אנו מודים ד אשטון, בארקלי (פ'), ק' Beimfohr, פ Bojorquez, ג'יי קאנטרל, G. קסטרו, ר כריסטנסן, ג'יי פרן, ג חרה, ד מיד, ג'י אוונס, ל' Rodarte, ד Sieglaff, א Sonoqui, מ Stefanek, סטיוארט ב', ג'יי טרחו, סלייד א ו Yescas אי לקבלת סיוע טכני. תמיכה חלקית סופק על ידי חקלאי-USDA מחקר שירות, משרד החקלאות-המכון הלאומי מזון ותוכנית חקלאות סיומת IPM הדברה ניהול חלופות מיוחד פרויקטים, כותנה אינקורפורייטד, אריזונה התאחדות מגדלי כותנה, כותנה יסודות USDA-צוחק, NAPIAP (המערבי), פרוייקטים מיוחדים אזור הספר המערבי IPM.

המחברים אין לחשוף.

בדרך כלל, התפתחות החיים טבלאות עבור חרקים multivoltine עם באופן כללי חופפים דורות מוגבלות ל גישה אנכי שבו אוכלוסיה נדגמים שוב ושוב לאורך זמן וטכניקות גרפית ו מתמטיות שונות משמשות לאחר מכן להעריך את הגיוס כדי השלבים השונים, להסיק שיעורי התמותה מלשנות צפיפויות של שלבי החיים שונים2. ה?...

