The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

Tutte le procedure su animali sperimentali descritte in entrambi i video e manoscritti sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali e hanno seguito le linee guida stabilite dal Consiglio canadese di cura degli animali. 1. Anestesia chirurgica e preparazione chirurgica dei maiali neonatali <ol><li> In un antibagno separato, Premedicare 25 kg maiali vicino alla base del collo con una intramuscolare cocktail di farmaci sedativi-anestetico contenente: azaperone (0,3 mg / kg), ketamina cloridrato (10 mg / kg), la dexmedetomidina (15 mg / kg). Nota: Aggiungere buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) nel cocktail di droga pre-anestetico per una maggiore controllo del dolore intra-operatorio. </li><li> Anestetizzare i maiali con inalato gas inalazione isoflurano (4-5% isoflurano a 500 ml-1000 ml / min O 2) utilizzando una maschera. Visualizza le corde vocali con un campo di applicazione della laringe veterinario (lunga 17-25 cm lama dritta), e applicare attualità il 10% lidocaina spay alla vocecorde. Lasciare lo spray lidocaina per contattare le corde vocali 30-60 secondi prima di intubazione per ridurre la possibilità di spasmi delle corde vocali e ostruzione delle vie aeree. </li><li> Intubare i maiali passando un tubo endotracheale a manicotto (5,0-7,0 mm di diametro interno (ID)) tra le corde vocali e mantenere la dell&#39;anestesia con il gas isoflurano (0,5-2,0% isoflurano a 1.000-2.000 ml / min O 2) utilizzando una chiusa circuito rebreathing sistema di anestesia durante l&#39;intervento chirurgico. Valutare il livello di anestesia dal tono della mascella, ed entrambi i pedali e palpebrali risposte riflesse. gas anestetico scaduto è scavenging e ventilato al di fuori della sala operatoria. </li><li> Pulire la superficie esterna del padiglione auricolare con il 2,0% clorexidina soluzione lavaggio chirurgico seguito da un risciacquo alcool isopropilico al 70%. Con un catetere endovenoso 20 G, cateterizzare una vena orecchio per fornire fluidi per via endovenosa (soluzione di Ringer lattato; 5-10 ml / kg / ora) durante l&#39;intervento chirurgico. Fissare un pulsossimetro alla superficie della mucosa della lingua con mednastro iCal per monitorare la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigenazione del sangue periferico (SpO2). </li><li> Posizionare il maiale anestetizzato in posizione reclinata dorsale e radere l&#39;addome ventrale dalla metà torace caudalmente all&#39;aspetto ventrale del pube. Pulire questa zona con due alternando 2,0% clorexidina scrub chirurgico e lavaggi acqua sterile. </li><li> Trasferire il maiale anestetizzato alla suite chirurgica e applicare il lavaggio chirurgico finale del 70% di risciacquo alcol isopropilico, lasciarlo asciugare, e poi drappo l&#39;animale. </li><li> Inserire una sonda di temperatura rettale di circa 2-4 cm nel retto per controllare la temperatura del corpo. Posizionare i maiali su una piastra elettrica a ricircolo d&#39;acqua per mantenere la temperatura corporea normale (38-40 ° C) durante la procedura chirurgica. </li><li> Passare il maiale con quattro asciugamani teli disposti in uno schema quadrante sovrastante intorno all&#39;addome. Posizionare il primo drappo attraverso xiphisternum, il secondo telo lungo faccia laterale del ventre a circa 5 cm lateralmente alla linea mediana addominale. Posizionare il terzo copre tutta la cresta ileale del bacino e il quarto drappeggio, come il secondo telo (anche sul lato opposto), è posto lungo la faccia laterale dell&#39;addome circa 5 cm lateralmente alla linea mediana addominale. </li><li> Mettere un grande drappo tavolo, con una fessura di apertura che consente l&#39;accesso al sito chirurgico, nel corso dei sottostanti tende asciugamano e coprire il maiale e tutto il tavolo operatorio. Il drappo finale è un