המחברים מודים תומאס מיסון לתמיכה הטכנית שלו, וכדי רחל קופק עבור תיקון כתב היד.

1. תרבויות חיידקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן דשא של החיידקים (ATCC Bacillus cereus זן 14,579) על ידי הפצת 100 μl של תרבות לילה של המתח וטופח על 30 מעלות צלזיוס LB (בינוני לוריא- Bertani), על פני השטח של צלחת של מדיום אגר LB. דגירה את צלחת הלילה ב C 30 °. </li></ol> 2. ECL: אורך שרשרת Equivalent <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב ECL כדלקמן: <img alt="משוואה" src="/files/ftp_upload/54960/54960eq1.jpg" /> עם: אני, מומס עניין; n, מספר הפחמן של מתיל אסטר חומצת שומן רוויות ישר שרשרת משחררים לפני מומס לי; n + 1, מספר הפחמן של מתיל אסטר חומצות שומן רווי שרשרת ישר משחררים לאחר המומס לי; RTI, RTN, RT (n + 1) פעמים השמירה של פסגות FAME שתוארו לעיל. הערה: קבל את זמני השמירה של אסטרים מתיל חומצות שומן רווי ישר שרשרת בזריקה מתערובת של סטנדרטים (BAME). </li></ol> הכנת FAME 3. וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לקבל חומצות שומן שומנים, תאים חיידקיים הקציר על ידי גירוד מושבות מהצלחת אגר ולהעביר 40 מ&quot;ג (משקל טרי, שווה ערך ל -10 9 תאים קיימא) של חיידקים לתוך צינור זכוכית 10 מ&quot;ל עם פקקי הברגה וחותמות PTFE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע transesterification הניתן בשיטת קישור אסתר 14,15 כמפורט להלן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל של 0.2 M KOH מתנול אל תאים חיידקיים טרי לדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך שעה 1. תגובה זו מורכבת methanolysis אלקליין, לשבור את הקישור אסתר ב השומנים והפקת אסטרים מתיל חומצות שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל של 1 חומצה אצטית M כדי להוריד את ה- pH ל -7.0. בדוק את ה- pH עם רצועות מבחן ה- pH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 3 מ&quot;ל של הקסאן לחלץ fames. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת supernatant (שלב אורגני) לתוך צינורות נקיים להתרכז על ידי אידוי בטמפרטורת חדר תחת זרימה רציפה של חנקן לקבל כ 200 μlשל תמצית. מעבירים את המדגם לתוך בקבוקון GC עם הכנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק תמציות לתוך ספקטרומטריית כרומטוגרפיה-מסת גז מערכת (GC-MS). </li></ol></li></ol> 4. GC / MS תנאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק דגימות FAME לתוך מכשיר GC-MS מצויד נימי טור ZB-WAX (אורך, 30 מ &#39;; קוטר, 0.25 מ&quot;מ, עובי הסרט, 0.25 מיקרומטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את פיית ההזרקה (במצב splitless) הטמפרטורה ל 250 מעלות צלזיוס. השתמש הליום כגז מוביל, עם מהירות הקווית של 37 סנטימטר / sec. החזק את טמפרטורת התנור ב -50 מעלות צלזיוס במשך 1 דקות, להגביר עד 190 ° C בשיעור של 20 ° C / min, ולהגדיל עוד יותר לטמפרטורה סופית של 230 מעלות צלזיוס בשיעור של 2 ° C / min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור MS, להקליט את ספקטרה ההמונית על ידי יינון אלקטרון (EI) בשעת 70 eV, ולהגדיר את הרכישה הנוכחית היון הכולל בין 50 ל 400 יחידות מסה אטומיות (האמו) (2 סריקות / sec). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר נדרש, להזריק נגזרים DMOX ו picolinyl באותם excep מצבt בתנור בטמפרטורה תוכנית כדלקמן: DMOX: 50 ° C (1 דקות), 20 ° C / min עד 210 ° C ו -2 ° C / min עד 240 ° C (5 דק &#39;); Picolinyl: 6 ° C (1 דקות), 20 ° C / min עד 220 ° C ו -2 ° C / min עד 250 ° C (20 דק &#39;). </li></ol> 5. Picolinyl אסתר הכינה מ FAME 16 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאדות את תמצית FAME מסעיף 3 עם זרימת חנקן (לפחות חומר יבש 10 מ&quot;ג) ו להתמוסס 1 מ&quot;ל של dichloromethane יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון 1.0 M של אשלגן ter T-butoxide ב tetrahydrofuran. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את תמצית תהילה 0.2 מ&quot;ל 3-pyridinemethanol 0.1 מ&quot;ל של תמיסת עשה צעד 5.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחמם את הפתרון ב 40 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות בתוך בקבוקון סגור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קירור לטמפרטורת החדר, להוסיף מים ללא יונים מטוהרים (2 מ&quot;ל, ראה לוח חומרים) ו הקסאן (4 מ&quot;ל). מערבבים עם מערבולת, לאפשר בשלב להיפרד, לאסוף את השלב האורגני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ד&quot;רy אותו על ידי הוספת נתרן גופרתי נטול מים עד השלב האורגני ברור לחלוטין. העבר אותו לתוך צינור נקי. ונמוג 200 μl. מעבירים את המדגם לתוך בקבוקון GC עם הכנס. </li></ol> 6. הכנת DMOX מ FAME 17 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאדות את תמצית FAME מסעיף 3 עם זרימת חנקן (לפחות חומר יבש 10 מ&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לחלץ FAME יבש, להוסיף 250 מ&quot;ג של 2-אמינו-2-מתיל-1-פרופנול. שטוף את הכלי עם חנקן, להוסיף פקק, ולמקם אותו בתוך גוש חימום לילה ב 190 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קירור לטמפרטורת החדר, להוסיף 3 מ&quot;ל dichloromethane אל הצינור, ו -5 מ&quot;ל מטוהרים מים ללא יונים (ראה לוח חומרים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shake עבור הפרדת פאזות ולאחר מכן להסיר את השלב מהימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השלב האורגני במים מ&quot;ל 5. Shake עבור הפרדת פאזות ולאחר מכן להסיר את השלב מהימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניקוי על ידי הוספת נתרן גופרתי נטול מים עד השלב האורגני הוא צלול לגמרילהעביר אותו לתוך צינור נקי. להתאדות תחת זרם של חנקן עד שמגיעים בהיקף של 200 μl. מעבירים את המדגם לתוך בקבוקון GC עם הכנס. </li></ol>

