הקמה והערכה של מודל מחלת השתלת ורידים חזיריים

מודל זה מספק פרוטוקול סטנדרטי לביסוס מודלים של בעלי חיים של מחלת השתל הכלילי. הנוהל של מודל בעלי חיים שנקבע בשיטה זו הוא סטנדרטי, והתוצאה יציבה. בתור התחלה, חלקו מיני-חזירים זכרים בני שלושה חודשים במשקל 30 עד 35 ק"ג לקבוצות של מחלות דמה ומחלות שתל ורידי של חמישה בעלי חיים כל אחת.

לאחר הרדמת החיה, יש ליצור גישה לאוזן על ידי החדרת קטטר ורידי לווריד האוזן השולי. כעת, העבירו את החזיר לשולחן הניתוחים במצב שכיבה. בצע אינטובציה בקנה הנשימה עם צינור מד צרפתי 7.0 עד 7.5, וחבר אותו למעגל הנשימה של ההרדמה.

לשתק את הגפיים עם תחבושות, ולהרים את הראש עם drape סטרילי. לאחר הזרקת וקורוניום ברומיד לווריד להרפיית שרירים, יש לעקוב אחר קצב הלב, רמות החמצן בדם וטמפרטורת הגוף באמצעות אלקטרוקרדיוגרמה. לאחר גילוח ועיקור אזור הניתוח, הניחו סביבו וילון כירורגי סטרילי.

לאחר ביצוע החתך וחשיפת וריד החלב הפנימי כמתואר בטקסט, יש לאתר את וריד החלב הפנימי ואת עורק החלב הפנימי השמאלי בצד שמאל של עצם החזה, ולבצע דיסקציה קהה של וריד החלב הפנימי באמצעות מלקחיים וסקולריים. בצע hemostasis על ידי electrocoagulation של ענפי וריד החלב הפנימי השמאלי עם סכין חשמלית. אם המוסטאזיס אינו שלם, באמצעות חוט כותנה, לקשור ולסמן את שני הקצוות של הווריד בזמן שהוא נקצר.

לאחר הסרת הווריד, יש להזריק הפרין, מי מלח רגילים לתוך הווריד לצורך טיפול מקדים. לאחר מכן, לשים את הווריד לתוך מלוחים רגיל, לשמור אותו לגיבוי, בדומה לחתוך את וריד החלב הפנימי של קבוצת דמה. לאחר מכן, פתח את קרום הלב, סגור את קיר החזה והשתמש בווריד החלב הפנימי לשליטה פתולוגית ללא השתלת מעקף עורקים כליליים.

בצע חתך של כשבעה סנטימטרים עם סכין חשמלית על קרום הלב כדי לחשוף את תא המטען של העורק הכלילי הימני. להשעות את קרום הלב, ולתפור את העור בצד ipsilateral עם 1-0 תפרים כירורגיים. כעת, יש להפריד את גזע העורק הכלילי הימני מהרקמות הסובבות אותו.

לאחר מכן, באמצעות וו תיל, לעקוף את הרצועה החוסמת מתחת לקצה הפרוקסימלי של העורק הכלילי הימני המבודד ליד אבי העורקים. לאחר מכן, לטפל בשריר הלב עם שלושה מחזורים של שתי דקות איסכמיה וחמש דקות reperfusion על ידי הידוק והרפיה של הרצועה חוסמת. כמו כן, לפקח על הפעילות החשמלית של הלב עם אלקטרוקרדיוגרמה במהלך איסכמיה reperfusion pre-condition.

לאחר מכן, לחתוך את אפיקרדיום המכסה את כלי הדם לאחר הידוק הרצועה כדי לחסום את זרימת הדם הכלילי הימני. חשיפת דופן העורק הכלילי, חתך אורכי עם קצה להב כירורגי כנגד מרכז הקיר הקדמי של כלי הדם. לאחר חיתוך הלומן והגדלת החתך והנחת שאנט כלילי, הכנס קצה אחד של השאנט עם סליל לעורק הכלילי הדיסטלי דרך הקרע.

כעת, יש להזרים את הדם בעורקים הכליליים לתוך השאנט הכלילי החלול כדי להבטיח שדה ניתוחי ברור, ולבצע תפר רציף מקצה לצד בין וריד החלב הפנימי לדופן אבי העורקים עם תפר פוליפרופילן 6-0. באמצע אבי העורקים העולה, חוסמים את הקיר האנטרולטרלי השמאלי של אבי העורקים העולה עם מהדק חצי חסימה. לאחר ביצוע חתך קטן עם להב הניתוח בדופן אבי העורקים שבו נחתך האדוונטיטיה, הכנס את קצה הראש של פיר ההזזה בקצה הראש של האגרוף לתוך חלל אבי העורקים דרך חתך זה.

לאחר מכן, כווצו את מוט ההזזה החוצה והסכין העגולה חותכת חתיכה מדופן העורק. לאחר הוצאת השאנט, יש לבצע תפר רציף מקצה לקצה בין וריד החלב הפנימי לעורק הכלילי הימני עם תפר פוליפרופילן 6-0. לאחר פתיחת מהדק החסימה למחצה, רשום את זרימת המעקף של גזע העורק הכלילי הימני פרוקסימלי לאתר האנסטומוזה באמצעות אולטרסאונד.

הכינו את בעל החיים לניתוח כפי שהודגם קודם לכן. ועם סכין חשמלית, לבצע חתך עצם החזה החציוני של 10 ס"מ כדי לפצל את עצם החזה ולקצור את הווריד 30 יום לאחר הניתוח. בזמן ההפרדה, הימנעו מכלי הדם הראשיים, הלב, והפרידו את כלי הדם המושתלים שכבה אחר שכבה.

חתכו במהירות את כלי הדם הגדולים המתחברים ללב, והניחו את הלב ואבי העורקים העולה על שבבי קרח. לאחר הסרת גשר כלי הדם של השתל, אבי העורקים המחובר והעורק הכלילי הימני, יש לשטוף את כל הדגימות במי מלח רגילים בארבע מעלות צלזיוס. לאחר לקיחת כל כלי השתל של כשלושה עד ארבעה סנטימטרים וחלוקתו לארבעה עד חמישה חלקים שווים, להעביר אותו CryoTubes במהירות הבזק להקפיא חנקן נוזלי.

לניתוח, תקן את השתל הקר כקרח, שטוף במי מלח בתמיסת 4% paraformaldehyde. לאחר 12 שעות של קיבוע רקמות, מכתימים את הקטעים ב 50 מיליליטר של תמיסה מימית של hematoxylin במשך שלוש דקות. לאחר מכן, להפריד את החלקים על ידי שטיפה עם 50 מיליליטר של 0.5% חומצה הידרוכלורית-אתנול ו 0.2% אמוניה מים במשך 10 שניות כל אחד.

לאחר ששוטפים את החלקים במשך שעה במים זורמים, נקו אותם על ידי השרייתם במים מזוקקים למשך שלוש דקות. לאחר ייבוש החלקים ב-70% ו-90% אתנול למשך 10 דקות, הכניסו אותם ל-50 מיליליטר של תמיסת צביעת אאוזין 0.5% אלכוהול למשך שתיים עד שלוש דקות. לאחר שהחלקים המוכתמים מיובשים באתנול טהור, השרו את הדגימות בקסילן טהור למשך 10 דקות כדי להפוך אותן לשקופות.

לבסוף, טפטפו את החלקים השקופים בדבק נייטרלי לפני שתכסו אותם בחלקת כיסוי. צפו בקטעים פתולוגיים תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה של פי 40. בדיקה אולטראסונית הראתה כי כיוון זרימת הדם הכללי היה תקין בקצה הפרוקסימלי, חלל כלי הדם והקצה הדיסטלי של כלי השתל.

עם זאת, הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של כלי השתל הראו זרימה מסוימת של דם לאחור. הניתוח ההיסטולוגי של וריד החלב הפנימי גילה כי בקבוצת הדמה הטוניקה אינטימה, הטוניקה מדיה, והדופן הוורידית של השתל הוורידי נראו תקינים. עם זאת, 30 יום לאחר השתלת עורקים כליליים, האינטימה של כלי הדם התעבתה והלומן הצטמצם.

בקרב קבוצות מחלות דמה ומחלות שתל ורידי, ארבעה מדדים ביוכימיים, אמינוטרנספראז אספרטט, בילירובין בסרום, בילירובין כולל וקראטינין, הראו שינויים מובהקים סטטיסטית. המנתח צריך לחשוף לחלוטין את וריד החלב הפנימי ולוודא שהוא אינו מחובר לרקמה שמסביב. הטכניקה מספקת תהליך מידול סטנדרטי לחקר מחלות שתלים ורידיים במודלים של בעלי חיים.