Name: long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs
Uploaded: 2016-03-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs at JoVE.com

The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

Tutte le procedure su animali sperimentali descritte in entrambi i video e manoscritti sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali e hanno seguito le linee guida stabilite dal Consiglio canadese di cura degli animali. 1. Anestesia chirurgica e preparazione chirurgica dei maiali neonatali <ol><li> In un antibagno separato, Premedicare 25 kg maiali vicino alla base del collo con una intramuscolare cocktail di farmaci sedativi-anestetico contenente: azaperone (0,3 mg / kg), ketamina cloridrato (10 mg / kg), la dexmedetomidina (15 mg / kg). Nota: Aggiungere buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) nel cocktail di droga pre-anestetico per una maggiore controllo del dolore intra-operatorio. </li><li> Anestetizzare i maiali con inalato gas inalazione isoflurano (4-5% isoflurano a 500 ml-1000 ml / min O 2) utilizzando una maschera. Visualizza le corde vocali con un campo di applicazione della laringe veterinario (lunga 17-25 cm lama dritta), e applicare attualità il 10% lidocaina spay alla vocecorde. Lasciare lo spray lidocaina per contattare le corde vocali 30-60 secondi prima di intubazione per ridurre la possibilità di spasmi delle corde vocali e ostruzione delle vie aeree. </li><li> Intubare i maiali passando un tubo endotracheale a manicotto (5,0-7,0 mm di diametro interno (ID)) tra le corde vocali e mantenere la dell&#39;anestesia con il gas isoflurano (0,5-2,0% isoflurano a 1.000-2.000 ml / min O 2) utilizzando una chiusa circuito rebreathing sistema di anestesia durante l&#39;intervento chirurgico. Valutare il livello di anestesia dal tono della mascella, ed entrambi i pedali e palpebrali risposte riflesse. gas anestetico scaduto è scavenging e ventilato al di fuori della sala operatoria. </li><li> Pulire la superficie esterna del padiglione auricolare con il 2,0% clorexidina soluzione lavaggio chirurgico seguito da un risciacquo alcool isopropilico al 70%. Con un catetere endovenoso 20 G, cateterizzare una vena orecchio per fornire fluidi per via endovenosa (soluzione di Ringer lattato; 5-10 ml / kg / ora) durante l&#39;intervento chirurgico. Fissare un pulsossimetro alla superficie della mucosa della lingua con mednastro iCal per monitorare la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigenazione del sangue periferico (SpO2). </li><li> Posizionare il maiale anestetizzato in posizione reclinata dorsale e radere l&#39;addome ventrale dalla metà torace caudalmente all&#39;aspetto ventrale del pube. Pulire questa zona con due alternando 2,0% clorexidina scrub chirurgico e lavaggi acqua sterile. </li><li> Trasferire il maiale anestetizzato alla suite chirurgica e applicare il lavaggio chirurgico finale del 70% di risciacquo alcol isopropilico, lasciarlo asciugare, e poi drappo l&#39;animale. </li><li> Inserire una sonda di temperatura rettale di circa 2-4 cm nel retto per controllare la temperatura del corpo. Posizionare i maiali su una piastra elettrica a ricircolo d&#39;acqua per mantenere la temperatura corporea normale (38-40 ° C) durante la procedura chirurgica. </li><li> Passare il maiale con quattro asciugamani teli disposti in uno schema quadrante sovrastante intorno all&#39;addome. Posizionare il primo drappo attraverso xiphisternum, il secondo telo lungo faccia laterale del ventre a circa 5 cm lateralmente alla linea mediana addominale. Posizionare il terzo copre tutta la cresta ileale del bacino e il quarto drappeggio, come il secondo telo (anche sul lato opposto), è posto lungo la faccia laterale dell&#39;addome circa 5 cm lateralmente alla linea mediana addominale. </li><li> Mettere un grande drappo tavolo, con una fessura di apertura che consente l&#39;accesso al sito