11.24 : Cromatografia di Affinità

La cromatografia di affinità è una potente tecnica ampiamente utilizzata per separare e purificare specifiche biomolecole da miscele complesse. Sfrutta il legame altamente selettivo tra un analita e la sua controparte, come le interazioni antigene-anticorpo. La controparte è immobilizzata nella fase stazionaria, formando una colonna di affinità. La fase stazionaria è in genere costituita da un supporto solido, come perle di agarosio o vetro poroso, che immobilizzano il ligando di affinità. La fase mobile ha un duplice scopo: supportare un forte legame tra l'analita e il ligando e successivamente indebolire l'interazione per eluire l'analita. Quando la miscela contenente l'analita desiderato viene fatta passare attraverso la colonna, solo l'analita si lega, mentre altre sostanze vengono lavate via. L'analita legato può quindi essere eluito alterando condizioni come pH o forza ionica, che ne indeboliscono il legame.

Questo metodo è particolarmente prezioso in biochimica per la sua specificità e applicazione nell'isolamento di proteine, enzimi, substrati, anticorpi, antigeni, recettori e ormoni. La cromatografia di affinità può anche essere impiegata per isolare singoli isomeri ottici di farmaci, che possono presentare diversi effetti terapeutici. Questo processo comporta l'uso di anticorpi monoclonali specifici per ogni stereoisomero.

Il vantaggio principale della cromatografia di affinità è la sua eccezionale specificità, che la rende ideale per il rapido isolamento di biomolecole nel lavoro preparatorio.