steri-drappo monouso posto sopra il grande tavolo drappeggio. </li></ol> 2. chirurgia addominale e cateterizzazione della intestinale linfatico Tronco <ol><li> Fare un 20 centimetri incisione cutanea con una lama di bisturi per esporre i muscoli addominali sottostanti. Incidere strati muscolari addominali con elettrocauterizzazione mono-polare (20 impostazione Watt) per esporre il peritoneo parietale. Aprire un segmento lineare 20 cm peritoneo parietale con le forbici Metzenbaum per accedere visceri addominali e dei vasi linfatici. </li><li&gt; Posizionare riavvolgitore craniale dell&#39;incisione chirurgica per mantenere la cavità addominale aperta per la durata dell&#39;intervento. </li><li> Bagnare tutti i tessuti con acqua calda (37 ° C) soluzione salina sterile per tutta la procedura chirurgica. Sollevare delicatamente un ampio segmento della intestinali, comprese colon, cieco, ileo e digiuno dalla cavità addominale e esteriorizzare al fianco sinistro del maiale per accedere alla parte superiore dell&#39;addome, fegato e vasi linfatici. Fissare l&#39;intestino esteriorizzato in posizione con tende asciugamani aggiuntivi in ​​modo da formare una fionda per sostenere delicatamente l&#39;intestino. </li><li> Individuare il vaso linfatico, depone circa 4 cm cranio-mediale della vena renale destra, 6 cm ventrale caudale-medial- dei capireparto cavali e sotto l&#39;aspetto viscerale del lobo destro del fegato nei pressi del pancreas 22,36,37. Identificare il vaso linfatico come struttura traslucido giustapposto al segmento ventrale destro della vena porta 36,37. </li><li> Separare il Vess linfaticaEL dalla fascia circostanti delicatamente prendere in giro via il tessuto attaccato con applicatori Q-Tip. Una volta che gli aspetti laterali del recipiente sono separati dal tessuto circostante, creare un&#39;apertura &quot;tunnel&quot; sotto l&#39;imbarcazione con fine smussato punta pinze. </li><li> Passare tre 2-0 punti di sutura di seta sotto il vaso linfatico con una pinza sottile. Legare la sutura più caudale prima per occludere, dilatare e riempire il vaso di linfa. Volutamente lasciare le estremità di questa sutura relativamente lungo (4 cm) per fissare il catetere al vaso linfatico. Inserire altre due suture separate 1,0 cm l&#39;una dall&#39;altra e sono circa 1,0-1,5 cm cranici alla sutura caudale protetto. Lasciare questi due punti di sutura con un &#39;unica legame legatura sciolto&#39; per consentire la più rapida messa in sicurezza del catetere nel vaso. Nota: Il segmento del vaso linfatico situato tra la sutura legatura più caudale e suturare mezzo (dei due suture craniche) è il sito per cateterizzazione. Per quanto riguarda sumateriale tura, 2-0 Polyglactin sutura può sostituire 2-0 punti di sutura in seta, se necessario. </li><li> Tagliare un piccolo foro nel contenitore con forbici iris e dilatare il vaso con pinza sottile smussato. Inserire circa 1.0-1.5 cm di tubo del catetere specializzata (4.06 Diametro esterno (OD) X 2,31 millimetri ID) con una estremità smussata nel recipiente e legare le due suture craniche per fissare il catetere in posizione. Utilizzare i lati lunghi di sutura della sutura caudale per fissare il catetere alla nave. </li><li> Lavare l&#39;intestino esteriorizzato con abbondanti quantità di soluzione salina calda e delicatamente riportarlo alla cavità addominale assicurare il corretto posizionamento anatomica dell&#39;intestino. </li><li> Esteriorizzare il catetere a metà fianco sinistro (5-10 cm ventralmente dalla fossa paralombare). Effettuare una incisione cutanea con un bisturi e passare un trocar dalla cavità addominale per la superficie della pelle per creare un&#39;apertura per l&#39;esteriorizzazione del catetere. Utilizzare un grande pinza Kelly esteriorizzare il catetere dal cav addominaleIty attraverso l&#39;apertura trequarti. </li><li> Chiudere il