המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לתאר את ההליכים המעורבים בביצוע ריסוק עצבי סיאטי בלתי הפיך, ולספק פרוטוקול להערכת התנהגות מוטורית לאחר טראומה היקפית. הבחירה של סוללת בדיקה התנהגותית רבת עוצמה ואמינה חיונית לכיסוי מגוון רחב של היבטים התנהגותיים, ותלויה במודל החי המשמש ושאלת המחקר המדעי. פרוטוקול זה מתאר בפירוט כיצד לבצע פציעת ריסוק עצבית סיאטית ומספק סוללת בדיקה התנהגותית להערכת ליקויים מוטוריים בחולדות, הכוללת את מבחן השדה הפתוח, ניתוח ההליכה של CatWalk, משימת ההליכה בקרן ומשימת ההליכה של דרגת הסולם.
ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות הלאומיות והמוסדיות הרלוונטיות לטיפול ולשימוש בבעלי חיים. לשמור על סביבה סטרילית במהלך כל ההליך הכירורגי. תארגן את שולחן הניתוחים עם הציוד הדרוש.
מנמיך עמוק את החולדה בארון סגור עם איזופלורן ומגלח שטח נרחב של האיבר האחורי הימני. לאחר מכן, למקם את החולדה לתוך מסכת הרדמה ולהמשיך הרדמה עמוקה עם isoflurane. לתקן את פלג הגוף העליון ואת שני הגפיים האחוריות של החולדה עם קלטת.
מניחים את שני הגפיים האחוריות בתנוחה סימטרית ומושטת והופכים כל כפה שטוחה על שולחן הניתוחים. לחטא את העור של האזור מגולח עם חיטוי מתאים. חפש את חריץ הסיאטי של האילום.
הפוך חתך בעור מן חריץ sciatic לכיוון הכף עם אזמל. אם הגפיים האחוריות קבועות וחתך העור מבוצע כראוי, ניתן לראות חלל במישור הפאסאלי בין שריר העכוז מקסימוס ושרירי הירך השריריים הדומים לקו לבן. הכנס מלקחיים מוסטטיים סופר דקים סגורים לתוך החלל ולהפיץ את המלקחיים.
המטוס הקסאלי צריך להיפתח מבלי לפגוע ברקמת שריר. מניחים את מחזר גומי מתחת לשרירים כדי לשמור על חתך העור פתוח. הסר בעדינות את כל הרקמות וכלי הדם שמסביב מהעצב הסיאטי עד שהעצב נחשף לחלוטין.
חשוב לא למתוח או למשוך את העצב במהלך כל ההליך. לרסק את העצב הסיאטי עם מהדק לא משונן עם לחץ שמיש קבוע ומהיר. בשביל זה, לפתוח את המהדק, למקם את העצב על הלסת התחתונה של המהדק, ולסגור את המהדק על ידי נעילת אותו לתוך התנוחה הראשונה במשך 3 x 10 שניות.
לאחר פציעת הריסוק, פתח מחדש את המהדק בזהירות. אתר ההידלקות של העצב הסיאטי נראה שקוף. הסר את מחזר גומיות.
סגור את חתך המטוס fascial עם תפר resorbable. סגור את החתך בעור עם סיכות עור הגוף. פעילות לוקומוטור, כמו גם את הפעילות ההתנהגותית של חולדות ניתן לנתח על ידי בדיקת שדה פתוח.
ההתקנה של השדה הפתוח, שאמור להיות ממוקם בסביבה חשוכה ושקטה, מורכבת ממערכת מעקב וידאו אוטומטית, EthoVision XT, וזירה עם משטח שחור עמיד בפני שריטות וניתן לניקוי. מקם את הזירה ואת המצלמה במיקום הנכון והגדר את תוכנת EthoVision XT. מניחים את החולדה בעדינות באמצע זירת הבדיקות.
במהלך ההקלטה, הנסיין צריך להתרחק מהשדה הפתוח שהוקם, על מנת למנוע הסחת דעת של החולדה. לניתוח הנתונים של בדיקת השדה הפתוח, עבור למקטע הניתוח בסרגל הצד הימני ובחר עקוב אחר פריט חזותי"תחת הכרטיסיה תוצאות". לאחר מכן, יצא את הפרמטרים הדרושים ל- XL.Within התוכנה, בחר מספר משתנים מקטגוריות שונות לניתוח נתונים.
ניתוח הליכה על ידי מערכת CatWalk XT יכול לעזור להעריך פרמטרים רבים ושונים לגבי עקבות, עמדה והליכה של מודלים בעלי חיים. שביל זכוכית מואר באור ירוק והאור המפוזר על ידי עקבות בעלי החיים נלכד במצלמת וידאו במהירות גבוהה, הממוקמת מתחת לשביל ההליכה. ניתן לנתח את האותות באמצעות תוכנת CatWalk XT.
הניסוי צריך להתבצע בתנאים אפלים. התחל על-ידי הגדרת מערכת CatWalk XT. בחר בהגדרות הניסיוניות.
מקם את המצלמה במיקום והתאם את המוקד. הגדר את הגדרות הזיהוי. הקם את קירות המסדרון של מערכת CatWalk וודא שהקירות נשארים מקבילים לשביל ההליכה.
הגדר את אורך שביל ההליכה וכייל את שביל ההליכה. לאחר מכן, הצמד תמונת רקע. שביל נקי וריק נחוץ לתמונת הרקע.
החולדה צריכה לחצות את שביל ההליכה ללא כל הפרעה. על פי קריטריוני ההפעלה המוגדרים, נדרשות שלוש ריצות תואמות לכל עכברוש לצורך ניתוח נתונים. לאמן בעלי חיים לפחות שמונה ימים לפני שאתה מתחיל עם הניסוי בפועל.
CatWalk צריך להתבצע לפחות פעם בשבוע, עם 6 עד 10 ריצות כדי להבטיח ביצועים משימה רציפה. עבור ניתוח נתונים, הערך רק את הריצות התואמות. סיווג הדפסות כפות רגליים באופן אוטומטי באמצעות תוכנת CatWalk XT.
סקור את תוויות הדפסת הכפות באופן ידני. תקן תוויות הדפסה שגויות של כפות רגליים, הוסף תוויות של הדפסות כפות רגליים שלא זוהו ומחק כל רעש ותוויות שגויות. התוצאות המספריות המוצגות בגיליון XL, המציגות מספר פרמטרים בסיסיים.
לקבלת מידע מפורט יותר על כל טביעת רגל, לסווג את בהונות הכפות האחוריות. ניתוח זה דורש מודול מדידות טביעת רגל אינטראקטיבית. הגדר את הסמנים לניתוח טביעת הרגל באופן ידני.
לנתח כל טביעת כפה אחורית בכל שלוש הריצות התואמות. צייר קו ממרכז בוהן הראשונה למרכז בוהן החמישית כדי למדוד התפשטות בוהן. צייר קו ממרכז בוהן שנייה למרכז בוהן הרביעית כדי למדוד התפשטות בוהן ביניים.
צייר קו ממרכז הבהונה השלישית לעקב הכף האחורית כדי למדוד אורך הדפסה ידני. סקור את התוצאות המספריות של מדידות טביעת הרגל האינטראקטיבית המוצגות בגיליון נפרד. גירעונות הליכה ניתן לקבוע על ידי משימת הליכה קרן.
המוקד של משימת ההליכה קרן בנושא מחקר ספציפי זה יהיה ניתוח של תיאום מוטורי ולא הערכה של איזון מוטורי. למשימת הליכה קרן, קרן, מרווח, שולחן, רקע אחיד, ומצלמת וידאו נדרשים. השתמש קרן עץ של 90 ס"מ אורך, 1.7 ס"מ רוחב, ו 2 ס"מ גובה.
לאמן את החיות במשך שבעה ימים. מניחים את החולדה על פלטפורמת ההתחלה של הקרן. החולדה צריכה לחצות את הקרן שלוש פעמים ללא כל הפרעה.
גם אם החולדה מגיעה לשלוש ריצות תואמות בשלוש הריצות הראשונות, יש לבצע מינימום של 6 עד 10 ריצות לביצועי משימה רציפים. בחר את רצפי הווידאו של שלוש ריצות תואמות מההקלטה. הגדר את נקודת שעת ההתחלה ואת נקודת שעת הסיום של שלוש הריצות התואמות שנבחרו.
כאן, נקודת זמן ההתחלה מסומנת על ידי קו שחור על הקרן, ואת המיקום של האיבר האחורי הראשון מאחורי הקו השחור מוגדר כנקודת זמן ההתחלה של הריצה. המיקום של האיבר האחורי הראשון על הפלטפורמה בסוף הקרן מגדיר את נקודת זמן הסיום. לאחר מכן, לחשב את הזמן הדרוש לחולדה לחצות קרן.
ניקוד מספר השלבים והשגיאות משלוש ריצות תואמות עבור שני הגפיים האחוריות בנפרד, באמצעות זום ופונקציית ההילוך האיטי של התוכנה. השגיאות כוללות סה"כ החלקות רגל וגלישות של חצי רגל. תלוש רגל כולל מוגדר כמיקום רגל ואחריו להחליק עמוק, גרימת אובדן מגע של כף הרגל המושפעת עם הקרן.