החיים טבלאות הן כלי משותף עם היסטוריה ארוכה בתחום אקולוגיה1,2. טבלאות החיים הם שבעצם לוח זמנים לידות ופטירות בקרב אוכלוסיה לאורך זמן נתונים מסוג זה יכול לשמש כדי לכמת את מספר פרמטרים חשובים להבנת, חיזוי המלאכותיות. לוחות תמותה עשוי גם לספק מידע על נסיבות המוות, חשובים להבנת אינטראקציות עם מחלות וכן בפיתוח אסטרטגיות בקרה לניהול מזיקים במערכות חקלאיות וטבעי. לוחות תמותה המבוסס על שדה רבים נבנו עבור חרקים3,4,5, ניתוחים סיפקו תובנות חשובות דינמיקה, רגולציה, חיזוי של אוכלוסיות חרקים רבים מנוהל, מערכות טבעיות6,7,8,9,10,11,12,13,14. הטבלה החיים המונח משמש גם לעתים קרובות לתיאור במחקרי מעבדה מבוסס במידה רבה לבחון לוחות זמנים של לידות ופטירות אבל בתנאים מלאכותיים אינם חושפים את החרק התמותה הטבעית כוחות ולא מציאותי משתנים סביבתיים. באופן כללי, המטרה במחקרי מעבדה היא להעריך את הפוטנציאל biotic השוואתית של זן. המוקד של השיטות המתוארות כאן הוא עבור שדה המבוסס על חקירות המגדירים הבין את הפוטנציאל ביחס לסביבה.
לוחות תמותה שניתן לאפיין אופקי, שבו עמית אמיתי של אנשים בגילאי שווים עוקבים מתחילת חייהם עד מוות, או אנכי, איפה נלקחים דגימות בתדירות גבוהה לאורך זמן של אוכלוסיה עם מבנה גיל יציב בדוי אז המחירים חיוני הן להסיק מן גדודים מתמטית שלא נבנה2,15. הסוג של הטבלה החיים ניתן לפרוס תלוי באופי של החרק. לעיתים קרובות ניתן לפתח לוחות תמותה אופקי עבור חרקים univoltine (דור אחד בשנה), ואילו גישה כזו יכולה להיות מאוד מאתגרת עבור חרק multivoltine מרובה, נרחב חופפים דורות בכל שנה. שורה של שיטות אנליטיות יש כבר הציע, השתמשו לפתח לוחות תמותה אנכי עבור אוכלוסיות חרקים (ראה Southwood2 דוגמאות). המתודולוגיה המודגמות כאן מאפשרת התפתחות החיים עוקבה מבוסס, אופקי טבלאות בשדה עבור חרקים multivoltine עם מאפיינים ספציפיים על החיים, בעיקר, הנוכחות של החיים sessile בשלבים. השיטה הוא הפגין עבור נודניק מפתח כותנה כמערכת מודל.
כנימת עש הטבק, כנימת עש הטבק biotype B (= כנימת argentifolii, 1 קטין במזרח התיכון-אסיה16) הוא נודניק הכללית של החקלאות משפיעה באופן שלילי תפוקה ואיכות אגרונומית, הגננות גידולים חקלאיים רבים, כולל מוגן ומערכות חקלאיות באזורים ממוזגים17. השפעות להתרחש עקב שיפה האכלה זה משבש את זרימת החומרים המזינים, הפרעות של אטיולוגיה לא ידועה הנגרמת על ידי האכלה נטפלים, שידור של רבים צמח ווירוסים יבול באיכות אפקטים עקב בתצהיר של טל18,19 . החרק המארחת רחב טווח, הוא multivoltine, שיש רבים כמו 12-13 דורות בשנה בהתאם לאזור משאבי מזון זמין20. באתגרי ניהול גם הם בעיקר בשל הפוטנציאל הרבייה גבוהה, יכולתה לפזר ולהעביר בתוך ובין מערכות חקלאיות, חוסר של שלב השבתה הדרגתית (תרדמה ואסטרטגיה או estivation) והמחיקה שלו לפתח במהירות עמידות הדברה המשמש לדיכוי21,22.
התקדמות ניכרת נעשתה בפיתוח אסטרטגיות ניהול (IPM) הדברה משולבת לנהל בצורה יעילה וכלכלית אוכלוסיות של המזיק הזה מושפעת יבולים23,24,25. מערכות ניהול אלו שהתבססו על הבנה בסיסי צליל של הדינמיקה באוכלוסייה של עש דרב , לוחות תמותה היה טכניקה מפתח שאפשרו הבנה זו. באריזונה, טבלאות החיים אפשרו את הערכה וזיהוי של כוחות התמותה חשוב עבור עש ב 13,מערכות חיתוך מספר26, אפשרו מידת התמותה dynamics שיחסית אליה אסטרטגיות ניהול כולל-יעד השפעת קוטלי חרקים14, סיפק אמצעי להערכת ההשפעות האפשריות-יעד פונקציונלי של כותנה מהונדסת עם ייצור חלבונים חרקים27, תומך קפדני ההערכה הדברה ביולוגית קלאסית תוכנית28 (נאראנחו, נתונים שלא פורסמו) עזר כדי לחקור את ההשפעות השוואתית של ההשפעות מלמעלה, מלמטה למעלה על המזיק dynamics29. כל היישומים הללו יש לפרוס את המתודולוגיה המתוארת כאן. הגישה עשוי להיות יעיל עבור המחקר של אוכלוסיית החרקים אקולוגיה במספר מערכות טבעיות מנוהלים.

<table><tbody><tr><td>Flagging tape</td><td>Gempler, Janesville, Wisconsin USA</td><td>52273</td><td>Five colors</td></tr><tr><td>Manila merchandise tags</td><td>American Tag Company, Pico Rivera, California USA</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>Ultra fine point marker</td><td>Sanford, Bellwood, Illinois, USA</td><td>451898</td><td>Available at Office Max, Amazon</td></tr><tr><td>Peak Loupe 8X</td><td>Adorama, New York, NY USA</td><td>2018</td><td></td></tr><tr><td>Peak Loupe 15X</td><td>Adorama, New York, NY USA</td><td>19621</td><td></td></tr></tbody></table>

methodology for developing life tables for sessile insects in the field using the whitefly, bemisia tabaci, in cotton as a model system