chirurgico, nel corso dei sottostanti tende asciugamano e coprire il maiale e tutto il tavolo operatorio. Il drappo finale è un steri-drappo monouso posto sopra il grande tavolo drappeggio. </li></ol> 2. chirurgia addominale e cateterizzazione della intestinale linfatico Tronco <ol><li> Fare un 20 centimetri incisione cutanea con una lama di bisturi per esporre i muscoli addominali sottostanti. Incidere strati muscolari addominali con elettrocauterizzazione mono-polare (20 impostazione Watt) per esporre il peritoneo parietale. Aprire un segmento lineare 20 cm peritoneo parietale con le forbici Metzenbaum per accedere visceri addominali e dei vasi linfatici. </li><li&gt; Posizionare riavvolgitore craniale dell&#39;incisione chirurgica per mantenere la cavità addominale aperta per la durata dell&#39;intervento. </li><li> Bagnare tutti i tessuti con acqua calda (37 ° C) soluzione salina sterile per tutta la procedura chirurgica. Sollevare delicatamente un ampio segmento della intestinali, comprese colon, cieco, ileo e digiuno dalla cavità addominale e esteriorizzare al fianco sinistro del maiale per accedere alla parte superiore dell&#39;addome, fegato e vasi linfatici. Fissare l&#39;intestino esteriorizzato in posizione con tende asciugamani aggiuntivi in ​​modo da formare una fionda per sostenere delicatamente l&#39;intestino. </li><li> Individuare il vaso linfatico, depone circa 4 cm cranio-mediale della vena renale destra, 6 cm ventrale caudale-medial- dei capireparto cavali e sotto l&#39;aspetto viscerale del lobo destro del fegato nei pressi del pancreas 22,36,37. Identificare il vaso linfatico come struttura traslucido giustapposto al segmento ventrale destro della vena porta 36,37. </li><li> Separare il Vess linfaticaEL dalla fascia circostanti delicatamente prendere in giro via il tessuto attaccato con applicatori Q-Tip. Una volta che gli aspetti laterali del recipiente sono separati dal tessuto circostante, creare un&#39;apertura &quot;tunnel&quot; sotto l&#39;imbarcazione con fine smussato punta pinze. </li><li> Passare tre 2-0 punti di sutura di seta sotto il vaso linfatico con una pinza sottile. Legare la sutura più caudale prima per occludere, dilatare e riempire il vaso di linfa. Volutamente lasciare le estremità di questa sutura relativamente lungo (4 cm) per fissare il catetere al vaso linfatico. Inserire altre due suture separate 1,0 cm l&#39;una dall&#39;altra e sono circa 1,0-1,5 cm cranici alla sutura caudale protetto. Lasciare questi due punti di sutura con un &#39;unica legame legatura sciolto&#39; per consentire la più rapida messa in sicurezza del catetere nel vaso. Nota: Il segmento del vaso linfatico situato tra la sutura legatura più caudale e suturare mezzo (dei due suture craniche) è il sito per cateterizzazione. Per quanto riguarda sumateriale tura, 2-0 Polyglactin sutura può sostituire 2-0 punti di sutura in seta, se necessario. </li><li> Tagliare un piccolo foro nel contenitore con forbici iris e dilatare il vaso con pinza sottile smussato. Inserire circa 1.0-1.5 cm di tubo del catetere specializzata (4.06 Diametro esterno (OD) X 2,31 millimetri ID) con una estremità smussata nel recipiente e legare le due suture craniche per fissare il catetere in posizione. Utilizzare i lati lunghi di sutura della sutura caudale per fissare il catetere alla nave. </li><li> Lavare l&#39;intestino esteriorizzato con abbondanti quantità di soluzione salina calda e delicatamente riportarlo alla cavità addominale assicurare il corretto posizionamento anatomica dell&#39;intestino. </li><li> Esteriorizzare il catetere a metà fianco sinistro (5-10 cm ventralmente dalla fossa paralombare). Effettuare una incisione cutanea con un bisturi e passare un trocar dalla cavità addominale per la superficie della pelle per creare un&#39;apertura per l&#39;esteriorizzazione del catetere. Utilizzare un grande pinza Kelly esteriorizzare il