Name: puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis
Uploaded: 2018-03-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis at JoVE.com

המחברים מודים Linnea Tankred ודיאנה Rydholm על גידול בעלי חיים.

BALB/c העכבר הגורים של מין או על פי המשפט שימשו את השימוש של בעלי חיים Ophthalmologic ומחקר חזון, הפרוטוקולים אושרו על ידי הוועדה של שטוקהולם לחקר בעלי חיים אתיים. עכברים היו בבניין המלטות, יחד עם האמא סיעוד, עם מחזור יום/לילה 12 שעות, גישה חופשית מזון ומים, ולא תחת פיקוח יומיומי.
הערה: עבור הליך כירורגי, עכברים נשמרו תחת הרדמה עם איזופלוריין נדיף. משחות עינית הן רוחך במהלך הליכי עינית, כפי שהם עשויים להפריע טיפולים וחומרים בשימוש. במידת הצורך, כדי למנוע עין-יבש, טיפה של פתרון סטרילי מלוחים נורמלי יכול להיות מיושם. אך דקירות uveal הריפוי העצמי, הוקדשה במהלך דקירות uveal כדי להבטיח עקרות כלי ניתוח. טיפול לאחר ניתוח כולל שתיה עם תמיסת מלח רגיל subcutaneously, שיכוך כאבים עם עינית הממשל אקטואלי של tetracaine הידרוכלוריד. הגורים הורשו לשחזר recumbency בחזה ובצלעות על כרית החימום לפני מוחזר אם מניקה, בתוך כלוב נקי. המלטות נשמרו עם האם ההנקה באותו להימנע ממתח נפשי.
1. הרדמה
<ol><li>הכינו את התא אינדוקציה של הרדמה, לנהל איזופלוריין הרדמה ולהבטיח כי מסכת עכבר קטן זה משולב גם. הערה: לבצע ניסויים בבעלי חיים כל מסכים עם כל האישורים אתיים החלים.</li>
	<li>Prefill תא אינדוקציה עם 3-4% איזופלוריין נדיפים באוויר האטמוספרי. הערה: הרדמה חומרים שונים חוץ מאשר איזופלוריין עשוי לשמש, על-פי היתרים אתית. נדיף הרדמה הליכי צריכה להתבצע על ברדס ספסל או fume מאוורר.</li>
	<li>המקום לאחר הלידה (P) בת 12.5 יום BALB/c העכבר גור בבית הבליעה אינדוקציה. לאשר המנגנון הרדמה הוא מוכן למסור את איזופלוריין אל התא אינדוקציה. הערה: העכבר הגורים הם מאוד שבירים ויכולים טיפל בצורה הטובה ביותר עורפה. לשמור יחד את הגורים בהמלטה או עם האם ההנקה להימנע ממתח נפשי.</li>
	<li>לאפשר הכלבלב להיות מורדם לחלוטין.</li>
	<li>. בעדינות, תרים את הכלבלב העכבר הזה. הערה: לשמור את התא אינדוקציה סגורים בבית כל הזמן אינדוקציה יציבה ובטוחה.</li>
	<li>להעביר את העכבר המסכה מכרסמים. הקפד להחליף את זרימת הרדמה מן החדר אינדוקציה למסיכה בעת הזזת העכבר.</li>
	<li>לבצע צביטה הבוהן כדי לאשר הרדמה.</li>
</ol>2. לנקב הליך תחת סטריאוסקופ כירורגי
<ol><li>מיקום העכבר במצב recumbency לרוחב. לאשר שהמסכה היא ממוצבת היטב כך העין העכבר נמצא שדה הראייה של סטריאוסקופ.</li>
	<li>סובב בעדינות את הראש העכבר כך העין פונה מעלה, לעבר סטריאוסקופ. הערה: מיקוד של העין צריך להיעשות תחת סטריאוסקופ. עבור מיקום, מומלץ על ההגדלה של 16 X, בעוד 40 X אמור לשמש לביצוע הליך כירורגי. אם היתרים אתית מאפשרות זאת, חיתוך קצה נכון יכול להקל את הפריט החזותי של העין.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים קשירת קטן, בזהירות בולטות העין של הכלבלב על ידי הפעלת לחץ כלפי מטה על העפעפיים הגבי ו הגחון לעין.</li>
	<li>לשמור על אחיזה עדינה, אך המשרד ליד של הגורים העין, עם מלקחיים קטנים. הערה: מומלץ לבצע את חדירת העין, מכסה מחזיק ביד האחרת, כמו היד הדומיננטית צריך לבצע את ההליך פנצ'רים.</li>
	<li>השתמש את סטריאוסקופ כדי לאתר את הקרנית לימבוס. הלבקן BALB/c לימבוס ניתן לזהות בקלות על ידי מקלעת וסקולרית מעגלית האחורי בקרנית.</li>
	<li>עם מחט בקוטר (30 גרם) 0.25 mm משופע, לבצע ניקוב uveal קטן, ליד הגבול limbal האחורי הענבייה. השתמש רק את קצה המחט, לא יותר מחצי שיקוע (שקול ל- 0.5 מ מ), לנקב את uvea. אם מבוצע כהלכה, הנקבים uveal הם עצמית איטום, אבל תוך-עיני הזרקת חומר הלימוד יכול להינתן דרך הפצע לנקב אותו. הערה: אם חווה עם עכבר עינית האנטומיה, הניקוב uveal מבוצע בין ריסי הגוף serrata אורה. חייבים להקפיד בעת ביצוע הניקוב uveal כדי למנוע קריעה העדשה.</li>
	<li>לבצע הניקוב uveal השני באתר הנגדי של העין מן החדירה הראשונה. למטב את המרחק והמיקום של הנקבים; שקול 12, שעה 6 נקבים, עם 12 השעה להיות כמו הגבי ככל האפשר.</li>
	<li>חזור על הפעולות דקירות uveal כל 4 ימים עד P24.5. לפני כל ניקוב uveal רצופים, לנטר מצב החיות תשומת לב מיוחדת הימצאות קטרקט טראומטי עקב נזק לעדשה במהלך חדירה uveal, או ברור לחץ עינית מופחתת. המטרה עבור ביצוע דקירות. אני חוזר-באותן משרות כמו דקירות קודמות על השפעות אופטימאליות.</li>
</ol>3. לא פולשנית in Vivo ניטור
<ol><li>לפני ' דקירה או זריקות בכל יום ניסיוני, עזים ומתנגד העכבר כפי שבוצע לעיל.</li>
	<li>עם העכבר במצב recumbency לרוחב, בעדינות בולטות לעין.</li>
	<li>מתמקדים איריס להערכת עם סטריאוסקופ כירורגי.</li>
	<li>לצלם להערכת איריס עם מצלמה התאימה ל סטריאוסקופ כירורגית. הערה: אם כי לא הכרחי, גרימת מיוזה עשויה להועיל לנרמל את איריס שטח, בעלי חיים. קח בחשבון היתרים אתית בעת בחירת סוכן בתדר מיוזה. זהירות מוקד להערכת איריס יקל עוד ניתוח כמותי. בסדר גודל של 40 X מומלץ.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>הכלבלב BALB/c להסיר המסכה מכרסמים, בעדינות להעביר אותו כרית החימום שכבתית עם מזרן כירורגי.</li>