לוחות תמותה מספקים לכמת את לוחות הזמנים של לידה ומוות של אוכלוסיות לאורך זמן. הם גם יכול לשמש כדי לכמת את מקורות ואת שיעורי התמותה בקרב אוכלוסיות, ובו מגוון של יישומים באקולוגיה, כולל מערכות אקולוגיות חקלאיים. חיים אופקי, או עוקבה מבוסס, טבלאות מספקות עבור שיטת הכי ישירה ומדויקת לכמת אוכלוסייה חיוני המחירים בגלל שהם פועלים קבוצה של יחידים באוכלוסייה מלידה למוות. . הנה, פרוטוקולים מוצגים ניצוח וניתוח טבלאות עוקבה מבוסס החיים בשטח כי מנצל הטבע sessile על שלבי החיים ילדותי נודניק חרקים גלובלית, כנימת עש הטבק. חרקים בודדים נמצאים בצד התחתון של העלים כותנה, מסומנים על ידי ציור מעגל קטן סביב החרק עם עט רעיל. החרק ואז ניתן לראות שוב ושוב לאורך זמן בעזרת היד עדשות למדוד פיתוח משלב אחד למשנהו, וכן לזיהוי שלב ספציפי גורם המוות הקשורים עם כוחות טבעיים והציג התמותה. ניתוחים מסבירים איך מודדים כראוי התמותה מספר כוחות המעשה הזה contemporaneously בתוך כל שלב וכיצד להשתמש נתונים כאלה כדי לספק מדדים דינמי אוכלוסייה משמעותי. השיטה לא ישירות בחשבון הישרדות למבוגרים, רבייה, אשר מגביל את היסק כדי הדינמיקה של שלבים לא בוגר. לדוגמה מוצג המתמקדים מדידת השפעת מלמטה למעלה (איכות הצמח) ואפקטים מלמעלה-למטה (אויבים טבעיים) על הדינמיקה התמותה של עש נולד ב- במערכת כותנה.

קוהורטה דוגמה מוצג בטבלה 2 כדי להציג מצגת טיפוסי ותקשורת חישוב של החיים טבלת תוצאות. לכידת הנתונים שימושי ביותר את שיעורי התמותה שולי עבור כל גורם בתוך כל שלב. על-ידי המרת המחירים הללו k-ערכים (פרוטוקול סעיף 6), התמותה ספציפי בשלב מעל כל הגורמים ותמותה גורם ספציפי ע...

Watch this Scientific Journal Video about Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System at JoVE.com

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

לוחות תמותה לאפשר כימות של מקורות ושיעורי התמותה בקרב אוכלוסיות החרקים ולתרום להבנת, חיזוי, מניפולציה הדינמיקה באוכלוסייה של agroecosystems. שיטות ביצוע וניתוח טבלאות עוקבה מבוסס החיים בשדה של חרק עם חיים לא בוגר sessile שלבים מוצגים.

מתודולוגיית פיתוח טבלאות החיים עבור חרקים Sessile בשימוש השדה כנימת עש הטבק, כנימת עש הטבק, כותנה כמו מערכת מודל

Life tables provide a means of measuring the schedules of birth and death from populations over time. They also can be used to quantify the sources and ...

methodology-for-developing-life-tables-for-sessile-insects-field

Universidad San Sebastian

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Statistics

Environment

Unit 1

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Survival Analysis

SCIENTISTS IN ACTION

11.8K Views.  USDA-ARS, Arid-Land Agricultural Research Center. לוחות תמותה לאפשר כימות של מקורות ושיעורי התמותה בקרב אוכלוסיות החרקים ולתרום להבנת, חיזוי, מניפולציה הדינמיקה באוכלוסייה של agroecosystems. שיטות ביצוע וניתוח טבלאות עוקבה מבוסס החיים בשדה של חרק עם חיים לא בוגר sessile שלבים מוצגים.