catetere dal cav addominaleIty attraverso l&#39;apertura trequarti. </li><li> Chiudere il peritoneo parietale con un semplice modello di sutura continua di 2-0 Polyglactin di sutura con un ago rotondo (conico). Chiudere gli strati muscolari addominali con un semplice modello di sutura interrotta con una sutura 2-0 Polyglactin su un ago rotondo. </li><li> Chiudere la pelle in un modello sottocuticolare con 2-0 Polyglactin di sutura su un ago di taglio. Fissare il catetere esteriorizzato alla pelle con un modello di sutura a borsa di e una sutura 2-0 in nylon su un ago di taglio. </li><li> Inserire un rivestimento speciale sul maiale pur anestetizzati per facilitare il suo posizionamento e ridurre lo stress del maiale durante il recupero. </li></ol> Recupero 3. post-chirurgica e la linfa Collection <ol><li> Circa 10 minuti prima della sospensione del anestesia per inalazione, amministrare bupenorphine (0,1 mg / kg) per via intramuscolare di fornire immediata analgesia post-intervento chirurgico. Continuare bupenorphine (0,1 mg / kg) ogni 12 ore per 24-48 ore per mantenerepost-operatorio analgesia. </li><li> Monitorare i maiali per complicazioni post-chirurgiche ogni 8-12 ore per un periodo di 7 giorni. </li><li> Raccogliere la linfa in bottiglie da 500 ml di lavaggio in polipropilene, rivestito con etilendiammina tetraacetico (EDTA), e integrato con antibiotici; penicillina (6.000 UI), streptomicina (6 mg) e amfotericina B (3 mg) ogni 12 ore per un periodo di 7 giorni. </li></ol> 4. Quantificazione delle lipoproteine ​​ApoB48, trigliceridi, colesterolo e proteine ​​totali raccolti da Lymph <ol><li> Centrifugare il campione linfa a 1.800 xg per 5 minuti a 4 ° C. Raccogliere il surnatante e usarlo per la quantificazione dei trigliceridi, colesterolo e proteine ​​totali. </li><li> Dividere il surnatante in tre campioni: un campione non diluito, un 01:20 acqua distillata campione diluito e un campione finale diluito 1: 100 con acqua distillata. </li><li> Utilizzare il surnatante non diluito per misurare i livelli di colesterolo, con un kit disponibile in commercio. </li><li> Utilizzare il 01:20 e 01:100 campioni diluiti per misurare trigliceridi e livelli di proteine ​​totali con un kit disponibile in commercio e il dosaggio della proteina acida totale bicinconinico rispettivamente. </li></ol> 5. Quantificazione delle lipoproteine ​​ApoB48, Raccolti da Linfa 38 <ol><li> Determinare la concentrazione di lipoproteina ApoB48 con un adeguato sistema immunitario metodo di Western Blotting 38. linfa totale separata con 3-8% Tris-acetate- sodio dodecil solfato gel di poliacrilammide (SDS-PAGE). </li><li> Trasferire le proteine ​​separate da una membrana di fluoruro di polivinile (0,45 micron) e incubare con un anticorpo policlonale di capra al ApoB (1: 4.000), poi si legano con un anticorpo secondario anti-capra. </li><li> Quantificare la lipoproteina ApoB48 con chemiluminescenza utilizzando un confronto densitometrica lineare con roditore purificata standard di proteine ​​ApoB48. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Raccolta linfa intestinale è un ottimo metodo per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidi 8-12 e 13-15 farmaco metabolismo, metastasi del cancro 16,17, il traffico delle cellule e la funzione immunitaria 18-26, in vari modelli sperimentali animali. Infatti, la capacità di raccogliere grandi quantità di ciascuna periferica (afferente) e centrale (efferente e grandi vasi tronco) linfa per un periodo prolungato è particolarmente importante per la comprensione dei cambiamenti temporali che si verificano in popolazioni cellulari seguenti sfide con agenti immunomodulatori 18-22 , 25,26. Allo stesso modo, la raccolta di linfa centrale è stata utile per delineare i processi coinvolti nel metabolismo delle lipoproteine ​​8-12. L&#39;utilità di raccolta linfatica dipende dal successo della procedura di cateterizzazione