המחקר במעבדה שלי מתמקד בהבנת המנגנונים הבסיסיים המקדמים עייפות שרירים בחולים עם סרטן השד. באופן ספציפי, אנו רוצים להבין את התקשורת בין גידול הממוקם ברקמת השד עם שריר השלד ההיקפי, ולאחר מכן את התגובות המולקולריות בתוך אותו שריר המובילות לעייפות. הפיתוח של מודלים תלת-ממדיים של תרביות תאים מאפשר מחקרים בעלי תפוקה גבוהה שבהם ניתן לחקור תגובות פונקציונליות כגון עייפות שרירים בתנאים מבוקרים.
ניתן לבצע ניסויים בתרבית תאים פונקציונלית במקביל ודורשים פחות זמן ממודלים מקבילים של בעלי חיים, מה שמקל על גילוי וחדשנות מהירים. הערכת פנוטיפים פונקציונליים רלוונטיים באמצעות מודלים מסורתיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה היא גם גוזלת זמן וגם עתירת משאבים. פרוטוקול זה מאפשר הזרקה בו-זמנית של PDX לעכברים, ומאפשר לחוקרים לחקור תגובות מערכתיות לגידולים אנושיים באמצעות ניסויים בבעלי חיים בעלי עוצמה טובה.
פרוטוקול זה מאפשר הזרקה אורתוטופית של תאי גידול שד שמקורם בחולה בקנה מידה משופר לעומת השיטות הקיימות, מה שמאפשר הזרקה מהירה של עד כמה עשרות עכברים ביום על ידי חוקר יחיד. בנוסף, דיסוציאציה של הגידול יוצרת תרחיף תאים הומוגני המחלק באופן שווה את סוגי התאים בין בעלי חיים. נתונים מהמעבדה שלי זיהו תגובות מולקולריות דומות של שרירים לסרטן השד בעכברי PDX ובחולות סרטן אנושיות.
לכן, אנו רוצים להשתמש במודל עכבר פרה-קליני זה כדי לסנן תרופות מועמדות ולזהות טיפולים בעלי פוטנציאל להפחית עייפות בחולים עם סרטן השד. כדי להתחיל, יש להפשיר את האנזימים H, R ו-A מערכת דיסוציאציה של גידול אנושי. הוסף 200 מיקרוליטר של אנזים H, 100 מיקרוליטר של אנזים R ו-25 מיקרוליטר של אנזים A בצינור סטרילי C.הוסף 4.7 מיליליטר של מדיום RPMI 1640 סטרילי לצינור C כדי להתאים את הנפח הסופי לכחמישה מיליליטר.
לאחר מכן העבירו את שברי הגידול המופשרים ואת מדיום ההקפאה הנלווה למחצית צלחת תרבית סטרילית של 100 מילימטר. בעזרת מלקחיים סטריליים, העבירו את שברי הגידול לצינור מיקרו סטרילי של חמישה מיליליטר ושטפו אותם עם מיליליטר עד שלושה מיליליטר PBS סטרילי. בעזרת מלקחיים סטריליים, העבירו את השברים המחוטאים לצינור מיקרו חדש של חמישה מיליליטר.
לאחר שטיפה שנייה עם PBS סטרילי, העבירו את השברים למחצית היבשה של צלחת התרבות בגודל 100 מילימטר. בעזרת שני להבי אזמל סטריליים מספר 10, טחנו היטב את רקמת הגידול. העבירו את שברי הגידול הטחון ללהב אחד והפקידו אותם בצינור C המכיל את תמיסת האנזים המוכנה.
הפוך את צינור C מספר פעמים כדי להבטיח פיזור אחיד של שברי הגידול בתוך תמיסת האנזים. כעת הנח את צינור C במפריד המכני והפוך את הצינור כדי להבטיח שכל התוכן שקוע במדיום. בחר את התוכנית 37CHTDK3 מממשק מסך המגע.
עם סיום תוכנית הדיסוציאציה, בדוק את תכולת הצינור. לאחר השגת דיסוציאציה מספקת, צנטריפוגה את צינור C ב-200G למשך חמש עד שמונה דקות בארבע מעלות צלזיוס. בעזרת שאיבת ואקום או פיפטה, הסר בזהירות את הסופרנטנט והשהה מחדש את כדור התא ב-RPMI 1640 לנפח שווה ערך למחצית מנפח ההזרקה הסופי הרצוי.
בצינור מיקרו צנטריפוגה תחתון עגול של שני מיליליטר, שלב את הכמות הרצויה של תרחיף תאים מדולל ב-RPMI עם נפח שווה של מטריג'ל. מערבבים בעדינות את המתלים על ידי פיפטינג חוזר ונשנה כדי להבטיח הומוגניות. כדי להתחיל, נתק גידולי שד אנושיים לתרחיף חד-תאי.
לאחר מכן, באמצעות מזרק של מיליליטר ללא מחט מחוברת, שאפו בעדינות את מתלה התאים למעלה ולמטה כדי להבטיח הומוגניות. חבר מחט בגודל 26 למזרק ומשוך את נפח ההזרקה הרצוי. לאחר מכן הקש בעדינות או החלק את המזרק כדי למנוע בועות אוויר.
מרחו שכבה דקה של קרם אפילציה על מקום הזרקת המטרה על העכבר. לאחר ניקוי אזור ההזרקה, אחוז בחוזקה בעור הגב בעורף ובחזרה כדי לרסן את העכבר בצורה מאובטחת ולהניח את העכבר במצב שכיבה. הכנס את המחט בזווית של 45 מעלות המצביעה לכיוון הירך כ-0.5 עד סנטימטר אחד זנב לכרית השומן, תוך התאמה לאורך המחט.
קדם את המחט לתוך כרית השומן ובצורה מבוקרת הזריק את הנפח הרצוי של תרחיף התאים. לאחר ההזרקה, סובב את המחט 180 מעלות ושמור על המיקום לזמן קצר לפני משיכתה לאט כדי למזער את אובדן התאים ממקום ההזרקה.