peritoneo parietale con un semplice modello di sutura continua di 2-0 Polyglactin di sutura con un ago rotondo (conico). Chiudere gli strati muscolari addominali con un semplice modello di sutura interrotta con una sutura 2-0 Polyglactin su un ago rotondo. </li><li> Chiudere la pelle in un modello sottocuticolare con 2-0 Polyglactin di sutura su un ago di taglio. Fissare il catetere esteriorizzato alla pelle con un modello di sutura a borsa di e una sutura 2-0 in nylon su un ago di taglio. </li><li> Inserire un rivestimento speciale sul maiale pur anestetizzati per facilitare il suo posizionamento e ridurre lo stress del maiale durante il recupero. </li></ol> Recupero 3. post-chirurgica e la linfa Collection <ol><li> Circa 10 minuti prima della sospensione del anestesia per inalazione, amministrare bupenorphine (0,1 mg / kg) per via intramuscolare di fornire immediata analgesia post-intervento chirurgico. Continuare bupenorphine (0,1 mg / kg) ogni 12 ore per 24-48 ore per mantenerepost-operatorio analgesia. </li><li> Monitorare i maiali per complicazioni post-chirurgiche ogni 8-12 ore per un periodo di 7 giorni. </li><li> Raccogliere la linfa in bottiglie da 500 ml di lavaggio in polipropilene, rivestito con etilendiammina tetraacetico (EDTA), e integrato con antibiotici; penicillina (6.000 UI), streptomicina (6 mg) e amfotericina B (3 mg) ogni 12 ore per un periodo di 7 giorni. </li></ol> 4. Quantificazione delle lipoproteine ​​ApoB48, trigliceridi, colesterolo e proteine ​​totali raccolti da Lymph <ol><li> Centrifugare il campione linfa a 1.800 xg per 5 minuti a 4 ° C. Raccogliere il surnatante e usarlo per la quantificazione dei trigliceridi, colesterolo e proteine ​​totali. </li><li> Dividere il surnatante in tre campioni: un campione non diluito, un 01:20 acqua distillata campione diluito e un campione finale diluito 1: 100 con acqua distillata. </li><li> Utilizzare il surnatante non diluito per misurare i livelli di colesterolo, con un kit disponibile in commercio. </li><li> Utilizzare il 01:20 e 01:100 campioni diluiti per misurare trigliceridi e livelli di proteine ​​totali con un kit disponibile in commercio e il dosaggio della proteina acida totale bicinconinico rispettivamente. </li></ol> 5. Quantificazione delle lipoproteine ​​ApoB48, Raccolti da Linfa 38 <ol><li> Determinare la concentrazione di lipoproteina ApoB48 con un adeguato sistema immunitario metodo di Western Blotting 38. linfa totale separata con 3-8% Tris-acetate- sodio dodecil solfato gel di poliacrilammide (SDS-PAGE). </li><li> Trasferire le proteine ​​separate da una membrana di fluoruro di polivinile (0,45 micron) e incubare con un anticorpo policlonale di capra al ApoB (1: 4.000), poi si legano con un anticorpo secondario anti-capra. </li><li> Quantificare la lipoproteina ApoB48 con chemiluminescenza utilizzando un confronto densitometrica lineare con roditore purificata standard di proteine ​​ApoB48. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Raccolta linfa intestinale è un ottimo metodo per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidi 8-12 e 13-15 farmaco metabolismo, metastasi del cancro 16,17, il traffico delle cellule e la funzione immunitaria 18-26, in vari modelli sperimentali animali. Infatti, la capacità di raccogliere grandi quantità di ciascuna periferica (afferente) e centrale (efferente e grandi vasi tronco) linfa per un periodo prolungato è particolarmente importante per la comprensione dei cambiamenti temporali che si verificano in popolazioni cellulari seguenti sfide con agenti immunomodulatori 18-22 , 25,26. Allo stesso modo, la raccolta di linfa centrale è stata utile per delineare i processi coinvolti nel metabolismo delle lipoproteine ​​8-12. L&#39;utilità di raccolta linfatica dipende dal successo della procedura di cateterizzazione e la pervietà del catetere nel vaso linfatico. Cateterizzazione