Video: Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Remote Sensing Evaluation of Two-spotted Spider Mite Damage on Greenhouse Cotton

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the two-spotted spider mite (TSSM), Tetranychus urticae Koch, on greenhouse grown cotton. TSSM is a polyphagous pest which occurs on a variety of field and horticultural crops. It often becomes an early season pest of cotton in damaging proportions as opposed to being a late season innocuous pest in the mid-southern United States. Evaluation of acaricides is important for maintaining the efficacy of and preventing resistance to the currently available arsenal of chemicals and newly developed control agents. Enumeration of spider mites for efficacy evaluations is laborious and time consuming. Therefore, subjective visual damage rating is commonly used to assess density of spider mites. The NDVI (Normalized Difference Vegetation Index) is the most widely used statistic to describe the spectral reflectance characteristics of vegetation canopy to assess plant stress and health consequent to spider mite infestations. Results demonstrated that a multispectral optical sensor is an effective tool in distinguishing varying levels of infestation caused by T. urticae on early season cotton. This remote sensing technique may be used in lieu of a visual rating to evaluate insecticide treatments.

This manuscript describes a multispectral optical sensor that effectively detected damage to early season cotton artificially infested with varying densities of the two-spotted spider mite populations.

הערכת חישה מרחוק של נזק עכביש קרדית דו הבחין על כותנה חממה

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the ...

A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug, Cimex lectularius, Eggs and First Instars

Standard toxicity evaluations of insecticides against insect pests are primarily conducted on adult insects. Evaluations are based on a dose-response or concentration-response curve, where mortality increases as the dose or concentration of an insecticide is increased. Standard lethal concentration (LC50) and lethal dose (LD50) tests that result in 50% mortality of a test population can be challenging for evaluating toxicity of insecticides against non-adult insect life stages, such as eggs and early instar or nymphal stages. However, this information is essential for understanding insecticide efficacy in all bed bug life stages, which affects control and treatment efforts. This protocol uses a standard dipping bioassay modified for bed bug eggs and a contact insecticidal assay for treating nymphal first instars. These assays produce a concentration-response curve to further quantify LC50 values for insecticide evaluations.

A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug,  Cimex lectularius, Eggs and First Instars

Insecticide evaluations are often targeted against adult insects, rather than immature stages. Here, we present a protocol for evaluating insecticides against bed bug eggs with a comparison to the first nymphal bed bug stage. These protocols could be adjusted for other insects to evaluate insecticide efficacy in non-adult life stages.

שיטה להערכת יעילות הדברה נגד פשפש מיטה,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, ביצים ראשית Instars

Standard toxicity evaluations of insecticides against insect pests are primarily conducted on adult insects. Evaluations are based on a dose-response or ...

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant viruses they vector. Despite numerous studies of the biology of these species in different environments, a key life history parameter, offspring sex ratios, has received little attention, yet is important for predicting population dynamics. The primary sex ratio (sex ratio at oviposition) of Bemisia tabaci has never been reported but can be found by determining the egg fertilization rate of this haplodiploid insect. The technique involves the dechorionation of eggs with bleach, a series of fixation steps, and the application of the general DNA fluorescent stain, DAPI (4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole, a DNA-binding fluorescent dye), to bind to female and male pronuclei. Here, we present the technique, and an example of its application, to test whether an endosymbiotic bacterium, Rickettsia sp. nr. bellii, influenced the primary sex ratio of B. tabaci. This method may assist in population studies of whiteflies, or in determining if sex allocation exists with certain environmental stimuli.

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

We present a simple cytogenetic technique using 4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) to determine the fertilization rate and primary sex ratio of the haplodiploid invasive pest Bemisia tabaci.

קביעת שיעור הפריה הביצית של כנימת עש הטבק בטכניקה Cytogenetic

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

Genetics

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many countries around the world. Severe yield losses are caused by direct feeding, and even more importantly, also by the transmission of more than 100 harmful plant pathogenic viruses. As for other invasive pests, increased international trade facilitates the dispersal of B. tabaci to areas beyond its native range. Inspections of plant import products at points of entry such as seaports and airports are, therefore, seen as an important prevention measure. However, this last line of defense against pest invasions is only effective if rapid identification methods for suspicious insect specimens are readily available. Because the morphological differentiation between the regulated B. tabaci and close relatives without quarantine status is difficult for non-taxonomists, a rapid molecular identification assay based on the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technology has been developed. This publication reports the detailed protocol of the novel assay describing rapid DNA extraction, set-up of the LAMP reaction, as well as interpretation of its read-out, which allows identifying B. tabaci specimens within one hour. Compared to existing protocols for the detection of specific B. tabaci biotypes, the developed method targets the whole B. tabaci species complex in one assay. Moreover the assay is designed to be applied on-site by plant health inspectors with minimal laboratory training directly at points of entry. Thorough validation performed under laboratory and on-site conditions demonstrates that the reported LAMP assay is a rapid and reliable identification tool, improving the management of B. tabaci.