e la pervietà del catetere nel vaso linfatico. Cateterizzazione dei principali vasi linfatici coinvolti nelintestinale drenaggio linfatico in grandi animali in genere utilizza uno dei tre approcci chirurgici. La prima tecnica utilizza un approccio spalla cranica per entrare nel dotto toracico sovrastante la vena giugulare comune (mucca dotto toracico) 5. Il secondo utilizza un approccio fianco superiore sopra l&#39;aspetto medio-laterale del rene destro 32,33. La terza tecnica, come descritto in questo video si avvale sia una linea mediana ventrale o paramediano 22,35 laparotomia per esporre il tronco linfatico intestinale vicino al pancreas e giustapposti l&#39;aspetto ventrale destro della vena porta 22,36,37. Sebbene sia il fianco superiore e della linea mediana ventrale tecniche chirurgiche permettono cateterizzazione del tronco linfatico intestinale, riteniamo che l&#39;approccio linea mediana ventrale consente una migliore esposizione della nave con uno spazio adeguato all&#39;interno dell&#39;addome superiore per gestire e manipolare il vaso. È importante sottolineare che, come in qualsiasi intervento chirurgico sperimentale ci sono passi che sono partilare di fondamentale importanza per il buon esito della procedura sperimentale. Ci sono quattro aree chiave che richiedono una particolare attenzione utilizzando l&#39;approccio linea mediana ventrale per accedere al vaso linfatico intestinale. In primo luogo, è necessario ottimo afflusso di sangue per l&#39;intestino esteriorizzato, come prolungata circolazione compromessa per l&#39;intestino induce ischemico necrosi della mucosa intestinale e il fallimento chirurgico. In questa procedura un &#39;asciugamano imbracatura&#39; riduce la tensione sui vasi sanguigni mesenterici sostenendo il peso degli intestini assicurando eccellenti perfusione tissutale. In secondo luogo, attente manipolazioni del vaso compreso: il rilascio della nave dalla fascia circostante e tessuto adiposo, inserendo e saldamente fissare il catetere entro il recipiente per la raccolta della linfa lungo termine è fondamentale per cateterizzazione successo. Infatti, si suggerisce che l&#39;integrità strutturale dei vasi nei suini neonatali non è robusto come negli animali maturi e come tale può facilmente strappare 39,40 </sup&gt;. Utilizzando applicatori Q-tip a lentamente e delicatamente separato strati fasciali e oggetti contundenti-ended multa per passare la sutura sotto l&#39;imbarcazione riduce notevolmente la puntura accidentale o lacerazione del vaso linfatico. un trasporto sicuro della nave crea spesso una nave friabile con debole making struttura cateterizzazione molto impegnativo. Terzo, una causa comune di guasto cateterizzazione è l&#39;involontaria &#39;tira-out del catetere&#39; dal vaso linfatico. Assicurare il catetere direttamente al vaso riduce l&#39;incidenza di perdita catetere. Questo viene ottenuto legando il catetere direttamente al vaso con la sutura caudale impiegato per dilatare il vaso. Infine, è importante garantire un buon flusso linfatico è presente cateterizzazione successivo e prima della chiusura addome. Infatti, se il flusso linfatico è lenta durante la procedura, nel tempo questo induce la formazione di coaguli all&#39;interno del catetere e riduce notevolmente il periodo di raccolta linfa. In exper dell&#39;investigatoreience, con raccolta linfa lungo termine della linfa non-intestinale in pecore 41, è molto difficile rimuovere il coagulo dal catetere come il coagulo si sviluppa all&#39;interno del catetere ed è profonda all&#39;interno del vaso linfatico. Di conseguenza, questo ridurrà di molto (circa il 40%) il numero di animali cateterizzati con successo per la sperimentazione a lungo termine (dati non pubblicati). Pertanto, se il flusso linfatico è rallentato o è interrotto durante la procedura, il catetere linfatico deve essere reinserito cranialmente 0,5-1 cm