איסוף דינמי בזמן אמת של נוזל חוץ-תאי בהיפוקמפוס מחולדות מודעות באמצעות מערכת מיקרודיאליזה

נוזל חוץ-תאי בהיפוקמפוס וצפיפות על ידי מיקרודיאליזה במוח טכניקה תורמת לניטור מיקרו ספציפי למחלה של מחלות עצבים מרכזיות. מיקרודיאליזה מוחית טכנית משיגה דינמיות וחקירה מתמשכת של נוזל מוח אינטרסטיציאלי באזורי מוח ספציפיים של חולדות לא מורדמות. התחילו בקיבוע החולדה המורדמת על מאתר מוח סטריאוטקסי ונגבו את אזור הניתוח המגולח עם פוד פובידון ומקלון אתנול שלוש פעמים לפני הניתוח.

לאחר מכן בצע חתך פנים גולגולתי של 1.5 ס"מ באמצע עם מספריים כירורגיים והסר את הפריאוסטאום באמצעות מספריים כירורגיים ומלקחיים אופתלמיים. בהתחשב בברגמה כמיקום הבסיסי, באמצעות מקדח גולגולתי חודר את האנדוקרניום כדי לקדוח צמצם של שני מילימטר באזור CA1 בהיפוקמפוס. כעת תקנו את סטילט הצנתר על ידית האחיזה של מאתר מוח סטריאוטקסי והתאימו את מיקום מעטפת המיקרודיאליזה במיקום הקדמי, הבינוני והגחוני הגבי.

כוונן את המסתם הדורסו-ונטרלי של מאתר הסטריאו במוח והשתיל את מעטפת המיקרודיאליזה באזור CA1 בעומק של 3.5 מילימטרים. קדח שלושה פתחים נוספים בקוטר שני מילימטר כך ששלושת הצמצמים יוצרים משולש שבו צמצם הגשושית ממוקם במרכז. השתל ברגים לתוך הצמצמים בעומק של מילימטר אחד ולקבע את קטטר הבדיקה עם מלט דנטלי.

לאחר מכן השתמש בתפר כירורגי 4-O כדי לסגור את העור. חבר את המיקרומזרק של משאבת המיקרודיאליזה למכשיר פעילות ערה ACSF ולאוסף דגימות קריוגניות בהתאם להוראות היצרן. לאחר מכן, כדי לפרוק את האוויר בצנרת, להגדיר את משאבת מיקרודיאליזה בקצב של מיקרוליטר אחד לדקה.

לאחר מכן חברו את הצינור ואת בדיקת המיקרודיאליזה במוח והפעילו את משאבת המיקרודיאליזה בקצב של מיקרוליטר אחד לדקה כדי להזריק ACSF לתוך הבדיקה עד שפני השטח של הבדיקה לחים מעט. לטבול את הבדיקה בתמיסת הזרקת נתרן הפרין לשימוש לאחר מכן. כדי לאסוף את HECF מהחולדה הערה, הכניסו את בדיקת המיקרודיאליזה של המוח לתוך צנתר הבדיקה והניחו את החולדה בחדר עם ריפוד כדי להבטיח שהחולדות חופשיות לנוע.

הפעל את בקר הסיבוב הרב-ערוצי כדי למנוע שזירה של צינורות המיקרודיאליזה במהלך התנועה החופשית של החולדה. לאחר מכן הפעל את משאבת המיקרומזרק ושאב את ACSF בקצב של מיקרוליטר אחד לדקה. לאחר שיווי משקל של 60 דקות של מערכת איסוף HECF מיקרודיאליזה, לאסוף HECF מעת לעת.

לאחר הפסקת הדגימה, הוציאו את בדיקת המיקרודיאליזה של המוח מקטטר הבדיקה. טבלו את הגשושית במים שעברו דה-יוניזציה ושטפו במים שעברו דה-יוניזציה למשך 12 שעות כדי להסיר שקיעי מלח תקועים מהצינור ומהבדיקה. הסר את הבדיקה והכנס אותה לתמיסת טריפאין של 0.05% בארבע מעלות צלזיוס.

נוזל חוץ-תאי בהיפוקמפוס הנרכש בטכניקת המיקרודיאליזה במוח הוא דמוי מים, חסר צבע ושקוף בקצב הדגימה שנקבע. ההליכים החשובים ביותר הם השתלת המיקרודיאליזה בזהירות באזור CA1 והחדרת הבדיקה לצנתר הפופ. טכניקת המיקרודיאליזה פשוט מאפשרת לסייע לשינוי דינמי של סמני מחלה באזורי מוח ספציפיים, חומר יעילות התרופה וקטבוליזם הרקמה של מרכיבי התרופה.