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

This paper reports the protocol for a rapid identification assay for Bemisia tabaci based on loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technology. The protocol requires minimal laboratory training and can, therefore, be implemented on-site at points of entry for plant imports such as seaports and airports.

בתיווך לולאה Assay איזותרמי הגברה (מנורה), עבור זיהוי מהיר של כנימת עש הטבק

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these insecticides against adult insects or their impact on reproductive output. However, currently available methods assess adult mortality only, limiting the selection of novel insecticides with a different mode of action. In this work, different experimental methods were examined to identify the diverse effects on the CBB under laboratory conditions. For this, green coffee fruits (GFs) were collected and disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution followed by UV light irradiation. In parallel, CBB adults from a colony were disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution. To assess fruit protection (preinfestation), the fruits were placed in plastic boxes, and the insecticides were applied. Then, the CBB adults were released at a rate of two CBBs per GF. The GFs were left under controlled conditions to evaluate CBB infestation and survival after 1, 7, 15, and 21 days. To evaluate insecticide efficacy after CBB infestation (postinfestation), CBB adults were released to the GFs in a 2:1 ratio for 3 h at 21 &#176;C. Infested fruits showing CBB adults with their abdomens partially exposed were selected and placed in 96-well racks, and the CBBs boring into the fruits were treated directly. After 20 days, the fruits were dissected, and the CBB biological stages inside each fruit were recorded. The GFs served as substrates that mimic natural conditions to evaluate toxic, chemical, and biological insecticides against the CBB.

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

A method using green coffee fruits (GFs) was developed to test the toxicity of insecticides against the coffee berry borer (CBB). Insecticides or toxic substances were applied to disinfected GFs before or after CBB infestation. Insect mortality, repellency, and reproductive capacity, in addition to other parameters, were evaluated.

מתודולוגיה לבדיקת סוכני בקרה וקוטלי חרקים כנגד היפותנאמוס של ברי ברי הקפה

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these ...

Evaluating the Effect of Pesticides on the Larvae of the Solitary Bees

Current ecological risk assessments of pesticides on pollinators have primarily considered only laboratory conditions. For the larvae of solitary bees, ingestion of provisions contaminated with pesticides may increase the mortality rate of the larvae, decrease the collection rate and the population of adult solitary bees in the next year from a demographic perspective. But there are limited studies on the effects of pesticides on the larvae of solitary bees. Therefore, understanding how pesticides influence the larvae of solitary bees should be considered an integral part of pesticide ecological risk assessment. This study presents a method to expose the larvae of solitary bee, Osmia excavata, to lethal or sublethal doses of pesticide, tracking larval weight gain, developmental duration, eclosion ability, and food consumption efficiency conversion of ingested food. To demonstrate the effectiveness of this method, the larvae of O. excavata were fed with provisions containing acute lethal and sublethal doses of chlorpyrifos. Then, the above indexes of the treated larvae were investigated. This technique helps to predict and mitigate the risk of pesticides to pollinators.

The present protocol explains a method to feed pesticide-contaminated provisions to the larvae of the solitary bees, Osmia excavata. The procedure examines the ecotoxicity of the pesticide to the larvae of the solitary bees.

הערכת ההשפעה של חומרי הדברה על הזחלים של הדבורים הבודדות

Current ecological risk assessments of pesticides on pollinators have primarily considered only laboratory conditions. For the larvae of solitary bees, ...