dal sito di cateterizzazione iniziale. Tutti i modelli utilizzati per indagare questioni scientifiche hanno limitazioni inherant e cateterizzazione del tronco linfatico intestinale non fa eccezione. Il limite più pronunciato per la procedura è l&#39;incapacità di isolare efficacemente, cateterizzarla il vaso linfatico, e stabilizzare il catetere all&#39;interno del vaso. Come tale, questa procedura richiede persone con eccellenti competenze tecniche chirurgicheS. Un altro limite significativo è che i tempi chirurgici prolungati durante chirurgia addominale aumenta il rischio e morbilità e mortalità post-chirurgica. In particolare, però, i suini in nostro esperimento recuperato in fretta da un intervento chirurgico e non ci sono state complicazioni come infezioni, ileo intestinale, lesioni dei tessuti eccessiva o inappetenza dopo la procedura. Certamente, sono stati osservati i maiali per essere brillante, reattivo, deambulazione e mangiare normalmente post-operatorio 24 ore e questo ha continuato durante il periodo di raccolta della linfa di 7 giorni. In particolare, anche se chimiche siero o emocromo completo, non sono state valutate in questi maiali seguito l&#39;esperimento di 7 giorni, precedente lavoro di investigatori nella raccolta linfa a lungo termine in pecore 41 ha dimostrato che le pecore cateterizzati non sono mai stati leucopenici, linfocitopenico, ipoproteinemia con squilibri elettrolitici o clinicamente raffigurante cattive condizioni di salute (dati non pubblicati). Importante e, come detto sopra, questa osservazione correla catheterimaiali Zed anche la visualizzazione di caratteristiche cliniche di buona salute. È interessante notare, gli investigatori hanno notato variazioni nel volume del flusso linfatico. Il flusso era maggiore durante il giorno quando i maiali sono stati alimentando e attivo con circa il 70% della linfa raccolta giornaliera verificano in questo momento. Il restante 30% del flusso della linfa avviene la sera durante il riposo e il sonno. Ulteriore caratterizzazione dei campioni linfonodi sono forniti nelle figure 1, 2 e Tabella 1. La Figura 1 mostra una piccola quantità di contaminazione con circa il 15% di plasma derivato ApoB100. La presenza di lipoproteine ​​plasma entro linfatico intestinale è una osservazione che si verifica spesso nei suini 42. In lattoni, la maggioranza della lipoproteina è prodotto dal fegato e rilasciato nel plasma. Dal plasma, ApoB100 probabile filtra nella raccolta lacteals 42 e poi attraverso la rete vascolare linfaticafognature nel tronco linfatico intestinale. Vari metodi di cromatografia sono utilizzati per valutare colesterolo, trigliceridi e fosfolipidi altri contenuti nei campioni raccolti linfatici 42-45. Il singolo picco nella figura 2 dimostra chiaramente il colesterolo e trigliceridi sono presenti nella frazione chilomicroni. Questo metodo è una tecnica semplice e preciso della profilatura lipoproteine ​​linfa e deve essere considerato al momento di valutare la purezza dei campioni di chilomicroni da linfa intestinale 45. Infine, tabella 1 fornisce i componenti biochimici della linfa intestinale raccolti da suini neonatali 7 giorni post-operatorio. In conclusione, cateterismo a lungo termine del tronco linfatico intestinale è successo giovani suini. Con questa tecnica, cateterizzazione linfatica può essere utilizzato per raccogliere e analizzare componenti del metabolismo lipidico. La purezza della linfa, quantità di linfa prodotta e le quantità di componenti del metabolismo lipidicosono simili ai valori presenti nel maiale linfa centrale in altri esperimenti 9,25,26,42. I risultati indicano che l&#39;impiego di un approccio chirurgico linea mediana ventrale con un&#39;attenta dissezione dei tessuti e dei vasi gestione cateterizzare il tronco linfatico intestinale nei giovani maiali è un ottimo metodo per raccogliere grandi quantità di linfa centrale.

Il sistema linfatico è una zona poco studiato della fisiologia. Modelli preclinici di cateterizzazione linfatico si verificano in diverse specie animali 1-8 e sono utilizzati da industrie farmaceutiche e istituti di ricerca per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidico 8-12 e 13-15 metabolismo dei farmaci, metastasi del cancro 16 con trattamento sperimentale 17, e la funzione immunitaria 18 -26. Questo studio esplora l&#39;utilizzo di cateterizzazione intestinale tronco linfa in un modello di maiale domestico per misurare i componenti del metabolismo delle lipoproteine. metabolismo Lipoprotein è coinvolta nella produzione e secrezione di chilomicroni, così come i cambiamenti in lipidi associati e proteine ​​totali. Queste sono considerazioni importanti in quanto vi sono grandi differenze nel metabolismo lipidico tra modelli di roditori comunemente usati e gli esseri umani e in quanto tali, impiegando modelli suini per raccogliere linfa intestinale potrebbe fornire informazioni più comparabili per lo studio dei lipidi memetabolismo nelle persone 27-31. Diverse tecniche chirurgiche vengono utilizzati per raccogliere la linfa intestinale in grandi specie animali: un approccio spalla cranica (vale a dire, toracico condotto cateterizzazione) 5, una laterale approccio fianco superiore 32-34, ed una linea mediana ventrale o approccio paramediano 22,35. Questo video descrive in dettaglio la procedura chirurgica in suina utilizzando un approccio chirurgico ventrale linea mediana per la cateterizzazione del tronco linfatico intestinale. Un&#39;attenta tecnica consente chirurgiche questo metodo di cateterizzazione linfatico per raccogliere grandi quantità di linfa ei componenti per periodi di tempo prolungati. Questa tecnica apre una miriade di applicazioni per molte discipline che esaminano le varie funzioni fisiologiche. Le applicazioni potrebbero includere, ma non sono limitati a, tutto lipoproteine ​​corporeo e il metabolismo dei lipidi, immunosorveglianza, genesi tumorale e le metastasi, la funzione intestinale, e la svient e la progressione della malattia infiammatoria intestinale.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> cateterizzazione linfatico del tronco linfatico intestinale dei suini neonatale permette la raccolta di circa 1 L / 24 ore di linfa centrale nel corso di un periodo di 7 giorni. La linfa raccolte in questo esperimenti conteneva componenti del metabolismo lipidico, proteine ​​cioè totale linfa, ApoB48 lipoproteine, trigliceridi, proteine ​​totali e colesterolo. Tabella 1 evidenzia importi rappresentativi di tali componenti lipidici da campioni di linfa pool di tre maiali. In particolare, il flusso linfatico e costituenti lipidici sono in linea con i valori della linfa centrale riportati da altri ricercatori seguenti cateterizzazione dei vasi linfatici intestinali (flusso linfatico 570 ± 158-979 ± 284 ml / 24 ore 25, 360 ± 120 MLL / 24 ore per 1080 ± 720 ml / 24 ore 26; trigliceridi 687 ± 110 mg / dL 9; colesterolo 63,1 ± 5,6 mg / dL 9); indica il corretto posizionamento del catetere nel vaso linfatico. ontent &quot;fo: together.within-page keep-=&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig2.jpg" /> Figura 2. Un Liquid Chromatography (FPLC) profilo veloce Protein dimostrare la purezza della preparazione chylomicron in pig neonatale linfatico intestinale. Linfa raccolti da tre porcellini è una separazione tramite un protocollo di gradiente di densità ultracentrifugazione 1.006 g / ml. Il profilo mostra un unico picco per (A) colesterolo e (B) dei trigliceridi nel campione linfa. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53457/53457fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig1.jpg" /> Figura 1. Un rappresentante analisi Western Blot dimostrando il contributo di ApoB48 e apoB100 lipoproteine ​​nel maiale neonatale linfatico intestinale. Linfa raccolti da tresuini è separato tramite un protocollo gradiente di densità ultracentrifugazione 1.006 g / ml. La figura mostra una piccola quantità di contaminazione con circa il 15% di plasma derivato ApoB100. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53457/53457fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> linfonodi Caratteristiche </td></tr><tr><td> ApoB48 (mg / ml) </td><td> 3022,4 ± 440,4 </td></tr><tr><td> Trigliceridi (mg / dL) </td><td> 607 ± 203,6 </td></tr><tr><td> Colesterolo (mg / dL) </td><td> 58.5 ± 9.6 </td></tr><tr><td colspan="2"> I risultati sono espressi come media ± deviazione standard (n = 3) </td></tr></tbody></table> Tabella 1. I componenti della linfa intestinale raccolti da maiali neonati 7 giorni post-intervento chirurgico. I risultati sono ripetuti meaSures di linfa e espressi come media ± DS (n = 3)

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Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

A lungo termine cateterizzazione della intestinale linfa Tronco e Raccolta della linfa in neonatali Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K Views.  University of Alberta. We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Video: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Multispectral Real-time Fluorescence Imaging for Intraoperative Detection of the Sentinel Lymph Node in Gynecologic Oncology

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical excision of the tumor with a full lymphadenectomy in the drainage area of the tumor. However, removal of lymph nodes is associated with increased morbidity due to infection, wound breakdown and lymphedema.4,5 As an alternative, the sentinel lymph node procedure (SLN) was developed several decades ago to detect the first draining lymph node from the tumor.6 In case of lymphogenic dissemination, the SLN is the first lymph node that is affected (Figure 1). Hence, if the SLN does not contain metastases, downstream lymph nodes will also be free from tumor metastases and need not to be removed. The SLN procedure is part of the treatment for many tumor types, like breast cancer and melanoma, but also for cancer of the vulva and cervix.7 The current standard methodology for SLN-detection is by peritumoral injection of radiocolloid one day prior to surgery, and a colored dye intraoperatively. Disadvantages of the procedure in cervical and vulvar cancer are multiple injections in the genital area, leading to increased psychological distress for the patient, and the use of radioactive colloid.
Multispectral fluorescence imaging is an emerging imaging modality that can be applied intraoperatively without the need for injection of radiocolloid. For intraoperative fluorescence imaging, two components are needed: a fluorescent agent and a quantitative optical system for intraoperative imaging. As a fluorophore we have used indocyanine green (ICG). ICG has been used for many decades to assess cardiac function, cerebral perfusion and liver perfusion.8 It is an inert drug with a safe pharmaco-biological profile. When excited at around 750 nm, it emits light in the near-infrared spectrum around 800 nm. A custom-made multispectral fluorescence imaging camera system was used.9.
The aim of this video article is to demonstrate the detection of the SLN using intraoperative fluorescence imaging in patients with cervical and vulvar cancer. Fluorescence imaging is used in conjunction with the standard procedure, consisting of radiocolloid and a blue dye. In the future, intraoperative fluorescence imaging might replace the current method and is also easily transferable to other indications like breast cancer and melanoma.

Fluorescence imaging is a promising innovative modality for image-guided surgery in surgical oncology. In this video we describe the technical procedure for detection of the sentinel lymph node using fluorescence imaging as showcased in gynecologic oncologicy. A multispectral fluorescence camera system, together with the fluorescent agent indocyanine green, is applied.

Multispettrali in tempo reale immagini a fluorescenza per il rilevamento intraoperatoria del linfonodo sentinella in Oncologia Ginecologica

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical ...

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A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, perfusion deficit, hypoxic-ischemic encephalopathy, pulmonary hypertension, vasculopathic enterocolitis, renal failure and thrombo-embolic complications. Animal models are developed to help us understand the patho-physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. In comparison to rodents and newborn lambs, the newborn piglet has been proven to be a valuable model. The newborn piglet has several advantages including similar development as that of 36-38 weeks human fetus with comparable body systems, large body size (&tilde;1.5-2 kg at birth) that allows the instrumentation and monitoring of the animal and controls the confounding variables of hypoxia and hemodynamic derangements.
We here describe an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia and allow us to examine the systemic and regional hemodynamic changes during the asphyxiating and reoxygenation process as well as the respective effects of interventions. Further, the model has the advantage of studying multi-organ failure or dysfunction simultaneously and the interaction with various body systems. The experimental model is a non-survival procedure that involves the surgical instrumentation of newborn piglets (1-3 day-old and 1.5-2.5 kg weight, mixed breed) to allow the establishment of mechanical ventilation, vascular (arterial and central venous) access and the placement of catheters and flow probes (Transonic Inc.) for the continuously monitoring of intra-vascular pressure and blood flow across different arteries including main pulmonary, common carotid, superior mesenteric and left renal arteries. Using these surgically instrumented piglets, after stabilization for 30-60 minutes as defined by Z&lt;10% variation in hemodynamic parameters and normal blood gases, we commence an experimental protocol of severe hypoxemia which is induced via normocapnic alveolar hypoxia. The piglet is ventilated with 10-15% oxygen by increasing the inhaled concentration of nitrogen gas for 2h, aiming for arterial oxygen saturations of 30-40%. This degree of hypoxemia will produce clinical asphyxia with severe metabolic acidosis, systemic hypotension and cardiogenic shock with hypoperfusion to vital organs. The hypoxia is followed by reoxygenation with 100% oxygen for 0.5h and then 21% oxygen for 3.5h. Pharmacologic interventions can be introduced in due course and their effects investigated in a blinded, block-randomized fashion.

Large animal models have good translational values in the examination of physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. Using newborn piglets, we develop an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia which has advantages of studying the systemic and regional hemodynamics, oxygen transport with biochemical and pathologic pathways and correlations.

Un modello di asfissia neonatale suina

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

Lavage indotta surfattante esaurimento nei suini come un modello della sindrome da distress respiratorio acuto (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Surgical Placement of Catheters for Long-term Cardiovascular Exercise Testing in Swine

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early cardiopulmonary dysfunction is difficult to diagnose, particularly in animal models, as cardiopulmonary function is often measured invasively, requiring anesthesia. As many anesthetic agents are cardiodepressive, subtle changes in cardiovascular function may be masked. In contrast, chronic instrumentation allows for measurement of cardiopulmonary function in the awake state, so that measurements can be obtained under quiet resting conditions, without the effects of anesthesia and acute surgical trauma. Furthermore, when animals are properly trained, measurements can also be obtained during graded treadmill exercise.
Flow probes are placed around the aorta or pulmonary artery for measurement of cardiac output and around the left anterior descending coronary artery for measurement of coronary blood flow. Fluid-filled catheters are implanted in the aorta, pulmonary artery, left atrium, left ventricle and right ventricle for pressure measurement and blood sampling. In addition, a 20 G&#160;catheter is positioned in the anterior interventricular vein to allow coronary venous blood sampling.
After a week of recovery, swine are placed on a motor-driven treadmill, the catheters are connected to pressure and flow meters, and swine are subjected to a five-stage progressive exercise protocol, with each stage lasting 3 min. Hemodynamic signals are continuously recorded and blood samples are taken during the last 30 sec of each exercise stage.
The major advantage of studying chronically instrumented animals is that it allows serial assessment of cardiopulmonary function, not only at rest but also during physical stress such as exercise. Moreover, cardiopulmonary function can be assessed repeatedly during disease development and during chronic treatment, thereby increasing statistical power and hence limiting the number of animals required for a study.

Here we present a protocol to assess cardiopulmonary function in awake swine, at rest and during graded treadmill exercise. Chronic instrumentation allows for repeated hemodynamic measurements uninfluenced by cardiodepressive anesthetic agents.

Posizionamento chirurgico di cateteri per durata Esercizio cardiovascolare test in Swine

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early ...

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces and has been implicated in the clearance of neurotoxic peptides such as amyloid-beta. Impaired glymphatic function exacerbates disease pathology in animal models of neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's, which highlights the importance of understanding this clearance system. The glymphatic system is often studied by cisterna magna cannulations (CMc), where tracers are delivered directly into the cerebrospinal fluid (CSF). Most studies, however, have been carried out in rodents. Here, we demonstrate an adaptation of the CMc technique in pigs. Using CMc in pigs, the glymphatic system can be studied at a high optical resolution in gyrencephalic brains and in doing so bridges the knowledge gap between rodent and human glymphatics.

This article presents a step-by-step protocol for the direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs.

Impianto diretto di cannule nella Cisterna Magna dei Suini

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Neuroscienze

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

Osservazione microscopica della dinamica dei linfociti nelle patch di Rat Peyer

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

Catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine nei suini

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

Autore in primo piano: Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello suino preclinico  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

A lungo termine cateterizzazione della intestinale linfa Tronco e Raccolta della linfa in neonatali Pigs

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Multispettrali in tempo reale immagini a fluorescenza per il rilevamento intraoperatoria del linfonodo sentinella in Oncologia Ginecologica

Un modello di asfissia neonatale suina

Lavage indotta surfattante esaurimento nei suini come un modello della sindrome da distress respiratorio acuto (ARDS)

Posizionamento chirurgico di cateteri per durata Esercizio cardiovascolare test in Swine

Impianto diretto di cannule nella Cisterna Magna dei Suini

Osservazione microscopica della dinamica dei linfociti nelle patch di Rat Peyer

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino