פרוטוקול זה הוא הראשון להציג פגיעה סוג חבלה מתוקקנת במחקר התחדשות חוט השדרה axolotl. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מחקה את הטראומה שנראית במרפאה היומיומית, ומשפרת את הסבירות שממצא עתידי יוכל להיות מתורגם. המכשיר לפגיעה בחבלה יכול להיות מנוצל בכל דגם אחר של בעלי חיים קטנים של פגיעה בחוט השדרה.
הטכניקה הכירורגית קשה, במיוחד כריתת למין. לכן, מומלץ לאמן את ההליך על מספר רב של בעלי חיים ex vivo לפני התקדמות ניתוח vivo. כדי להתחיל, להגדיר שולחן כירורגי על ידי הנחת צלחת פטרי סטנדרטית תחת מיקרוסקופ סטריאו, על גבי בד טקסטיל כירורגי.
מניחים את האקסולוטל הרדמה בתנור נוטה על צלחת פטרי, ולעטוף אותו במגבות נייר, כך הזנב חשוף. זהה את הגפיים האחוריות ולהשתמש בזוג מספריים מיקרו כדי להפוך את החתך הראשון רק caudal להם. הפוך את החתך האנכי מן התיל עד בולטות גרמית של התהליכים ספיני מורגשים.
מרחיבים את החתך לרוחב, כך החתך חוצה את כל רוחב הזנב, ותופס את התהליכים הסיבוביים במטסים כדי להבטיח עומק תקין. לאחר מכן להאריך את החתך האנכי מילימטר אחד מתחת לתהליך ספיני משני הצדדים. מניחים את החיה בצד אחד, ומתחיל מנקודת הגחון של החתך האנכי, לעשות חתך אופקי של כ 15 מילימטרים עבור בעלי חיים כי הם 10 עד 20 גרם במשקל.
השתמש במספריים כדי לנתח מיד דרך החתך האופקי עד עמוד החוליות מורגש בקו האמצע. לאחר מכן הפעל את החיה לצד השני וחזור על התהליך. לאחר לנתח במישור המדיאלי העמוק משני הצדדים, לנתח דרך קו האמצע כדי לחבר את שני חתכים אופקיים.
לאחר מכן, להעביר את פיסת הזנב החופשית ואת הרדנום לצד אחד כדי לחשוף את התהליכים ספין. מניחים את החיה במצב נוטה עם הראש מול הצד הלא דומיננטי של המנתח, ולהשתמש בזוג מעצורים כדי לתפוס את התהליכים ספיני, רק caudal לגפיים האחוריות. יש למרוח הרמה עדינה למעלה ולקראת ראש החיה.
מניחים את הלהבים של זוג מספריים מיקרו אופקי סביב התהליך בעדינות לחתוך אותו, חושף את חוט השדרה. לתפוס את התהליך ספיני caudal לזה רק הוסר, ולחזור על התהליך. זה הכרחי כי אתה שומר על הרמה מתמדת על תהליך ספיני כדי להבטיח כי זה לא לגרום נזק לחוט השדרה כאשר הוסר.
אם האזור החשוף אינו רחב מספיק, השתמש בשני זוגות מדפים כדי לתפוס את הלמינה משני צידי חוט השדרה ולסובב אותם לרוחב בתנועה עדינה. בעת הסרת התהליך הסיבובי, ייתכן שיהיה צורך לעשות זאת בשלבים מרובים. לכן, חשיפת חוט השדרה עשויה להימשך מספר דקות.
כדי להציג פציעה מסוג חבלה, השתמש בצלחת פטרי כדי להעביר את החיה ליחידת הטראומה ולהאיר פנס על חוט השדרה. לאחר מכן, מניחים את יחידת טראומת חבלה צילינדר מעל חוט השדרה חשוף באמצעות מכוונני מיקרו, ולהוריד את הצילינדר עד שהוא ברמה עם laminae. חבר את המוט הנופל למגנט האלקטרו, והצב את גליל התאמת הגובה הנופל הרצוי ביחידת הטראומה.
לאחר מכן, מניחים את המוט הנופל על הצילינדר, מכבים את האלקטרומגנט כדי להפיל את המוט על חוט השדרה החשוף, ולהשתמש בבורג כוונון הגובה כדי להרים את המוט בחזרה למעלה. אם מציגים פציעה חדה, חותכים את חוט השדרה בחתך אנכי מושלם, ואז חוזרים על החתכים שני מילימטרים לצד הקוודאלי של הגוף. הרגישו את להבי המספריים מגרדים לאורך החלק הגחוני של תעלת עמוד השדרה כדי להבטיח שהחתכים יושלמו, והרימו את פיסת חוט השדרה מהתעלה.
כדי לסגור את הפצע הכירורגי, מניחים 10 נקודה O תפרים ניילון מהחלק caudal ביותר של החתך האופקי סוגר את הפצעים בשכבה אחת ועובד לקראת החלק האנכי של החתך. כאשר מגיעים לזווית, הופכים את צלחת פטרי ותפורים את החתך האופקי השני, ואז מניחים תפרים על החתכים האנכיים. לפני סיום ההרדמה, להשתמש אולטרסאונד בתדר גבוה כדי לרכוש תמונות של הפציעה.
מיישרים את קצה מתמר עם ציר האורך של החיה, ומטביעים אותו בתסכולת בנזוקאין עד שהוא נמצא רק כמה מילימטרים מעל התיל שמאחורי הגפיים האחוריות של החיה. זהה את אתר הפציעה ורכוש תמונות בהתאם לכיווני כתב היד. בסיום, להחזיר את axolotl לפתרון חינם הרדמה על ידי שקוע צלחת פטרי במים מתוקים עמוקים חמישה סנטימטרים ולתת את החיה להחליק.
הפציעות בחוט השדרה שנוצרו באמצעות פרוטוקול זה אומתו באמצעות מכתים המטוקסילין ואאוסין על axolotls פצועים ו sham. כדי לאשר התחדשות, חלקים היסטולוגיים הוכנו תשעה שבועות לאחר פציעה. התמונות הראו חיבור מחדש של חוט השדרה בבעלי החיים הפצועים.
פציעה והתחדשות אנחנו גם ואחריו בחינת תפקוד נוירולוגי. תגובת החיה לגירוי הזנב קיבלה ציון גבוה יותר המעיד על תפקודים חושיים מישושים ונוציפטיים גבוהים יותר. בין בעלי החיים הפצועים, היה אובדן תפקוד נוירולוגי שלושה שבועות לאחר פציעה, ושיקום הדרגתי בתוך תשעה שבועות.
הפגיעה בחוט השדרה גם דמיינה באמצעות הדמיה גרפית קולית, אשר אפשרה הדמיה של העורק הגבי כסמן של שלמות כלי. סריקות MRI היי-שדה בוצעו מיד לאחר פציעה ובמשך שלושה, שישה ותשעה שבועות. סריקות אלה הצליחו לדמיין בצקת ושחזור של שלמות חוט השדרה.
הסריקות מיד לאחר פציעה, היו מועדות לרעש. ניתוח סבלני ומוקפד יסלול את הדרך לתוצאה מוצלחת לאחר כריתת למין ללא נזק מוקדם לחוט השדרה. בעקבות הליך זה, ניתן ליישם מספר שיטות in vivo, כגון הדמיה וטכניקות אלקטרופיזיולוגיות.