Biochemistry

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

Bioassays עבור ההתנגדות הדברה ניטור

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

Biology

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2), in a lepidopteran species, the cotton bollworm, Helicoverpa armigera (Hubner). Here, we describe the protocols that are currently used to study the effect of HaDV2 on its host. First, we establish a HaDV2-free cotton bollworm colony from a single breeding pair. Then, we orally inoculate some neonate larval offspring with HaDV2-containing filtered liquid to produce two colonies with the same genetic background: one HaDV2-infected, the other uninfected. A protocol to compare life table parameters (e.g., larval, pupal, and adult periods and fecundity) between the HaDV2-infected and -uninfected individuals is also presented, as are the protocols for determining the host-tissue distribution and transmission efficiency of HaDV2. These protocols would also be suitable for investigating the effects of other orally transmitted viruses on their insect hosts, lepidopteran hosts in particular.

Here, we present a protocol to investigate the host-tissue distribution, transmission mode, and effect on the host fitness of a densovirus within a lepidopteran species, the cotton bollworm. This protocol can also be used for studying the interaction between other orally-transmitted viruses and their insect hosts.

פרוטוקולים לחקירת הפצת Host-הרקמה, הילוכים-mode, ואת ההשפעה על כושר Host של Densovirus ב bollworm הכותנה

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...

Immunology and Infection

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to study the functions and evolution of bacterial symbionts in their host. As most symbionts cannot be cultured in vitro, methods to isolate an adequate quantity of bacteria for genome sequencing are very important. In the whitefly Bemisia tabaci, a number of endosymbionts have been identified and are predicted to be of importance in the development and reproduction of the pests through multiple approaches. However, the mechanism underpinning the associations remains largely unknown. The obstacle partially comes from the fact that the endosymbionts in whitefly, mostly restrained in bacteriocytes, are hard to separate from the host cells. Here we report a step-by-step protocol for the identification, extraction and purification of endosymbionts from the whitefly B. tabaci mainly by dissection and filtration. Endosymbiont samples prepared by this method, although still a mixture of different endosymbiont species, are suitable for subsequent genome sequencing and analysis of the possible roles of endosymbionts in B. tabaci. This method may also be used to isolate endosymbionts from other insects.

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

Here, we present a protocol to isolate endosymbionts from the whitefly Bemisia tabaci through dissection and filtration. After amplification, the DNA samples are suitable for subsequent sequencing and study of the mutualism between endosymbionts and whitefly.

שיטות להפקת endosymbionts מן Whitefly<em&gt; Bemisia Tabaci</em

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to ...

Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. Insecticide resistance surveillance of mosquito populations is typically done through Centers for Disease Control and Prevention (CDC) bottle bioassays or World Health Organization (WHO) tube tests. However, these methods can result in a high degree of variability in mortality data due to variable insecticide contact with&#160;the insect, the relatively small numbers of organisms tested, extensive variation in mass between populations, and constantly changing environmental conditions, leading to variable outcomes. This paper presents the topical application bioassay, adapted as a high-throughput phenotypic bioassay for both mosquitoes and fruit flies, to test large numbers of insects along&#160;a range of insecticide concentrations.
This assay 1) ensures consistent treatment and insecticide contact with every organism, 2) produces highly specific dose-response curves that account for differences in average mass between strains and sexes (which is particularly important for field-collected organisms), and 3) allows for the calculation of statistically rigorous median lethal doses (LD50), which are necessary for resistance ratio comparisons-an alternative surveillance approach from diagnostic dose mortality, which is also used for larvicide resistance surveillance. This assay will be a complementary tool for accurately phenotyping mosquito populations and, as illustrated using fruit flies, is easily adaptable for use with other insects. We argue that this assay will help fill the gap between genotypic and phenotypic insecticide resistance in multiple insect species.

We describe the methodology and importance of the topical application bioassay to measure insecticide susceptibility in mosquitoes and fruit flies. The presented assay is high-throughput, utilizes insect mass-thus allowing for calculating a mass-relativized lethal dose instead of concentration-and likely has lower variability than other similar methods.

מתודולוגיית פיתוח טבלאות החיים עבור חרקים Sessile בשימוש השדה כנימת עש הטבק, כנימת עש הטבק, כותנה כמו מערכת מודל

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video