dei principali vasi linfatici coinvolti nelintestinale drenaggio linfatico in grandi animali in genere utilizza uno dei tre approcci chirurgici. La prima tecnica utilizza un approccio spalla cranica per entrare nel dotto toracico sovrastante la vena giugulare comune (mucca dotto toracico) 5. Il secondo utilizza un approccio fianco superiore sopra l&#39;aspetto medio-laterale del rene destro 32,33. La terza tecnica, come descritto in questo video si avvale sia una linea mediana ventrale o paramediano 22,35 laparotomia per esporre il tronco linfatico intestinale vicino al pancreas e giustapposti l&#39;aspetto ventrale destro della vena porta 22,36,37. Sebbene sia il fianco superiore e della linea mediana ventrale tecniche chirurgiche permettono cateterizzazione del tronco linfatico intestinale, riteniamo che l&#39;approccio linea mediana ventrale consente una migliore esposizione della nave con uno spazio adeguato all&#39;interno dell&#39;addome superiore per gestire e manipolare il vaso. È importante sottolineare che, come in qualsiasi intervento chirurgico sperimentale ci sono passi che sono partilare di fondamentale importanza per il buon esito della procedura sperimentale. Ci sono quattro aree chiave che richiedono una particolare attenzione utilizzando l&#39;approccio linea mediana ventrale per accedere al vaso linfatico intestinale. In primo luogo, è necessario ottimo afflusso di sangue per l&#39;intestino esteriorizzato, come prolungata circolazione compromessa per l&#39;intestino induce ischemico necrosi della mucosa intestinale e il fallimento chirurgico. In questa procedura un &#39;asciugamano imbracatura&#39; riduce la tensione sui vasi sanguigni mesenterici sostenendo il peso degli intestini assicurando eccellenti perfusione tissutale. In secondo luogo, attente manipolazioni del vaso compreso: il rilascio della nave dalla fascia circostante e tessuto adiposo, inserendo e saldamente fissare il catetere entro il recipiente per la raccolta della linfa lungo termine è fondamentale per cateterizzazione successo. Infatti, si suggerisce che l&#39;integrità strutturale dei vasi nei suini neonatali non è robusto come negli animali maturi e come tale può facilmente strappare 39,40 </sup&gt;. Utilizzando applicatori Q-tip a lentamente e delicatamente separato strati fasciali e oggetti contundenti-ended multa per passare la sutura sotto l&#39;imbarcazione riduce notevolmente la puntura accidentale o lacerazione del vaso linfatico. un trasporto sicuro della nave crea spesso una nave friabile con debole making struttura cateterizzazione molto impegnativo. Terzo, una causa comune di guasto cateterizzazione è l&#39;involontaria &#39;tira-out del catetere&#39; dal vaso linfatico. Assicurare il catetere direttamente al vaso riduce l&#39;incidenza di perdita catetere. Questo viene ottenuto legando il catetere direttamente al vaso con la sutura caudale impiegato per dilatare il vaso. Infine, è importante garantire un buon flusso linfatico è presente cateterizzazione successivo e prima della chiusura addome. Infatti, se il flusso linfatico è lenta durante la procedura, nel tempo questo induce la formazione di coaguli all&#39;interno del catetere e riduce notevolmente il periodo di raccolta linfa. In exper dell&#39;investigatoreience, con raccolta linfa lungo termine della linfa non-intestinale in pecore 41, è molto difficile rimuovere il coagulo dal catetere come il coagulo si sviluppa all&#39;interno del catetere ed è profonda all&#39;interno del vaso linfatico. Di conseguenza, questo ridurrà di molto (circa il 40%) il numero di animali cateterizzati con successo per la sperimentazione a lungo termine (dati non pubblicati). Pertanto, se il flusso linfatico è rallentato o è interrotto durante la procedura, il catetere linfatico deve essere reinserito cranialmente 0,5-1 cm dal sito di cateterizzazione