	<li>טיפה אחת של 1% פתרון tetracaine חלות על העיניים מנוקבת. הערה: פתרונות כאבים אחרים ניתן להשתמש, על-פי היתרים אתית.</li>
	<li>מימה החיה עם זריקה תת עורית של µL 200 תמיסת סטרילית נורמלי.</li>
	<li>לחזור הגורים האמא סיעוד בתוך כלוב עכבר נקי.</li>
	<li>לפקח על תהליך ההחלמה. הכלבלב אמור להיות מסוגל deambulate ולחזור הגורים.</li>
</ol>5. עין העקירה
<ol><li>להרדימו על ידי נקע בצוואר הרחם. לבצע את העקירה לנתיחה תחת סטריאוסקופ להמחשת טוב יותר של ההליך. הערה: המתת חסד שונות ניתן להשתמש בהליכים. מומלץ לדבוק בקפדנות היתרים אתית.</li>
	<li>להפריד את העפעפיים כדי לשפר את החשיפה לעין.</li>
	<li>לעשות חתך קטן (כ 0.5 ס מ) ליד canthus של בעפעפיים במספריים העין מעוקל של בון.</li>
	<li>להשתמש בשטח חשוף periocular להוספת מיקרו מלקחיים קשירה מאחור (תחת) כדור הארץ במסלול.</li>
	<li>. תפוס את הרקמות הסובבות את העין ומשוך בעדינות כלפי מעלה. להימנע המעצר על גבי גלגל העין, השתמש הרקמות הסובבות קרוב כדי ארובת העין.</li>
	<li>הכנס את המספריים העין בון מעוקל מאחורי העולם העין מסלולו.</li>
	<li>לחתוך דרך הרקמות הסובבות עד העין הוא שוחרר מן השקע. הערה: טכניקה דיסקציה זו שומרת על העין אנטומיה ויתרונות חשפה.</li>
	<li>המשך הסרת רקמה שאינם שייכים מהעין. הסרת רקמת חיצוני יכול להתבצע לאחר תיקון, אם מועדף. הערה: BALB/c עכברים הם מלנין לקוי, לכן, כדי להגדיל את החדות, רקע כהה מומלץ כדי להקל על הליך לנתיחה.</li>
	<li>בקצרה שטיפה העין כולה בצלחת פטרי מלא מלח סטרילית באגירה פוספט (PBS).</li>
	<li>להעביר את העין צינור 2 מ"ל המכיל 1.5 מ של 4% פורמלין buffered פתרון.</li>
	<li>לתקן את העין במשך 6 שעות בטמפרטורת החדר. הערה: תיקון מקנה את הנוקשות של הרקמה ואסטמה ומקילה על ניתוח של הקשתית. תיקון זמן עליו נבדק, מותאם עבור יישומים שונים.</li>
</ol>6. איריס הליך ניתוח תחת סטריאוסקופ
<ol><li>הסר את הפתרון מקבע הצינור עם פיפטה פסטר פלסטיק של 1.5 mL (או דומה), ולשטוף את העין 3 פעמים עם PBS טריים.</li>
	<li>מקום העין קבוע משטח יבש חלק (דיסקציה מעמד) לחדר הקדמיות כלפי מעלה.</li>
	<li>עם מחט 30 G משופע, לבצע נקודת כניסה האחורי לימבוס.</li>
	<li>מחזיק את המקטע הקדמי עם מלקחיים קשירת קטן, להוסיף עצה אחת מספריים ישר קליימן-Vannas לתוך הפתח שנוצרו בעבר. הערה: מומלץ כדי לשלוט המלקחיים עם היד הלא דומיננטית, את המספריים עם הדומיננטי.</li>
	<li>תוך כדי סיבוב את העין עם המלקחיים קשירה, לעקוף לימבוס להסיר את המקטע האחורי של העין. הערה: ביצוע חלקית הקיצוצים יאפשר הקצה הפנימי של המספריים להמשיך בתוך רקמת ו מאוד מקלה על התהליך.</li>
	<li>מקם את המקטע הקדמי מופנות כלפי מטה, לחשוף את העדשה.</li>
	<li>הסר את העדשה בקפידה על ידי תופס אותו עם מלקחיים קטנים ומושך כלפי מעלה. הערה: מחט משופע יכול לשמש כדי לנקב ומשוך את העדשה.</li>
	<li>מקם את המקטע הקדמי עם הקרנית פונה כלפי מטה, החתך בניצב שדה הראייה.</li>
	<li>בעדינות לתפוס את הרקמה האחורי לגוף ריסי עם המלקחיים קשירת קטן.</li>
	<li>במספריים ישר קליימן-Vannas, להמשיך לקצץ רק והשתרשה עמוק בלבה לגוף ריסי כדי להסיר את trabecular meshwork ולבודד את הקשתית. לאשר כי meshwork trabecular מוסר; הקשתית צריכה להעביר בתוך הקרנית.</li>
	<li>בזהירות להעביר את עיינית הקדמי עם המלקחיים קשירת קטן, מחזיק את הקרנית, על צלחת 96-ובכן המכיל 200 µL ל- PBS.</li>
	<li>המשך החזקת הקרנית בבאר ומנתחים את הקשתית על ידי שטיפה עם PBS עם פיפטה. הערה: אם כנצרות שרידים איריס בקרנית, meshwork trabecular מסוימים ייתכן ההוה שיפוע של מחט 30 G יכול לשמש כדי לעזור ועקרו מבתיהם את הקשתית.</li>
	<li>להסיר את הקרנית 96-ובכן עם המלקחיים קשירת קטן, ולשמור את הקשתית מבודד בתוך הבאר לניתוח נוסף.</li>
	<li>לאחסן דגימות איריס לתרשים ב 4 º C. הערה: למרות להיות קבוע, אחסון לטווח ארוך של הדגימות לתרשים איריס אינה מומלצת.</li>
</ol>7. אפשרי הקריאות ניסיוני
<ol><li>כדי להמחיש את כלי הדם ב- האיריסים גזור, השתמש לתרשים אימונוהיסטוכימיה כולה-הר מכתים שיטות כגון טסיות תא אנדותל אדהזיה מולקולה (PECAM)-1 או isolectin B4. לחלופין, השתמש זלוף לכל הגוף עם צביעת כלי דם, כגון התווית על-ידי פלורסנט משקל מולקולרי גבוה dextrans.</li>
	<li>השתמש ויוו תמונות לא פולשנית כדי לבצע סיליקו שטוח-הרכבה ולכמת להערכת איריס מלא עם תוכנת הדמיה המתאימה. הערה: להערכת ניתן לכמת, הן ויוו והן במבחנה, באמצעות densitometry או להערכת ניתוח תוכנה9.</li>
	<li>לעבד את כל גלגל העין עבור חומצות גרעין והפקת חלבונים, ואחריו בשיטות PCR או immunoblotting, לבצע ניתוח מולקולרית של העיניים מנוקבת. הערה: אנליזה מולקולרית של הרקמות מבוצעת בצורה הטובה ביותר עם רקמת שאינו קבוע, אבל ניתוח של איריס שאינו קבוע הוא מאוד מאתגר, השימוש של העין כל הפכה תוצאות משמעותיות מבחינה סטטיסטית מחקרים קודמים8.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