חצי החלקה מוגדרת ככף הרגל המחליקה מהקירות הצדדיות של הקרן מבלי לאבד מגע מלא. חשב את אחוז החלקות הרגליים ביחס למספר השלבים לחצות את הקרן. משימת ההליכה בסולם יכולה להעריך את התפקוד המוטורי, את המיקום של הגפיים הקדמיות והגפיים האחוריות ואת הקואורדינציה בין הגפיים.
מנגנון צלצל סולם, מרווח, שולחן, רקע אחיד, ומצלמת וידאו נדרשים לבדיקה התנהגותית זו. מנגנון שלב האות האופקי מורכב שלבי מתכת וקירות צדדיים פוליקרבונט ברורים. לאמן את החיות במשך שמונה ימים.
הנח את החולדה על אזור ההתחלה של מפעילי סולם צלצל. החולדה צריכה לחצות את שביל ה-100 ס"מ של מנגנון שלב הסולם שלוש פעמים ללא הפרעה, כדי שהיא תיחשב לריצה תואמת. בחר את רצפי הווידאו של שלוש ריצות תואמות מההקלטה.
הגדר את נקודת שעת ההתחלה ואת נקודת שעת הסיום של שלוש הריצות התואמות שנבחרו. המיקום של האיבר האחורי מאחורי הקו השחור הראשון על קיר הצד של המנגנון מגדיר את נקודת זמן ההתחלה של הריצה. המיקום של האיבר הקדמי הראשון מאחורי הקו השחור השני על קיר הצד של המנגנון מגדיר את נקודת זמן הסיום של הריצה.
לאחר מכן, חשב את משך הריצה לאורך שביל ההליכה. ניקוד שלוש ריצות תואמות עם סולם 7 קטגוריה מ מטס ועמיתים לעבודה באמצעות הילוך איטי או פונקציית מסגרת אחר מסגרת של התוכנה. קבע את מספר השלבים ואת מספר השגיאות בהתאם לקטגוריות הסולם עבור כל איבר בנפרד.
קנה המידה מבחין בין הקטגוריות הבאות. פספוס מוחלט. מעידה עמוקה.
מעידה קלה. החלפה.תיקון. מיקום חלקי. ומיקום נכון.
לאחר מכן, חשב את השגיאות לפי שלב. התוצאות הייצוגיות של מבחן השדה הפתוח בן חמש הדקות מראות כי לפציעה במחיצת העצבים, חמישה שבועות לאחר הניתוח, אין כל השפעה על פעילות הלוקומוטור. ניתוח הליכה עם מערכת CatWalk XT יוצר פרמטרים רבים ושונים.
ניתן היה להבחין בשינויים משמעותיים במהירות הממוצעת של הריצה, באורך הצעד ובאזור ההדפסה של כף הרגל האחורית הימנית הפגועה עצבית. חולדות מסוג בר פגושי עצבים הראו זמן השהיה מוגבר באופן משמעותי כדי לחצות את הקרן, בהשוואה לחולדות נאיביות מסוג פראי חמישה שבועות לאחר הפציעה. כקריאה נוספת של משימת ההליכה של הקרן, פתקים מלאים וחצי החלקות של האיבר האחורי הפגוע עצבים נספרו ונחשבו כטעות לניתוח סטטיסטי.
אחוז הטעויות בכל שלב של הגפיים האחוריות הימניות שנפצעו עצבים גדל באופן משמעותי בחולדות מסוג בר פגושי עצבים, בהשוואה לחולדות נאיביות מסוג פראי. נתונים מייצגים של משימת ההליכה של שלב הסולם אינם מראים שינויים משמעותיים בזמן ההשהיה כדי לחצות את שביל מנגנון שלב הסולם, או באחוז השגיאות לכל צעד של האיבר האחורי הימני הפגוע עצבים. הניתוח של אחוז השגיאה לכל שלב של האיבר האחורי פגוע העצבים נחשב רק את הציון מ 0 ל 2 של סולם 7 קטגוריה מ מטס ועמיתיו.
לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך לבצע פגיעה מעיכה עצבית sciatic, וכיצד ליישם הערכה רב גורמית של התנהגות מוטורית בחולדות לאחר ריסוק עצבי סיאטי חד צדדי. כדי להשיג תוצאות עקביות, לשחזור ודומות לאחר פציעת ריסוק עצבי סיאטי, שיטה סטנדרטית לגרימת ריסוק העצבים היא חיונית, כמו גם אפיון פנוטיפי סטנדרטי. הכשרה נכונה לבדיקת התנהגות ספציפית מספקת את היתרונות של חיסכון בזמן במהלך הערכת הניסוי והשגת תוצאות טובות יותר.