iniziale. Tutti i modelli utilizzati per indagare questioni scientifiche hanno limitazioni inherant e cateterizzazione del tronco linfatico intestinale non fa eccezione. Il limite più pronunciato per la procedura è l&#39;incapacità di isolare efficacemente, cateterizzarla il vaso linfatico, e stabilizzare il catetere all&#39;interno del vaso. Come tale, questa procedura richiede persone con eccellenti competenze tecniche chirurgicheS. Un altro limite significativo è che i tempi chirurgici prolungati durante chirurgia addominale aumenta il rischio e morbilità e mortalità post-chirurgica. In particolare, però, i suini in nostro esperimento recuperato in fretta da un intervento chirurgico e non ci sono state complicazioni come infezioni, ileo intestinale, lesioni dei tessuti eccessiva o inappetenza dopo la procedura. Certamente, sono stati osservati i maiali per essere brillante, reattivo, deambulazione e mangiare normalmente post-operatorio 24 ore e questo ha continuato durante il periodo di raccolta della linfa di 7 giorni. In particolare, anche se chimiche siero o emocromo completo, non sono state valutate in questi maiali seguito l&#39;esperimento di 7 giorni, precedente lavoro di investigatori nella raccolta linfa a lungo termine in pecore 41 ha dimostrato che le pecore cateterizzati non sono mai stati leucopenici, linfocitopenico, ipoproteinemia con squilibri elettrolitici o clinicamente raffigurante cattive condizioni di salute (dati non pubblicati). Importante e, come detto sopra, questa osservazione correla catheterimaiali Zed anche la visualizzazione di caratteristiche cliniche di buona salute. È interessante notare, gli investigatori hanno notato variazioni nel volume del flusso linfatico. Il flusso era maggiore durante il giorno quando i maiali sono stati alimentando e attivo con circa il 70% della linfa raccolta giornaliera verificano in questo momento. Il restante 30% del flusso della linfa avviene la sera durante il riposo e il sonno. Ulteriore caratterizzazione dei campioni linfonodi sono forniti nelle figure 1, 2 e Tabella 1. La Figura 1 mostra una piccola quantità di contaminazione con circa il 15% di plasma derivato ApoB100. La presenza di lipoproteine ​​plasma entro linfatico intestinale è una osservazione che si verifica spesso nei suini 42. In lattoni, la maggioranza della lipoproteina è prodotto dal fegato e rilasciato nel plasma. Dal plasma, ApoB100 probabile filtra nella raccolta lacteals 42 e poi attraverso la rete vascolare linfaticafognature nel tronco linfatico intestinale. Vari metodi di cromatografia sono utilizzati per valutare colesterolo, trigliceridi e fosfolipidi altri contenuti nei campioni raccolti linfatici 42-45. Il singolo picco nella figura 2 dimostra chiaramente il colesterolo e trigliceridi sono presenti nella frazione chilomicroni. Questo metodo è una tecnica semplice e preciso della profilatura lipoproteine ​​linfa e deve essere considerato al momento di valutare la purezza dei campioni di chilomicroni da linfa intestinale 45. Infine, tabella 1 fornisce i componenti biochimici della linfa intestinale raccolti da suini neonatali 7 giorni post-operatorio. In conclusione, cateterismo a lungo termine del tronco linfatico intestinale è successo giovani suini. Con questa tecnica, cateterizzazione linfatica può essere utilizzato per raccogliere e analizzare componenti del metabolismo lipidico. La purezza della linfa, quantità di linfa prodotta e le quantità di componenti del metabolismo lipidicosono simili ai valori presenti nel maiale linfa centrale in altri esperimenti 9,25,26,42. I risultati indicano che l&#39;impiego di un approccio chirurgico linea mediana ventrale con un&#39;attenta dissezione dei tessuti e dei vasi gestione cateterizzare il tronco linfatico intestinale nei giovani maiali è un ottimo metodo per raccogliere grandi quantità di linfa centrale.