בפרוטוקול הנוכחי, מוצגת שיטה עבור אינדוקציה של איריס תגובת כלי הדם על ידי ניקוב uveal. הניקוב מפעיל מנגנוני ריפוי הפצע ומקדם תגובות כלי הדם איריס10,11. . זה מסכים עם פתולוגיות עינית, כגון PDR ו- NVG, שבו האנגיוגנזה החמירה תגובות מן הרשתית בקטע האחורי של העין, מסתיימים המצב הקליני של rubeosis iridis, אמוניה בסביבות מוגברת הקשתית12 ,13.
הקרנית avascular, בעל מבנה מוזר קולגן וכתוצאה מכך שקיפות. בקו זה, שקיות של המקטע הקדמי של העין עבור ויזואליזציה של איריס להערכת הוא בר השגה על ידי פריט חזותי ישיר של איריס כלי דם עם ויוו שיטות לא פולשנית13,14. דגמים בעלי חיים קודמים של איריס כורוידאלית הסתמכה על חיות גדולות-עיניים איפה התערבויות כירורגיות מורכבות היו שבוצעו15,16,17, או על-ידי הזרקה תוך-עיני של חומרים ספציפיים אנגיוגנזה 18 , 19. בשיטה זו, השימוש של עכברים BALB/c חסר פיגמנט מאפשר התבוננות ישירה של ה איריס להערכת ויוו, ומאפשר לא פולשנית כימות כורוידאלית איריס בעכברים, ובכך לספק כלי חדש ללמוד אין ויוו אנגיוגנזה.
יתר על כן, שיטת הציג עבור העכבר איריס לנתיחה מאפשר ניתוח של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית עם כלי דם סמנים ספציפיים. . הנה, איריס כלי illustratively היו מוכתמים נוגדנים PECAM-1, דמיינו ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ. פרוטוקולים לתרשים, כולה-הר immunostaining הם בקלות מושגת, שגרתיות למדי. בנוסף, שיטות זלוף כלי הדם יכול להתבצע במודל זה. צביעת ספציפית לכלי הדם מעניק הערכה של איריס מבנה כלי הדם ובכך כמת, מאת מבוססי-משתמש או תוכנת ניתוח, איריס neovasculature9. כפי שתואר קודם לכן8,20, האיור של איריס neovasculature נאמד ב יום 15 פוסט-puncture-אינדוקציה. עם זאת, ההשפעות על איריס vascularization יכול להיות שנצפו מוקדם ככל יום 4 פוסט-puncture-אינדוקציה, רומז כי ההערכה של המודל כורוידאלית איריס הנוצרות על-ידי ניקוב יכולים להתבצע בנקודות זמן שונות, בהתאם ספציפי דרישות ניסיוני.
ראוי לציין למצב שבו פרוטוקול זה מציג כמה אתגרים, במיוחד הקשורים לגודל העיניים עכברים ביחס מודל בעל חיים אחר. נקטו זהירות יש לנקוט בעת ביצוע ההליך ניקוב uveal, כדי להימנע נגיעות עדשה או נזק לעין. תצפית של מצב עינית היא פרמאונט, ובעלי הצגת ניסיוני הקשורות קטרקט או ירידה בלחץ עינית צריך להיות לא נכלל כראוי מורדמים. קשתיות העין העכבר הם רגישים במיוחד דביק במקצת. ניתוח ראוי ובידוד של הרקמה מציג עוד צעד קריטי עבור הפרוטוקול. הפרדה נכונה בין meshwork trabecular הוא הכרחי עבור הזחה של הקשתית מן החדר הקדמי. יתר על כן, בשל השבריריות, איריס בידוד מחייב קיבעון של הרקמה, הפוגע אנליזה מולקולרית במורד הזרם. למרות זאת, ניתוח מולקולרית של עין-כל מבולבל יושם בהצלחה שיטת הציג8.
לסיכום, הפרוטוקול המתואר מציג מודל העכבר כורוידאלית איריס הנוצרות על-ידי ניקוב הרומן. מודל זה יש יתרון המאפשר ויוו לא פולשנית פריט חזותי ישיר של אנגיוגנזה. בנוסף, השימוש של מכרסמים קטנים רינדור דגם הציג אטרקטיבי עבור מחקרים של rubeosis iridis, כפי שהוא מונע את השימוש בבעלי חיים גדולים-עיניים מלווה הגבלת אתית. יתר על כן, ההליך יכול להיות משולב עם הזרקה של חומרים פרו - או אנטי-אנגיוגנזה חדירה עצמית איטום, לשיפור השימושיות שלה בתור מודל חדש של ויוו אנגיוגנזה.

איריס, יחד עם גוף ריסי, דמית, כוללת את uvea, המהווה הרקמה vascularized ביותר של העין. איריס להערכת חיוני בשמירה על הומאוסטזיס בתא הקדמי של העין. כתוצאה שופע קשרים anastomotic בין העורקים והוורידים, כלי דם איריס לספק חומרים מזינים אספקת החמצן לא רק את הקשתית עצמה, אלא על כל קטע הקדמי של העין1.
היווצרות של כלי דם חדשים, או אנגיוגנזה מכל אלה קיימים, היא מהותית תהליכים פיזיולוגיים, כגון פיתוח ו-2ריפוי הפצע. אנגיוגנזה דק מוסדר על ידי מספר רב של גורמים הקנוני, כגון כלי הדם צמיחה אנדותל (VEGF) והמעכב activator plasminogen (PAI), וכן מספר גורמים דלקתיים, והוא חוסר איזון של גורמים אלה יכול להוביל ל פיפטות אנגיוגנזה3.
בעיניים, כורוידאלית הוא הגורם למחלות מסכנות הראייה, כמו רטינופתיה סוכרתית המקדימות (PDR) ו neovascular גלאוקומה (NVG). אלה מחלות עינית, מוקד כורוידאלית בדרך כלל ממוקם רקמות ברשתית, ובכל זאת חוסר איזון של דלקתיות, גורמי אנגיוגנזה בנבכי בשני האחורי ו הקדמי עינית העין שויכה rubeosis iridis, מונח רפואי עבור איריס פתולוגיים neoangiogenesis4. פתולוגיות אלה מציינים את היכולת של הקשתית הבוגרים לעבור אנגיוגנזה. בעכברים, להערכת עינית לא בוגר לאחר הלידה וממשיך לאחר לידה התבגרות. זה ייחודו של הפיתוח הוא מנוצל במודל עכבר של חמצן-induced רטינופתיה, מודל זה מקרוב מחקה את המצב הקליני של רטינופתיה prematurity5. בנוסף, אנגיוגנזה ודלקת לשחק תפקיד מרכזי מנגנונים6ריפוי הפצע, פצע מרפא את עצמו שויכה אנגיוגנזה מודלים7.
במחקר זה, נתאר מודל של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית. דקירות uveal מבוצעות ליד הגבול של לימבוס, אשר זירוז איריס כורוידאלית על ידי מפעילה מערכת ריפוי הפצע. בשל שקיפות הקרנית, איריס להערכת יכול להיות מנותח בקלות ויוו באמצעות שיטות לא פולשנית. העיניים מנוקבת להציג עלייה של המיטה כלי הדם של הקשתית, אשר היה קשור עם עלייה של הפעלת plasminogen וסמנים דלקתיים8. המודל שהוצגו יש פוטנציאל גדול כמו כלי חדש ללמוד אנגיוגנזה וסינון האנגיוגנזה תרכובות ומאפשרת ישירה ויוו ויזואליזציה של תהליכי אנגיוגנזה.

<table><tbody><tr><td>Bonn eye scissors</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>23060</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas curved scissors</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>E3383 C</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas straight scissors</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>E3383 S</td><td></td></tr><tr><td>Objective adapter for camera</td><td>Handcrafted</td><td>N/A</td><td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td></tr><tr><td>Heating Pad 100-110 watts</td><td>Non Applicable</td><td>N/A</td><td>Available in pet/veterinarian stores</td></tr><tr><td>Hypodermic 30g beveled needle</td><td>KDM GmBH germany</td><td>911914</td><td></td></tr><tr><td>Iphone 4S</td><td>Apple</td><td>Non Applicable</td><td>Or other high resolution image acquistion device</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>KDG 9623</td><td></td></tr><tr><td>McPherson tying forceps</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>E1815 S</td><td></td></tr><tr><td>Micro tying forceps</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>Minims tetracaine hydrochloride</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>N/A</td><td>1 % (w/v) Eye Drops</td></tr><tr><td>Neutral-buffered formalin</td><td>Bioreagens</td><td>0018-40</td><td></td></tr><tr><td>Normal saline solution</td><td>Fresenius Kabi</td><td>210352</td><td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td></tr><tr><td>Petri dish 10 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 3 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3900</td><td></td></tr><tr><td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td><td>Starstedt</td><td>72.685.200</td><td>Or any eppendorf style tubes</td></tr><tr><td>TC plate 96-well</td><td>Starstedt</td><td>83.3924</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipette 3.5 mL</td><td>Starstedt</td><td>86.1171</td><td>Or any other Pasteur pipette style</td></tr><tr><td>Univentor 400 anesthesia unit</td><td>Univentor Limited</td><td>N/A</td><td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td></tr><tr><td>Wild M650 surgical microscope</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>N/A</td><td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td></tr></tbody></table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

נתאר מודל של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית כמודל כללי להערכה לא פולשנית של אנגיוגנזה. המודל הוא גם רלוונטי עבור מיקוד neovascular גלאוקומה, סיבוך סכנת הראייה של רטינופתיה סוכרתית. שיטה זו מבוססת על אינדוקציה של איריס תגובת כלי הדם על ידי סדרה של דקירות uveal עצמית איטום על עכברים BALB/c, מנצל ההבשלה לאחר לידה של עכבר עינית להערכת. הגורים העכבר לעבור דקירות uveal מיום כמחנכת 12.5, כאשר הגורים באופן טבעי לפקוח את עיניהם, עד ליום כמחנכת 24.5. בשל שקיפות הקרנית, איריס להערכת ניתן לנתח בקלות בזמן על ידי שיטות לא פולשנית ויוו . יתר על כן, הקשתית שקוף למחצה של עכברים BALB/c ניתן flatmounted לניתוח נתונים היסטוריים immunohistologic עם רקע שאינם ספציפיים מכתים. במודל זה, אנגיוגנזה הוא מונע בעיקר על ידי דלקתיות, הפעלת מערכות plasminogen. המודל הנוצרות על-ידי ניקוב הוא הראשון כדי לגרום כורוידאלית איריס, מכרסמים קטנים, ויש לו יתרון המאפשר ישירה לא פולשנית ויוו ניתוח של תהליך אנגיוגנזה. יתר על כן, המודל יכול להיות משולב עם חומרים להתכוונן האנגיוגנזה, אשר מדגיש את הפוטנציאל במחקר של אנגיוגנזה בפרספקטיבה ויוו .

הגורים העכבר BALB/c לבקן-P12.5 היו נתונים נקבים uveal, חוזר על עצמו בכל יום הרביעי (ניסיוני יום 0, 4, 8, 12), עד P24.5. P27.5, עכברים היו מורדמים, אירוסים גזור בקפידה (ניסיוני יום 15). תמונות של העכבר העיניים צולמו עם מצלמה מחוברת סטריאוסקופ כירורגי לפני כל סדרת לנקב בכל יום ניסיוני להעריך הערכה לא פולשנית של איריס תגובת כלי הדם. דקירות uveal לגרום לתגובה כלי הדם של הקשתית ידי המעוררים את הפצע ריפוי מערכת (איור 1). בשל שקיפות הקרנית, עכברים BALB/c מלנין לקויה, להערכת איריס מוגבר ברצון גלוי מיום ניסיוני 4 (P16.5), ומעצים לאורך משך הפרוטוקול. אימונוהיסטוכימיה תמונות עבור PECAM-1 מציינות עלייה להערכת הכללית בקשתיות עיניים מנוקבת לעומת שולט (איור 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig1.jpg"> איור 1: ניטור לא פולשנית של איריס הנוצרות על-ידי ניקוב אנגיוגנזה. תמונות נציג של יום 0, 4, 8, 12 ו- 15 של שליטה והעיניים מנוקבת. תגובת כלי הדם איריס ניכרת מיום 4 ואילך בעיניים מנוקבת. סרגל קנה מידה = 1 מ מ. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57398/57398fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig2.jpg"> איור 2: איריס תגובת כלי הדם בעיניים פנצ'רים-induced. תמונות המחשה של PECAM-1 מכתים מן היום 15 קשתיות העין, כתמונות תצוגה מלאה יוגדל שטח (מרובע), מתוך שליטה, ניקב את העיניים. סרגל קנה מידה = 400 מיקרומטר (למעלה); 200 מיקרומטר (למטה). הערה הגידול של כלי הדם סניפים קשתיות מנוקבת. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57398/57398fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis at JoVE.com

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

איריס כורוידאלית, סיבוך נפוץ של מחלת רשתית איסכמי, עלול להוביל סכנת הראייה neovascular גלאוקומה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מאתר להשראת כורוידאלית איריס ניסיוני העשויות לשמש להערכה לא פולשנית של חומרים להתכוונן אנגיוגנזה.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

8.8K Views.  Karolinska Institutet. איריס כורוידאלית, סיבוך נפוץ של מחלת רשתית איסכמי, עלול להוביל סכנת הראייה neovascular גלאוקומה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מאתר להשראת כורוידאלית איריס ניסיוני העשויות לשמש להערכה לא פולשנית של חומרים להתכוונן אנגיוגנזה.

Video: Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this protocol, we aim to guide the reader not simply through the technical considerations of generating laser-induced lesions to trigger neovascular processes, but rather focus on the powerful information that can be obtained from multimodal longitudinal in vivo imaging throughout the follow-up period.
The laser-induced mouse CNV model was generated by a diode laser administration. Multimodal in vivo imaging techniques were used to monitor CNV induction, progression and regression. First, spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) was performed immediately after the lasering to verify a break of Bruch&#39;s membrane. Subsequent in vivo imaging using fluorescein angiography (FA) confirmed successful damage of Bruch&#39;s membrane from serial images acquired at the choroidal level. Longitudinal follow-up of CNV proliferation and regression on days 5, 10, and 14 after the lasering was performed using both SD-OCT and FA. Simple and reliable grading of leaky CNV leasions from FA images is&#160;presented. Automated segmentation for measurement of total retinal thickness, combined with manual caliber application for measurement of retinal thickness at CNV sites, allow unbiased evaluation of the presence of edema. Finally, histological verification of CNV is performed using isolectin GS-IB4 staining on choroidal flatmounts. The staining is thresholded, and the isolectin-positive area is calculated with ImageJ.
This protocol is especially useful in therapeutics studies requiring high-throughput-like screening of CNV pathology as it allows fast, multimodal, and reliable classification of CNV pathology and retinal edema. In addition, high resolution SD-OCT enables the recording of other pathological hallmarks, such as the accumulation of subretinal or intraretinal fluid. However, this method does not provide a possibility to automate CNV volume analysis from SD-OCT images, which has to be performed manually.

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Here, we present the usefulness of longitudinal in vivo imaging in the follow-up of morphological changes of laser-induced choroidal neovascularization in mice.

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

Neuroscience

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

Optimization of the Retinal Vein Occlusion Mouse Model to Limit Variability

Mouse models of retinal vein occlusion (RVO) are often used in ophthalmology to study hypoxic-ischemic injury in the neural retina. In this report, a detailed method pointing out critical steps is provided with recommendations for optimization to achieve consistently successful occlusion rates across different genetically modified mouse strains. The RVO mouse model consists primarily of the intravenous administration of a photosensitizer dye followed by laser photocoagulation using a retinal imaging microscope attached to an ophthalmic guided laser. Three variables were identified as determinants of occlusion consistency. By adjusting the wait time after rose bengal administration and balancing the baseline and experimental laser output, the variability across experiments can be limited and a higher success rate of occlusions achieved. This method can be used to study retinal diseases that are characterized by retinal edema and hypoxic-ischemic injury. Additionally, as this model induces vascular injury, it can also be applied to study the neurovasculature, neuronal death, and inflammation.

Here, we describe an optimized protocol for retinal vein occlusion using rose bengal and a laser-guided retinal imaging microscope system with recommendations to maximize its reproducibility in genetically modified strains.

אופטימיזציה של מודל העכבר לחסימת ורידים ברשתית כדי להגביל את השונות

Mouse models of retinal vein occlusion (RVO) are often used in ophthalmology to study hypoxic-ischemic injury in the neural retina. In this report, a ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Quantification of Vascular Parameters in Whole Mount Retinas of Mice with Non-Proliferative and Proliferative Retinopathies

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, gliosis&#160;and a progressive change in vascular function and structure. Although the onset of the retinopathies is characterized by subtle disturbances in visual perception, the modifications in the vascular plexus are the first signs detected by clinicians. The absence or presence of neovascularization determines whether the retinopathy is classified as either non-proliferative (NPDR) or proliferative (PDR). In this sense, several animal models tried to mimic specific vascular features of each stage to determine the underlying mechanisms involved in endothelium alterations, neuronal death and other events taking place in the retina. In this article, we will provide a complete description of the procedures required for the measurement of retinal vascular parameters in adults and early birth mice at postnatal day (P)17. We will detail the protocols to carry out retinal vascular staining with Isolectin GSA-IB4 in whole mounts for later microscopic visualization. Key steps for image processing with Image J Fiji software are also provided, therefore, the readers will be able to measure vessel density, diameter and tortuosity, vascular branching, as well as avascular and neovascular areas. These tools are highly helpful to evaluate and quantify vascular alterations in both non-proliferative and proliferative retinopathies.

This article describes a well-established and reproducible lectin stain assay for the whole mount retinal preparations and the protocols required for the quantitative measurement of vascular parameters frequently altered in proliferative and non-proliferative retinopathies.

כימות של פרמטרי כלי דם ברשתיות הר שלמות של עכברים עם רטינופתיות שאינן מתרבות ושגשוגות

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, ...

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

<meta charset="utf8"></head><body>מודל עכבר לפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית לחקר פתולוגיות רשתית

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, and other vaso-occlusive conditions. This manuscript presents a method for inducing ischemia-reperfusion injury in a mouse model. The method utilized anterior chamber cannulation attached to a saline reservoir, generating hydrostatic pressure to raise the intraocular pressure to 90-100 mmHg. This method effectively caused constriction of retinal capillaries to induce retinal ischemia. At the end of the ischemic period (60 min), the intraocular pressure was normalized (&#8804;20 mmHg) before removing the cannula from the anterior chamber to initiate reperfusion. Days after the ischemia/reperfusion procedure, the eyes were collected and sectioned for histological staining. The histopathology of the retinal sections was scored by evaluating eight parameters of retinal injury: folds, hemorrhage, deformation, cell loss in the ganglion cell, inner nuclear, outer nuclear, and photoreceptor layers, and damage to retinal pigment epithelial cells. This method provided a reproducible model to study the mechanisms and pathology of retinal ischemia/reperfusion injury. In addition, this model can facilitate the discovery of potential therapeutic targets to treat retinal ischemia/reperfusion injury, advancing the study of retinal pathologies and improving patient outcomes.

<meta charset="utf8"></head><body>אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר

This protocol models retinal ischemia-reperfusion injury in a mouse eye by inducing retinal ischemia via anterior chamber cannulation and intraocular pressure elevation, followed by intraocular pressure normalization to initiate the reperfusion.

אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, ...

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע"י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

אופטימיזציה של מודל העכבר לחסימת ורידים ברשתית כדי להגביל את השונות

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

כימות של פרמטרי כלי דם ברשתיות הר שלמות של עכברים עם רטינופתיות שאינן מתרבות ושגשוגות

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר

אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר