid strains that invade agar are always adhesive, yet not all adhesive strains can invade agar medium. Our approach can be used in conjunction with other assays to carefully dissect the differentiation steps and requirements of yeast signal transduction, differentiation, quorum sensing, and biofilm formation.

We describe a qualitative assay for yeast adhesion and agar invasion as a measure of invasive and pseudohyphal differentiation. This simple assay can be used to assess the invasive phenotype of various mutants as well as the effects environmental cues and signaling pathways on yeast differentiation.

Test di adesione ed invasione di Agar in S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Ricerca

Biologia

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be applied to the study of cell invasion by virtually any culturable bacterium. The stages at which specific aspects of invasion can be studied, such as the role of actin rearrangement or caveolae, will be highlighted. Host cells are grown in flasks and when ready for use are seeded into 24-well plates containing Thermanox coverslips. Using coverslips allows subsequent removal of the cells from the wells to reduce interference from serum proteins deposited onto the sides of the wells (to which S. aureus would attach). Bacteria are grown to the required density and washed to remove any secreted proteins (e.g. toxins). Coverslips with confluent layers of endothelial cells are transferred to new 24-well plates containing fresh culture medium before the addition of bacteria. Bacteria and cells are then incubated together for the required amount of time in 5% CO2 at 37&deg;C. For S. aureus this is typically between 15-90 minutes. Thermanox coverslips are removed from each well and dip-washed in PBS to remove unattached bacteria. If total associated bacteria (adherent and internalised) are to be quantified, coverslips are then placed in a fresh well containing 0.5% Triton X-100 in PBS. Gentle pipetting leads to complete cell lysis and bacteria are enumerated by serial dilution and plating onto agar. If the number of bacteria that have invaded the cells is needed, coverslips are added to wells containing 500 &mu;l tissue culture medium supplemented with gentamicin and incubation continued for 1 h, which will kill all external bacteria. Coverslips can then be washed, cells lysed and bacteria enumerated by plating onto agar as described above. If the experiment requires direct visualisation, coverslips can be fixed and stained for light, fluorescence or confocal microscopy or prepared for electron microscopy.

A general protocol for the study of invasion of host cells by a bacterial pathogen, focusing on Staphylococcus aureus and human endothelial cells.

Invasione di cellule umane da un agente patogeno batterico

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

Immunologia e infezioni

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and resilience of Bacillus subtilis biofilms. First, methods are presented that select for small molecule inhibitors with biofilm-specific targets in order to separate the effect of the small molecule inhibitors on planktonic growth from their effect on biofilm formation. Next, we focus on how inoculation conditions affect the sensitivity of multicellular, floating B. subtilis cultures to small molecule inhibitors. The results suggest that discrepancies in the reported effects of such inhibitors such as D-amino acids are due to inconsistent pre-culture conditions. Furthermore, a recently developed protocol is described for evaluating the contribution of small molecule treatments towards biofilm resistance to antibacterial substances. Lastly, scanning electron microscopy (SEM) techniques are presented to analyze the three-dimensional spatial arrangement of cells and their surrounding extracellular matrix in a B. subtilis biofilm. SEM facilitates insight into the three-dimensional biofilm architecture and the matrix texture. A combination of the methods described here can greatly assist the study of biofilm development in the presence and absence of biofilm inhibitors, and shed light on the mechanism of action of these inhibitors.

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This study presents the development of reproducible methodologies to study biofilm inhibitors and their effects on Bacillus subtilis multicellularity.

Metodologie per lo studio<em&gt; B. subtilis</em&gt; I biofilm come modello per Caratterizzare piccole molecole inibitori biofilm

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation. The study of biofilms is important in many biological fields, including environmental science, food production, and medicine. However, few studies have focused on such bacterial biofilms, partially due to the difficulty of investigating them. Most of the methods for qualitative and quantitative biofilm analyses described in the literature are only suitable for biofilms forming on abiotic surfaces or on homogeneous and thin biotic surfaces, such as a monolayer of epithelial cells.
While laser scanning confocal microscopy (LSCM) is often used to analyze in situ and in vivo biofilms, this technology becomes very challenging when applied to bacterial biofilms on fungal hyphae, due to the thickness and the three dimensions of the hyphal networks. To overcome this shortcoming, we developed a protocol combining microscopy with a method to limit the accumulation of hyphal layers in fungal colonies. Using this method, we were able to investigate the development of bacterial biofilms on fungal hyphae at multiple scales using both LSCM and scanning electron microscopy (SEM). This report describes the protocol, including microorganism cultures, bacterial biofilm formation conditions, biofilm staining, and LSCM and SEM visualizations.

This protocol describes a new method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae by confocal and electron microscopy.

Un nuovo metodo per l&#39;analisi qualitativa multi-scala batterica biofilm su filamentose Fungal Colonies Utilizzando confocale e microscopia elettronica

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. albicans is its ability to form biofilms, structured communities of cells attached to biotic and abiotic surfaces. C. albicans biofilms can form on host tissues, such as mucosal layers, and on medical devices, such as catheters, pacemakers, dentures, and joint prostheses. Biofilms pose significant clinical challenges because they are highly resistant to physical and chemical perturbations, and can act as reservoirs to seed disseminated infections. Various in vitro assays have been utilized to study C. albicans biofilm formation, such as microtiter plate assays, dry weight measurements, cell viability assays, and confocal scanning laser microscopy. All of these assays are single end-point assays, where biofilm formation is assessed at a specific time point. Here, we describe a protocol to study biofilm formation in real-time using an automated microfluidic device under laminar flow conditions. This method allows for the observation of biofilm formation as the biofilm develops over time, using customizable conditions that mimic those of the host, such as those encountered in vascular catheters. This protocol can be used to assess the biofilm defects of genetic mutants as well as the inhibitory effects of antimicrobial agents on biofilm development in real-time.

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

This protocol describes the use of a customizable automated microfluidic device to visualize biofilm formation in Candida albicans under host physiological conditions.

Visualizzazione della formazione di Biofilm in Candida albicans utilizzando un dispositivo microfluidico automatizzato

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Microfluidic Tools for Probing Fungal-Microbial Interactions at the Cellular Level

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic matter, as well as regulation of nutrient levels. There they also find numerous opportunities to interact with a variety of other microbes such as bacteria or other fungi. Studying fungal interactions at the cellular level, however, can be challenging owing to the black box-like nature of soil. New microfluidic tools are being developed for the study of fungal interactions; two platforms designed to study bacterial-fungal and fungal-fungal interactions are highlighted. Within these microchannels, fungal-microbial interactions can be monitored in controlled physico-chemical environments at higher temporal and spatial resolution than previously possible. Application of these tools have yielded numerous novel biological insights, such as the observation of bacterial polar attachment to hyphae or revealing uncharacterised fungal-fungal antagonisms. A key feature of these methodologies regards the ease of use of this tool by non-experts, yielding highly translatable technologies for use in microbiology labs.

Owing to the opacity of soil, interactions between its constituent microbes cannot easily be visualised with cellular resolution. Here, two microfluidic tools are presented, which offer new opportunities for investigating fungal-microbial interactions. The devices are versatile and simple to use, enabling high spatiotemporal control and high-resolution imaging at the cellular level.

Strumenti microfluidici per sondare le interazioni fungine-microbiche a livello cellulare

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic ...

Bioingegneria

Measuring the Migration and Biofilm Formation of Various Bacteria

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their nature would be beneficial in facilitating their characterization. Currently, most studies focus only on one specific characterization method; however, the isolation and identification of microorganisms from the host is a continuous process and usually requires several combinatorial characterization methods. Herein, we describe methods of identifying the microbial biofilm-forming ability, the microbial respiration state, and their chemotaxis behavior. The methods are used to identify five microbes, three of which were isolated from the bone tissue of Sprague-Dawley (SD) rats (Corynebacterium stationis, Staphylococcus cohnii subsp. urealyticus, and Enterococcus faecalis) and two from the American Type Culture Collection (ATCC)-Staphylococcus aureus ATCC 25923&#160;and Enterococcus faecalis V583. The microbes isolated from the SD rat bone tissue include the gram-positive microbes. These microbes have adapted to thrive under stressful and nutrient-limiting environments within the bone matrix. This article aims to provide the readers with the specific know-how of determining the nature and behavior of the isolated microbes within a laboratory setting.

<meta charset="utf8"></head><body>Misurazione della migrazione e della formazione di biofilm di vari batteri

Here, we present a practical method for the isolation and identification of microorganisms within the host. In this way, the physicochemical properties of microorganisms and possible ways of living in the host are clearly described.

Misurazione della migrazione e della formazione di biofilm di vari batteri

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their ...

Candida albicans Biofilm Formation in an In Vivo Mouse Model

Source: Kuchar&#237;kov&#225;, S., et al.&#160; <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/52239">Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates the development of an in vivo mouse model to study the biofilm formation of Candida albicans in subcutaneous tissue. The experiment involves implanting Candida-infected devices in the animal&#39;s back region for biofilm development.

Candida albicans Formazione di biofilm in un modello murino in vivo

1. C. albicans Growth

	Twenty-four hours before the initiation of the animal experiment, prepare yeast extract peptone dextrose, YPD plates by adding 10 ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Immunodiagnostics

In Vitro and In Vivo Models

A Method for Sample Preparation to Visualize Biofilm Forming Bacteria on Fungal Hyphae

Source: Guennoc, Cora Miquel, et al, <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/54771">A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video describes a method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae using microscopy. Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and involve numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation.

Un metodo per la preparazione del campione per visualizzare i batteri che formano biofilm sulle ife fungine

1. Preparation of an In Vitro Biofilm of Bacteria on the Fungal Colony

	Centrifuge the bacterial culture at 5,000 x g for 3 min and suspend the pellet in ...

Determinazione del biofilm iniziazione su cellule infettate da virus da batteri e funghi

Riepilogo

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Test di adesione ed invasione di Agar in S. cerevisiae

Invasione di cellule umane da un agente patogeno batterico

Metodologie per lo studio

Un nuovo metodo per l'analisi qualitativa multi-scala batterica biofilm su filamentose Fungal Colonies Utilizzando confocale e microscopia elettronica

Visualizzazione della formazione di Biofilm in Candida albicans utilizzando un dispositivo microfluidico automatizzato

Strumenti microfluidici per sondare le interazioni fungine-microbiche a livello cellulare

Misurazione della migrazione e della formazione di biofilm di vari batteri

Misurazione della migrazione e della formazione di biofilm di vari batteri

Candida albicans Formazione di biofilm in un modello murino in vivo

Un metodo per la preparazione del campione per visualizzare i batteri che formano biofilm sulle ife fungine