Il sistema linfatico è una zona poco studiato della fisiologia. Modelli preclinici di cateterizzazione linfatico si verificano in diverse specie animali 1-8 e sono utilizzati da industrie farmaceutiche e istituti di ricerca per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidico 8-12 e 13-15 metabolismo dei farmaci, metastasi del cancro 16 con trattamento sperimentale 17, e la funzione immunitaria 18 -26. Questo studio esplora l&#39;utilizzo di cateterizzazione intestinale tronco linfa in un modello di maiale domestico per misurare i componenti del metabolismo delle lipoproteine. metabolismo Lipoprotein è coinvolta nella produzione e secrezione di chilomicroni, così come i cambiamenti in lipidi associati e proteine ​​totali. Queste sono considerazioni importanti in quanto vi sono grandi differenze nel metabolismo lipidico tra modelli di roditori comunemente usati e gli esseri umani e in quanto tali, impiegando modelli suini per raccogliere linfa intestinale potrebbe fornire informazioni più comparabili per lo studio dei lipidi memetabolismo nelle persone 27-31. Diverse tecniche chirurgiche vengono utilizzati per raccogliere la linfa intestinale in grandi specie animali: un approccio spalla cranica (vale a dire, toracico condotto cateterizzazione) 5, una laterale approccio fianco superiore 32-34, ed una linea mediana ventrale o approccio paramediano 22,35. Questo video descrive in dettaglio la procedura chirurgica in suina utilizzando un approccio chirurgico ventrale linea mediana per la cateterizzazione del tronco linfatico intestinale. Un&#39;attenta tecnica consente chirurgiche questo metodo di cateterizzazione linfatico per raccogliere grandi quantità di linfa ei componenti per periodi di tempo prolungati. Questa tecnica apre una miriade di applicazioni per molte discipline che esaminano le varie funzioni fisiologiche. Le applicazioni potrebbero includere, ma non sono limitati a, tutto lipoproteine ​​corporeo e il metabolismo dei lipidi, immunosorveglianza, genesi tumorale e le metastasi, la funzione intestinale, e la svient e la progressione della malattia infiammatoria intestinale.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> cateterizzazione linfatico del tronco linfatico intestinale dei suini neonatale permette la raccolta di circa 1 L / 24 ore di linfa centrale nel corso di un periodo di 7 giorni. La linfa raccolte in questo esperimenti conteneva componenti del metabolismo lipidico, proteine ​​cioè totale linfa, ApoB48 lipoproteine, trigliceridi, proteine ​​totali e colesterolo. Tabella 1 evidenzia importi rappresentativi di tali componenti lipidici da campioni di linfa pool di tre maiali. In particolare, il flusso linfatico e costituenti lipidici sono in linea con i valori della linfa centrale riportati da altri ricercatori seguenti cateterizzazione dei vasi linfatici intestinali (flusso linfatico 570 ± 158-979 ± 284 ml / 24 ore 25, 360 ± 120 MLL / 24 ore per 1080 ± 720 ml / 24 ore 26; trigliceridi 687 ± 110 mg / dL 9; colesterolo 63,1 ± 5,6 mg / dL 9); indica il corretto posizionamento del catetere nel vaso linfatico. ontent &quot;fo: together.within-page keep-=&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig2.jpg" /> Figura 2. Un Liquid Chromatography (FPLC) profilo veloce Protein dimostrare la purezza della preparazione chylomicron in pig neonatale linfatico intestinale. Linfa raccolti da tre porcellini è una separazione tramite un protocollo di gradiente di densità ultracentrifugazione 1.006 g / ml. Il profilo mostra un unico picco per (A) colesterolo e (B) dei trigliceridi nel campione linfa. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53457/53457fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig1.jpg" /> Figura 1. Un rappresentante analisi Western Blot dimostrando il contributo di ApoB48 e apoB100 lipoproteine ​​nel maiale neonatale linfatico intestinale. Linfa raccolti da tresuini è separato tramite un protocollo gradiente di densità ultracentrifugazione 1.006 g / ml. La figura mostra una piccola quantità di contaminazione con circa il 15% di plasma derivato ApoB100. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53457/53457fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> linfonodi Caratteristiche </td></tr><tr><td> ApoB48 (mg / ml) </td><td> 3022,4 ± 440,4 </td></tr><tr><td> Trigliceridi (mg / dL) </td><td> 607 ± 203,6 </td></tr><tr><td> Colesterolo (mg / dL) </td><td> 58.5 ± 9.6 </td></tr><tr><td colspan="2"> I risultati sono espressi come media ± deviazione standard (n = 3) </td></tr></tbody></table> Tabella 1. I componenti della linfa intestinale raccolti da maiali neonati 7 giorni post-intervento chirurgico. I risultati sono ripetuti meaSures di linfa e espressi come media ± DS (n = 3)

Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs at JoVE.com

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

A lungo termine cateterizzazione della intestinale linfa Tronco e Raccolta della linfa in neonatali Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

long-term-catheterization-intestinal-lymph-trunk-collection-lymph

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

8.9K Views.  University of Alberta. We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Video: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a surveillance system for potentially harmful antigens, optimizing mucosal immunity and adaptive immune responses1. Lymph is formed from interstitial fluid that enters blind-ended initial lymphatics, and then is transported against a pressure gradient in larger collecting lymphatics. Each collecting lymphatic is made up of a series of segments called lymphangions, separated by bicuspid valves that prevent backflow. Each lymphangion possesses a contractile cycle that propels lymph against a pressure gradient toward the central circulation2. This phasic contractile pattern is analogous to the cardiac cycle, with systolic and diastolic phases, and with a lower contraction frequency4. In addition, lymphatic smooth muscle generates tone and displays myogenic constriction and dilation in response to increases and decreases in luminal pressure, respectively5. A hybrid of molecular mechanisms that support both the phasic and tonic contractility of lymphatics are thus proposed.
Contraction of smooth muscle is generally regulated by the cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]i) plus sensitivity to Ca2+, of the contractile elements in response to changes in the environment surrounding the cell6. [Ca2+]i is determined by the combination of the movement of Ca2+ through plasma membrane ligand or voltage gated Ca2+ channels and the release and uptake of Ca2+ from internal stores. Cytosolic Ca2+ binds to calmodulin and activates enzymes such as myosin light chain (MLC) kinase (MLCK), which in turn phosphorylates MLC leading to actin-myosin-mediated contraction8. However, the sensitivity of this pathway to Ca2+ can be regulated by the MLC phosphatase (MLCP)9. MLCP activity is regulated by Rho kinase (ROCK) and the myosin phosphatase inhibitor protein CPI-17.
Here, we present a method to evaluate changes in [Ca2+]i over time in isolated, perfused lymphatics in order to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction. Using isolated rat mesenteric collecting lymphatics we studied stretch-induced changes in [Ca2+]i and contractile activity. The isolated lymphatic model offers the advantage that pressure, flow, and the chemical composition of the bath solution can be tightly controlled. [Ca2+]i was determined by loading lymphatics with the ratiometric, Ca2+-binding dye Fura-2. These studies will provide a new approach to the broader problem of studying the different molecular mechanisms that regulate phasic contractions versus tonic constriction in lymphatic smooth muscle.

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

We introduce an approach to evaluate the cytosolic Ca2+ concentration in isolated lymphatics to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction.

Misura della Ca citosolico 2 + In isolati Linfatici contrattile

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the outside world. As such, the intestine plays a pivotal role in immunosurveillance and protection from enteric pathogens. Investigating intestinal physiology and immunology commonly employs 'intestinal loops' as an experimental model. The majority of these loop models are non-recovery surgical procedures that study short-term (&lt;24 hr) changes in the intestine (1-3). We previously created a recovery intestinal loop model to specifically measure long-term (&lt;6 mo) immunological changes in the intestine of sheep following exposure to vaccines, adjuvants, and viruses (4). This procedure localized treatments to a specific 'loop', allowing us to sample this area of the intestine. A significant drawback of this method is the single window of opportunity to administer treatments (i.e. at the time of surgery). Furthermore, samples of both the intestinal mucosa and luminal contents can only be taken at the termination of the project. Other salient limitations of the above model are that the surgical manipulation and requisite post-operative measures (e.g. administration of antibiotics and analgesics) can directly affect the treatment itself and/or alter immune function, thereby confounding results. Therefore, we modified our intestinal loop model by inserting long-term catheters into the loops. Sheep recover fully from the procedure, and are unaffected by the exteriorized catheters. Notably, the establishment of catheters in loops allows us to introduce multiple treatments over an extended interval, following recovery from surgery and clearance of drugs administered during surgery and the post-operative period.

We describe a novel surgical method for catheterizing 'intestinal loops' within the ileum of sheep. Once animals have recovered from surgery and have cleared antibiotics and analgesics, multiple treatments can be deposited directly in loops via the catheters.

Cateterismo delle anse intestinali nei ruminanti

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Biologia

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine via a series of lymphatic vessels and nodes that converge at the superior mesenteric lymph duct. Cannulation of the mesenteric lymph duct thus enables the collection of mesenteric lymph flowing from the intestine. Mesenteric lymph consists of a cellular fraction of immune cells (99% lymphocytes), aqueous fraction (fluid, peptides and proteins such as cytokines and gut hormones) and lipoprotein fraction (lipids, lipophilic molecules and apo-proteins). The mesenteric lymph duct cannulation model can therefore be used to measure the concentration and rate of transport of a range of factors from the intestine via the lymphatic system. Changes to these factors in response to different challenges (e.g., diets, antigens, drugs) and in disease (e.g., inflammatory bowel disease, HIV, diabetes) can also be determined. An area of expanding interest is the role of lymphatic transport in the absorption of orally administered lipophilic drugs and prodrugs that associate with intestinal lipid absorption pathways. Here we describe, in detail, a mesenteric lymph duct cannulated rat model which enables evaluation of the rate and extent of lipid and drug transport via the lymphatic system for several hours following intestinal delivery. The method is easily adaptable to the measurement of other parameters in lymph. We provide detailed descriptions of the difficulties that may be encountered when establishing this complex surgical method, as well as representative data from failed and successful experiments to provide instruction on how to confirm experimental success and interpret the data obtained.

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

La linfa mesenterica Duct Cannulated Rat Modello: Applicazione alla valutazione di intestinale linfatico Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

Osservazione microscopica della dinamica dei linfociti nelle patch di Rat Peyer

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Medicina

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

<meta charset="utf8"></head><body>Intubazione, catetere venoso centrale e posizionamento della linea arteriosa nei suini per la ricerca traslazionale nella chirurgia dei trapianti addominali

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

Intubazione, catetere venoso centrale e posizionamento della linea arteriosa nei suini per la ricerca traslazionale nella chirurgia dei trapianti addominali

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

Catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine nei suini

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

Autore in primo piano: Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello suino preclinico  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

Surgical Technique for Lumbar Spinal Catheter Insertion in Pigs Enabling Continuous Access to the Thecal Sac in a Terminal Setup

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine and human central nervous systems (CNS). However, accessing the cerebrospinal fluid (CSF) in larger pig breeds by conventional lumbar puncture techniques can be challenging due to an oblique orientation of the spinal spinous processes and a limited interlaminar space. Accordingly, an open surgical procedure for inserting a lumbar spinal catheter for continuous CSF sampling at the L4/L5 level in pigs is thoroughly described in this work. After positioning the pig and identifying the anatomical landmarks, a dorsal midline surgical incision is made to expose the spinous processes. By advancing the introducer needle, the spinal catheter is inserted inside the thecal sac of the spinal canal while leaving the bone structures of the spine intact. This method allows continuous infusion into or sampling from the porcine thecal sac with minimal bleeding or CSF leakage. The procedure is simple, time-efficient, and reproducible across different experimental setups, offering significant potential for various pre-clinical studies, including pharmacokinetic research, surgical training, and spinal cord injury models.

We present a technique for inserting a lumbar spinal catheter at the L4-L5 level in a 3-month-old Danish Landrace pig as part of a terminal research protocol, enabling continuous infusion or CSF sampling from the thecal sac.

Tecnica chirurgica per l'inserimento di catetere spinale lombare nei suini che consente l'accesso continuo al sacco tecale in una configurazione terminale

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine ...

A lungo termine cateterizzazione della intestinale linfa Tronco e Raccolta della linfa in neonatali Pigs

Riepilogo

Esplora Altri Video

Capitoli in questo video

Misura della Ca citosolico^{2 +} In isolati Linfatici contrattile

Cateterismo delle anse intestinali nei ruminanti

La linfa mesenterica Duct Cannulated Rat Modello: Applicazione alla valutazione di intestinale linfatico Drug Transport

Osservazione microscopica della dinamica dei linfociti nelle patch di Rat Peyer

Intubazione, catetere venoso centrale e posizionamento della linea arteriosa nei suini per la ricerca traslazionale nella chirurgia dei trapianti addominali

Intubazione, catetere venoso centrale e posizionamento della linea arteriosa nei suini per la ricerca traslazionale nella chirurgia dei trapianti addominali

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Uso del catetere di Hickman per l'accesso vascolare a lungo termine in un modello preclinico di suino

Tecnica chirurgica per l'inserimento di catetere spinale lombare nei suini che consente l'accesso continuo al sacco tecale in una configurazione terminale