<ol>
	<li>Christie, W. W., Han, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lipid Analysis 4th Edition. , (2010).</li><li>H&#220;bschmann, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of GC-MS: fundamental and application. Third edition. , (2015).</li><li>Sasser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Bacteria+by+Gas+Chromatography+of+Cellular+Fatty+Acids.">Identification of Bacteria by Gas Chromatography of Cellular Fatty Acids.</a> MIDI Technical note. 101, 1-6 (1990).</li><li>Spitzer, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+analysis+of+fatty+acids+by+gas+chromatography+-+Low+resolution+electron+impact+mass+spectrometry+of+their+4,4-dimethyloxazoline+derivatives+-+A+review.">Structure analysis of fatty acids by gas chromatography - Low resolution electron impact mass spectrometry of their 4,4-dimethyloxazoline derivatives - A review.</a> Prog Lipid Res. 35 (4), 387-408 (1996).</li><li>Harvey, D. J., Christie, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in lipid methodology. Volume 1. , 19-80 (1992).</li><li>Diomande, S. E., Nguyen-The, C., Guinebreti&#232;re, M. -. H., Broussolle, V., Brillard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fatty+acids+in+Bacillus+environmental+adaptation.">Role of fatty acids in Bacillus environmental adaptation.</a> Front Microbiol. 6, (2015).</li><li>Brillard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Bacillus+cereus+Genes+Specifically+Expressed+during+Growth+at+Low+Temperatures.">Identification of Bacillus cereus Genes Specifically Expressed during Growth at Low Temperatures.</a> Appl Environ Microbiol. 76 (8), 2562-2573 (2010).</li><li>de Sarrau, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+Anaerobiosis+and+Low+Temperature+on+Bacillus+cereus+Growth,+Metabolism,+and+Membrane+Properties.">Influence of Anaerobiosis and Low Temperature on Bacillus cereus Growth, Metabolism, and Membrane Properties.</a> Appl Environ Microbiol. 78 (6), 1715-1723 (2012).</li><li>Diomand&#233;, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+the+CasK/R+two-component+system+in+optimal+unsaturation+of+the+Bacillus+cereus+fatty+acids+during+low-temperature+growth.">Involvement of the CasK/R two-component system in optimal unsaturation of the Bacillus cereus fatty acids during low-temperature growth.</a> Int J Food Microbiol. 213, 110-117 (2015).</li><li>Berkeley, R. C. W., Heyndrickx, M., Logan, N., De Vos, P., Berkeley, R. C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Applications and Systematics of Bacillus and Relatives. , 1-7 (2002).</li><li>K&#228;mpfer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limits+and+Possibilities+of+Total+Fatty+Acid+Analysis+for+Classification+and+Identification+of+Bacillus+Species.">Limits and Possibilities of Total Fatty Acid Analysis for Classification and Identification of Bacillus Species.</a> System. Appl. Microbiol. 17 (1), 86-98 (1994).</li><li>Kaneda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty-acids+of+genus+bacillus+-+example+of+branched-chain+preference.">Fatty-acids of genus bacillus - example of branched-chain preference.</a> Bacteriol Rev. 41 (2), 391-418 (1977).</li><li>Chazarreta Cifre, L., Alemany, M., de Mendoza, D., Altabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+Biosynthesis+of+Unsaturated+Fatty+Acids+in+Bacillus+cereus+ATCC+14579+and+Functional+Characterization+of+Novel+Acyl-Lipid+Desaturases.">Exploring the Biosynthesis of Unsaturated Fatty Acids in Bacillus cereus ATCC 14579 and Functional Characterization of Novel Acyl-Lipid Desaturases.</a> Appl Environ Microbiol. 79 (20), 6271-6279 (2013).</li><li>Sasser, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Bacillus+anthracis+from+culture+using+gas+chromatographic+analysis+of+fatty+acid+methyl+esters.">Identification of Bacillus anthracis from culture using gas chromatographic analysis of fatty acid methyl esters.</a> J AOAC Int. 88 (1), 178-181 (2005).</li><li>Schutter, M. E., Dick, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fatty+acid+methyl+ester+(FAME)+methods+for+characterizing+microbial+communities.">Comparison of fatty acid methyl ester (FAME) methods for characterizing microbial communities.</a> Soil Sci Soc Am J. 64 (5), 1659-1668 (2000).</li><li>Destaillats, F., Angers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+methodology+for+the+synthesis+of+FA+picolinyl+esters+from+intact+lipids.">One-step methodology for the synthesis of FA picolinyl esters from intact lipids.</a> J Am Oil Chem Soc. 79 (3), 253-256 (2002).</li><li>Fay, L., Richli, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Location+of+double-bonds+in+polyunsaturated+fatty-acids+by+gas-chromatography+mass-spectrometry+after+4,4-dimethyloxazoline+derivatization.">Location of double-bonds in polyunsaturated fatty-acids by gas-chromatography mass-spectrometry after 4,4-dimethyloxazoline derivatization.</a> J Chromatogr. 541 (1-2), 89-98 (1991).</li><li>Zhang, J. Y., Yu, Q. T., Liu, B. N., Huang, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modification+in+mass+spectrometry+IV-2-alkenyl-4,4-dimethyloxazolines+as+derivatives+for+the+double+bond+location+of+long-chain+olefinic+acids.">Chemical modification in mass spectrometry IV-2-alkenyl-4,4-dimethyloxazolines as derivatives for the double bond location of long-chain olefinic acids.</a> Biol Mass Spect. 15 (1), 33-44 (1988).</li><li>de Sarrau, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsaturated+fatty+acids+from+food+and+in+the+growth+medium+improve+growth+of+Bacillus+cereus+under+cold+and+anaerobic+conditions.">Unsaturated fatty acids from food and in the growth medium improve growth of Bacillus cereus under cold and anaerobic conditions.</a> Food Microbiol. 36 (2), 113-122 (2013).</li><li>Miwa, T. K., Mikolajczak, K. L., Earle, F. R., Wolff, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas+chromatographic+characterization+of+fatty+acids.Identification+constants+for+mono-+and+dicarboxylic+methyl+esters.">Gas chromatographic characterization of fatty acids.Identification constants for mono- and dicarboxylic methyl esters.</a> Anal Chem. 32 (13), 1739-1742 (1960).</li><li>van Den Dool, H., Kratz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalization+of+the+retention+index+system+including+linear+temperature+programmed+gas-liquid+partition+chromatography.">A generalization of the retention index system including linear temperature programmed gas-liquid partition chromatography.</a> J Chromatogr A. 11, 463-471 (1963).</li><li>Stransky, K., Jursik, T., Vitek, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+equivalent+chain+length+values+of+monoenic+and+polyenic+(methylene+interrupted)+fatty+acids.">Standard equivalent chain length values of monoenic and polyenic (methylene interrupted) fatty acids.</a> J High Res Chromatogr. 20 (3), 143-158 (1997).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

פרופילי הכרומתוגרמה FAS שניתן לראות בטבלת 1 מתאים B. cereus ATCC 14,579 גדל על פני צלחת אגרה. פרופילים דומים התקבלו כאשר החיידק היה גדל בתקשורת נוזלת סודה באותה הטמפרטורה 8. במקרה של חיידקים גדלו בתקשורת נוזלית, ביומסה החיידקים נאספה על ידי צנטריפוגה של מדיו?...

שומן מתיל אסטר חומצה (FAME) גז כרומטוגרפיה (GC) היא שיטה חיונית לאפיון שומנים. הוא מפריד במהירות מכמת את חומצות שומן שונות (FAS) של מדגם אחרי צעד מיצוי קצר. נגזרים של אסטרים מתיל תנודתיות מאוד, יציבה אינרטי לעבר מוט chromatographic, ובכך למנוע פסגות עוקב. סולם ההזדהות שלהם היא די פשוט כאשר המדגם מורכב FAS הידוע משום פרופילי chromatographic או מתפרסמים או בהשוואה לסטנדרטים. בנוסף, ההזרקה החוזרת של סטנדרטי כיול כימות של שונות FAS אינה נדרשת, בהתחשב בתגובה המתמדת שלהם כמעט לגילוי יינון להבה (FID) 1. בנוסף FID, ספקטרומטריית מסה (MS) זיהוי מספק ערכה משלימה של מידע כדי לאשר fames. עם זאת, כאשר fames נזקפת באמצעות יינון אלקטרון (EI), ספקטרה וכתוצאה מכך לא תמיד מאפשרת הזיהוי דואר של המבנה העדין האנגלי. למשל, הסתעפות עמדה (כלומר, קבוצה מהתיל מסועפת) קשה לנבא כי יוני האבחון קשים לזהות 1 ושינוי המאפיין בשפע יון היעד הוא מכונה תלוי, מניעת השימוש בספריות ספקטרה מונית 2. אתגר נוסף טמון בזיהוי מיקום הקשר הכפול בגלל EI גורם גירת קשר כפולה. לפיכך, איזומרים FA עם משתנה עמדות קשר כפולות לא יכולים להיות מובחנים על ידי ספקטרום המסה שלהם. למרבה המזל, בכלים אחרים פותחו לזיהוי FA. לדוגמה, הנוכחות ואת המיקום של הסתעפות או של קשרים כפולים FAS ניתן השערה על ידי חישוב אורך השרשרת שווה ערך (ECL) 3. שיטות derivatization אחרות לגרום ספקטרה מסה שונה, תלוי במיקום של קשר כפול או קבוצה מתיל מסועפת. 4,4-דימתיל נגזר oxazoline (DMOX) 4 לאפשר EASזיהוי y של המיקום של קשרים כפולים חומצת שומן חד בלתי רוויה. 3-pyridylcarbinyl אסתר (אסתר picolinyl) נגזרים לאפשר זיהוי חד משמעי על המיקום של מתיל מסועף 5 FAS. שילוב שמירת chromatographic (ECL) ו ספקטרה ההמונית (DMOX ו picolinyl) מידע מאפשר זיהוי של רוב FAS ללא הצורך להשתמש בשיטות מורכבות של טיהור, כנדרש עבור ספקטרום תהודה מגנטית גרעינית (NMR), שיטת העוררין לאפיון מבני 1 . חיידקים של Bacillus הסוג, הכוללים כמה פתוגנים בני אדם ובעלי חיים, מסוגלים ליישב נישות מגוונות מאוד ולכן מופצים באופן נרחב בסביבה 6. בין הסוג בצילוס, רכב FA מושפע הנישה האקולוגית של המין עם מודולציות בדפוסי FA להתאים למגוון רחב של שינויים סביבתיים (למשל, מדיום גידול, טמפרטורה,pH, וכו &#39;) 7-9. בגלל ההומוגניות היחסית של דפוס FA בין זנים של Bacillus הסוג במהלך צמיחה בתנאים סטנדרטיים, קביעת רכב FA היא אחד הקריטריונים החיוניים המשמשים להגדרת מין Bacillus. מאפיין ייחודי של הסוג בצילוס הוא השפע של FAS מסועפת שרשרת המכילה 12-17 פחמנים 10-12 עם היחס בין ISO ו anteiso איזומרים להיות קובע מפתח של הסתגלות לתנאי סביבה. מיני Bacillus גם להסתגל לתנודות סביבה על ידי שינוי היחס של חומצות שומן בלתי רוויות. במינים מסוימים, כגון cereus Bacillus, שני desaturases חומצת שומן ליצור קשרים כפולים במיקומים שונים של שרשרת אלקיל 13 עם תפקידים שונים בעיבוד 9. הדוגמא של הסוג בצילוס ממחישה את החשיבות של זיהוי בדיוק עמדת הקשר הכפולה ו FA הסתעפות. לאסוףively, זיהוי דפוסי Bacillus FA יש כמה יישומים שימושיים. בזאת, אנו מציעים גישת GC-MS רומן לזיהוי דפוס Bacillus FA אשר מתגבר על המגבלות המובנות של ניתוח קלסי GC-MS. גישה חדשנית זו יכולה לשמש באופן ישיר על חומר ביולוגי גלם, מורכבת משילוב של טכניקות קיימות: מידע על זמני שמירה (ECL) ו ספקטרה ההמונית של נגזרי FAS שונים (FAME, DMOX ו-אסתר picolinyl). אנו משתמשים במינוח האנגלי הבא. אני, א, ו n מצביע iso, anteiso מתיל מסועף, וישר-שרשרת חומצת שומן, בהתאמה. FAS הרווי קבל את שמן C: ד כאשר C הוא מספר אטומי הפחמן חומצת השומן ו- D הוא מספר קשרים כפולים. Δ x מציין את המיקום של הקשר הכפול, שבו הקשר הכפול ממוקם על קשר פחמן-פחמן העשירי, לספור מסוף חומצה קרבוקסילית.

<table><tbody><tr><td>GC/MS</td><td>Shimadzu</td><td>QP2010</td><td></td></tr><tr><td>capillary column ZB WAX</td><td>Phenomenex</td><td>7HG-G007-11</td><td>30 m x 0.25 mm x 0.25&amp;nbsp;&amp;micro;m</td></tr><tr><td>Methanol Lichrosolv</td><td>VWR</td><td>1.06018.2500</td><td></td></tr><tr><td>potassium hydroxide</td><td>Aldrich</td><td>P1767</td><td></td></tr><tr><td>THF</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>28559.320</td><td></td></tr><tr><td>Dichloromethane</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>23373.320</td><td></td></tr><tr><td>Hexane</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>24575.320</td><td></td></tr><tr><td>3-pyridinemethanol</td><td>Aldrich</td><td>P6-680-7</td><td></td></tr><tr><td>potassium tertiobutoxide</td><td>Aldrich</td><td>156671</td><td></td></tr><tr><td>2-amino-2-methyl-1-propanol</td><td></td><td>A-9879</td><td></td></tr><tr><td>MilliQ Academic</td><td>Millipore</td><td>ZMQS50001</td><td></td></tr><tr><td>Bacterial Acid Methyl Ester (BAME) Mix</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47080-U Supelco</td><td></td></tr></tbody></table>

identification of fatty acids in bacillus cereus

מין Bacillus מכיל מסועף שרשרת חומצות שומן בלתי רוויות (FAS) עם עמדות מגוונות של הסניף מהתיל (iso או anteiso) ושל הקשר הכפול. שינויים בהרכב FA לשחק תפקיד מכריע ההסתגלות של חיידקים לסביבתם. שינויים אלה כרוכים בשינוי היחס של iso לעומת anteiso המסועף FAS, וב השיעור ביחס FAS בלתי רווי ל- FAS הרווי, עם קשרים כפולים נוצרו ב בתפקידים שונים. זיהוי מדויק של פרופיל FA יש צורך להבין את מנגנוני ההסתגלות של מיני Bacillus. רבים מן FAS מ Bacillus אינם זמינים מסחרית. האסטרטגיה המוצעת במסמך מזהה FAS באמצעות שילוב אינפורמציה על זמן השמירה (לפי חישוב של אורך השרשרת שווה ערך (ECL)) עם ספקטרה המונית של שלושה סוגים של נגזרים FA: אסטרים מתיל חומצת שומן (fames), 4,4-דימתיל oxazoline נגזרים (DMOX), ו3-pyridylcarbinyl אסתר (picolinyl). שיטה זו יכולה לזהות את FAS ללא הצורך לטהר את FAS הידוע. השוואת פרופילי chromatographic תהילה שהוכנה cereus Bacillus בתערובת מסחרית של תקנים מאפשרת זיהוי של ישר-שרשרת רווי FAS, החישוב של ECL, והשערות על זהותו של FAS האחר. Fames של הקנים רווי FAS, iso או anteiso, להציג תזוזה שלילית קבועה של ECL, לעומת FAS רווי ליניארי עם אותו מספר פחמנים. Fames של FAS בלתי רווי יכול להיות מזוהה על ידי המסה של היונים המולקולריים שלהם, ולגרום לשינוי חיובי ECL לעומת FAS הרווי המתאים. עמדת ההסתעפות של FAS ועמדת הקשר הכפולה של FAS בלתי רווי ניתן לזהות על ידי ספקטרה המונית יינון אלקטרונים נגזרים picolinyl ו DMOX, בהתאמה. גישה זו מזהה את כל הענף הרווי הידועFAS ed, FAS ישר שרשרת בלתי רוויה ו- FAS המסועף בלתי רווי מתמצית cereus ב.

האסטרטגיה של זיהוי FA מתאי חיידקים מוצג באיור 1. כל צעד מספק מידע ספקטרלי משלים או מידע אודות שימור chromatographic. שלב 1 מורכב של זיהוי ראשוני FA באמצעות פתרון סטנדרטי. שלב 2 מאפשר פרשנות FAME EI ספקטרה ECL שלהם, על מנת לזהות את המוצרים בהיסוס. שלב 3 מזהה את...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus at JoVE.com

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

We propose a protocol to identify fatty acids without the need to purify them. It combines information on the retention times with the mass spectra of three types of fatty acid derivatives: fatty acid methyl esters (FAMEs), 4,4-dimethyl oxazoline derivatives (DMOX), and 3-pyridylcarbinyl esters (picolinyl).

זיהוי של חומצות שומן ב<em&gt; Cereus בצילוס</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

identification-of-fatty-acids-in-bacillus-cereus

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

9.5K Views.  INRA, Université d'Avignon. We propose a protocol to identify fatty acids without the need to purify them. It combines information on the retention times with the mass spectra of three types of fatty acid derivatives: fatty acid methyl esters (FAMEs), 4,4-dimethyl oxazoline derivatives (DMOX), and 3-pyridylcarbinyl esters (picolinyl). 

Video: Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Analysis of Fatty Acid Content and Composition in Microalgae

A method to determine the content and composition of total fatty acids present in microalgae is described. Fatty acids are a major constituent of microalgal biomass. These fatty acids can be present in different acyl-lipid classes. Especially the fatty acids present in triacylglycerol (TAG) are of commercial interest, because they can be used for production of transportation fuels, bulk chemicals, nutraceuticals (&omega;-3 fatty acids), and food commodities. To develop commercial applications, reliable analytical methods for quantification of fatty acid content and composition are needed. Microalgae are single cells surrounded by a rigid cell wall. A fatty acid analysis method should provide sufficient cell disruption to liberate all acyl lipids and the extraction procedure used should be able to extract all acyl lipid classes.
With the method presented here all fatty acids present in microalgae can be accurately and reproducibly identified and quantified using small amounts of sample (5 mg) independent of their chain length, degree of unsaturation, or the lipid class they are part of.
This method does not provide information about the relative abundance of different lipid classes, but can be extended to separate lipid classes from each other.
The method is based on a sequence of mechanical cell disruption, solvent based lipid extraction, transesterification of fatty acids to fatty acid methyl esters (FAMEs), and quantification and identification of FAMEs using gas chromatography (GC-FID). A TAG internal standard (tripentadecanoin) is added prior to the analytical procedure to correct for losses during extraction and incomplete transesterification.

A method for the determination of fatty acid content and composition in microalgae based on mechanical cell disruption, solvent based lipid extraction, transesterification, and quantification and identification of fatty acids using gas chromatography is described. A tripentadecanoin internal standard is used to compensate for the possible losses during extraction and incomplete transesterification.

ניתוח התוכן של חומצות שומן והרכב בMicroalgae

A method to determine the content and composition of total fatty acids present in microalgae is described. Fatty acids are a major constituent of ...

Environment

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer tissue with minor or no modification, allowing the dietary routing between different trophic levels. However, the FA trophic marker approach is still hampered by the limited knowledge in lipid metabolism of the soil fauna. This study used entirely labelled palmitic acid (13C16:0, 99 atom%) as a tracer in fatty acid metabolism pathways of two widespread soil Collembola, Protaphorura fimata and Heteromurus nitidus. In order to investigate the fate and metabolic modifications of this precursor, a method of isotopologue profiling is presented, performed by mass spectrometry using single ion monitoring. Moreover, the upstream laboratory feeding experiment is described, as well as the extraction and methylation of dominant lipid fractions (neutral lipids, phospholipids) and the related formula and calculations. Isotopologue profiling does not only yield the overall 13C enrichment in fatty acids derived from the 13C labeled precursor but also produces the pattern of isotopologues exceeding the mass of the parent ion (i.e., the FA molecular ion M+) of each labeled FA by one or more mass units (M+1, M+2, M+3, etc.). This knowledge allows conclusions on the ratio of dietary routing of an entirely consumed FA in comparison to de novo biosynthesis. The isotopologue profiling is suggested as a useful tool for evaluation of fatty acid metabolism in soil animals to disentangle trophic interactions.

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

The fatty acid trophic marker approach, i.e., the assimilation of fatty acids as entire molecule and transfer into consumer tissue with no or minor modification, is hampered by knowledge gaps in fatty acid metabolism of small soil invertebrates. Isotopologue profiling is provided as a valuable tool to disentangle trophic interactions.

חומצת שומן 13C איזוטופולוג פרופיל מספק תובנה מטבולי של הגעה צרכנים והעברת פחמן עם מחלות

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the majority of exogenous fatty acids are present within host lipoprotein particles. Uncertainty remains as to the reservoirs of host fatty acids and the mechanisms by which bacteria extract fatty acids from the lipoprotein particles. In this work, we describe protocols for enrichment of low-density lipoprotein (LDL) particles from chicken egg yolk and determining whether LDLs serve as fatty acid reservoirs for S. aureus. This method exploits unbiased lipidomic analysis and chicken LDLs, an effective and economical model for the exploration of interactions between LDLs and bacteria. The analysis of S. aureus integration of exogenous fatty acids from LDLs is performed using high-resolution/accurate mass spectrometry and tandem mass spectrometry, enabling the characterization of the fatty acid composition of the bacterial membrane and unbiased identification of novel combinations of fatty acids that arise in bacterial membrane lipids upon exposure to LDLs. These advanced mass spectrometry techniques offer an unparalleled perspective of fatty acid incorporation by revealing the specific exogenous fatty acids incorporated into the phospholipids. The methods outlined here are adaptable to the study of other bacterial pathogens and alternative sources of complex fatty acids.

This method provides a framework for studying incorporation of exogenous fatty acids from complex host sources into bacterial membranes, particularly Staphylococcus aureus. To achieve this, protocols for the enrichment of lipoprotein particles from chicken egg yolk and subsequent fatty acid profiling of bacterial phospholipids utilizing mass spectrometry are described.

בידוד של חלקיקי ליפופרוטאין מעוף חלמון ביצה לחקר הפתוגן חומצות שומן בקטריאלי התאגדות לתוך ממברנה פוספוליפידים

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of biological membranes, energy storage and production, cellular signaling, vesicular transport of proteins, organelle biogenesis, and regulated cell death. Because the budding yeast Saccharomyces cerevisiae is a unicellular eukaryote amenable to thorough molecular analyses, its use as a model organism helped uncover mechanisms linking lipid metabolism and intracellular transport to complex biological processes within eukaryotic cells. The availability of a versatile analytical method for the robust, sensitive, and accurate quantitative assessment of major classes of lipids within a yeast cell is crucial for getting deep insights into these mechanisms. Here we present a protocol to use liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) for the quantitative analysis of major cellular lipids of S. cerevisiae. The LC-MS/MS method described is versatile and robust. It enables the identification and quantification of numerous species (including different isobaric or isomeric forms) within each of the 10 lipid classes. This method is sensitive and allows identification and quantitation of some lipid species at concentrations as low as 0.2 pmol/&#181;L. The method has been successfully applied to assessing lipidomes of whole yeast cells and their purified organelles. The use of alternative mobile phase additives for electrospray ionization mass spectrometry in this method can increase the efficiency of ionization for some lipid species and can be therefore used to improve their identification and quantitation.

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

We present a protocol using liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry to identify and quantify major cellular lipids in Saccharomyces cerevisiae. The described method for a quantitative assessment of major lipid classes within a yeast cell is versatile, robust, and sensitive.

ניתוח כמותי של הליפידום הסלולר באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית משולב עם טנדם מסה ספקטרומטריה

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...

Analysis of Neutral Lipid Synthesis in Saccharomyces cerevisiae by Metabolic Labeling and Thin Layer Chromatography

Neutral lipids (NLs) are a class of hydrophobic, chargeless biomolecules that play key roles in energy and lipid homeostasis. NLs are synthesized de novo&#160;from acetyl-CoA and are primarily present in eukaryotes in the form of triglycerides (TGs) and sterol-esters (SEs). The enzymes responsible for the synthesis of NLs are highly conserved from Saccharomyces cerevisiae (yeast) to humans, making yeast a useful model organism to dissect the function and regulation of NL metabolism enzymes. While much is known about how acetyl-CoA is converted into a diverse set of NL species, mechanisms for regulating NL metabolism enzymes, and how mis-regulation can contribute to cellular pathologies, are still being discovered. Numerous methods for the isolation and characterization of NL species have been developed and used over decades of research; however, a quantitative and simple protocol for the comprehensive characterization of major NL species has not been discussed. Here, a simple and adaptable method to quantify the de novo&#160;synthesis of major NL species in yeast is presented. We apply 14C-acetic acid metabolic labeling coupled with thin layer chromatography to separate and quantify a diverse range of physiologically important NLs. Additionally, this method can be easily applied to study in vivo reaction rates of NL enzymes or degradation of NL species over time.

Analysis of Neutral Lipid Synthesis in Saccharomyces cerevisiae by Metabolic Labeling and Thin Layer Chromatography

Here, a protocol is presented for the metabolic labeling of yeast with 14C-acetic acid, which is coupled with thin layer chromatography for the separation of neutral lipids.

ניתוח של סינתזת שומנים נייטרלית ב cerevisiae Saccharomyces על ידי תיוג מטבולי כרומטוגרפיה שכבה דקה

Neutral lipids (NLs) are a class of hydrophobic, chargeless biomolecules that play key roles in energy and lipid homeostasis. NLs are synthesized de ...

Identification of Antibacterial Immunity Proteins in Escherichia coli using MALDI-TOF-TOF-MS/MS and Top-Down Proteomic Analysis

This protocol identifies the immunity proteins of the bactericidal enzymes: colicin E3 and bacteriocin, produced by a pathogenic Escherichia coli strain using antibiotic induction, and identified by MALDI-TOF-TOF tandem mass spectrometry and top-down proteomic analysis with software developed in-house. The immunity protein of colicin E3 (Im3) and the immunity protein of bacteriocin (Im-Bac) were identified from prominent b- and/or y-type fragment ions generated by the polypeptide backbone cleavage (PBC) on the C-terminal side of aspartic acid, glutamic acid, and asparagine residues by the aspartic acid effect fragmentation mechanism. The software rapidly scans in silico protein sequences derived from the whole genome sequencing of the bacterial strain. The software also iteratively removes amino acid residues of a protein sequence in the event that the mature protein sequence is truncated. A single protein sequence possessed mass and fragment ions consistent with those detected for each immunity protein. The candidate sequence was then manually inspected to confirm that all detected fragment ions could be assigned. The N-terminal methionine of Im3 was post-translationally removed, whereas Im-Bac had the complete sequence. In addition, we found that only two or three non-complementary fragment ions formed by PBC are necessary to identify the correct protein sequence. Finally, a promoter (SOS box) was identified upstream of the antibacterial and immunity genes in a plasmid genome of the bacterial strain.

Identification of Antibacterial Immunity Proteins in Escherichia coli using MALDI-TOF-TOF-MS/MS and Top-Down Proteomic Analysis

Here we present a protocol for the rapid identification of proteins produced by genomically sequenced pathogenic bacteria using MALDI-TOF-TOF tandem mass spectrometry and top-down proteomic analysis with software developed in-house. Metastable protein ions fragment because of the aspartic acid effect and this specificity is exploited for protein identification.

זיהוי חלבוני חסינות אנטיבקטריאליים ב- Escherichia coli באמצעות MALDI-TOF-TOF-MS/MS וניתוח פרוטאומי מלמעלה למטה

This protocol identifies the immunity proteins of the bactericidal enzymes: colicin E3 and bacteriocin, produced by a pathogenic Escherichia coli strain ...

Chemistry

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, a significant stress response is induced during gastrointestinal transit and upon bile exposure, a normal component of human digestion. To overcome the bactericidal effects of bile, many enteric pathogens form a biofilm hypothesized to permit survival when transiting through the small intestine. Here we present methodologies to define biofilm formation through solid-phase adherence assays as well as extracellular polymeric substance (EPS) matrix detection and visualization. Furthermore, biofilm dispersion assessment is presented to mimic the analysis of events triggering release of bacteria during the infection process. Crystal violet staining is used to detect adherent bacteria in a high-throughput 96-well plate adherence assay. EPS production assessment is determined by two assays, namely microscopy staining of the EPS matrix and semi-quantitative analysis with a fluorescently-conjugated polysaccharide binding lectin. Finally, biofilm dispersion is measured through colony counts and plating. Positive data from multiple assays support the characterization of biofilms and can be utilized to identify bile salt-induced biofilm formation in other bacterial strains.

This protocol enables the reader to analyze bile salt-induced biofilm formation in enteric pathogens using a multifaceted approach to capture the dynamic nature of bacterial biofilms by assessing adherence, extracellular polymeric substance matrix formation, and dispersion.

מלח מרה-induced ביופילמים בתוך המעית פתוגנים: טכניקות וכימות

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...

Immunology and Infection

Analysis of the Lipid Composition of Mycobacteria by Thin Layer Chromatography

Mycobacteria species can differ from one another in the rate of growth, presence of pigmentation, the colony morphology displayed on solid media, as well as other phenotypic characteristics. However, they all have in common the most relevant character of mycobacteria: its unique and highly hydrophobic cell wall. Mycobacteria species contain a membrane-covalent linked complex that includes arabinogalactan, peptidoglycan, and long-chains of mycolic acids with types that differ between mycobacteria species. Additionally, mycobacteria can also produce lipids that are located, non-covalently linked, on their cell surfaces, such as phthiocerol dimycocerosates (PDIM), phenolic glycolipids (PGL), glycopeptidolipids (GPL), acyltrehaloses (AT), or phosphatidil-inositol mannosides (PIM), among others. Some of them are considered virulence factors in pathogenic mycobacteria, or critical antigenic lipids in host-mycobacteria interaction. For these reasons, there is a significant interest in the study of mycobacterial lipids due to their application in several fields, from understanding their role in the pathogenicity of mycobacteria infections, to a possible implication as immunomodulatory agents for the treatment of infectious diseases and other pathologies such as cancer. Here, a simple approach to extract and analyze the total lipid content and the mycolic acid composition of mycobacteria cells grown in a solid medium using mixtures of organic solvents is presented. Once the lipid extracts are obtained, thin-layer chromatography (TLC) is performed to monitor the extracted compounds. The example experiment is performed with four different mycobacteria: the environmental fast-growing Mycolicibacterium brumae and Mycolicibacterium fortuitum, the attenuated slow-growing Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG), and the opportunistic pathogen fast-growing Mycobacterium abscessus, demonstrating that methods shown in the present protocol can be used to a wide range of mycobacteria.

A protocol is presented to extract the total lipid content of the cell wall of a wide range of mycobacteria. Moreover, extraction and analytical protocols of the different types of mycolic acids are shown. A thin-layer chromatographic protocol to monitor these mycobacterial compounds is also provided.

ניתוח הרכב השומנים של מיקובקטריה על ידי כרומטוגרפיה של שכבה דקה

Mycobacteria species can differ from one another in the rate of growth, presence of pigmentation, the colony morphology displayed on solid media, as well ...

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, and participate in various signaling pathways. Caenorhabditis elegans synthesizes all of the enzymes necessary to produce a range of omega-6 and omega-3 fatty acids. This, combined with the simple anatomy and range of available genetic tools, make it an attractive model to study fatty acid function. In order to investigate the genetic pathways that mediate the physiological effects of dietary fatty acids, we have developed a method to supplement the C. elegans diet with unsaturated fatty acids. Supplementation is an effective means to alter the fatty acid composition of worms and can also be used to rescue defects in fatty acid-deficient mutants. Our method uses nematode growth medium agar (NGM) supplemented with fatty acidsodium salts. The fatty acids in the supplemented plates become incorporated into the membranes of the bacterial food source, which is then taken up by the C. elegans that feed on the supplemented bacteria. We also describe a gas chromatography protocol to monitor the changes in fatty acid composition that occur in supplemented worms. This is an efficient way to supplement the diets of both large and small populations of C. elegans, allowing for a range of applications for this method.

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is a useful model to explore the functions of polyunsaturated fatty acids in development and physiology. This protocol describes an efficient method of supplementing the C. elegans diet with polyunsaturated fatty acids.

תוספת תזונתית של חומצות שומן רב בלתי רוויות ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

Biology

Isolation, Purification, and Identification of Bacitracin-producing Bacillus licheniformis from Fresh Feces of Healthy Pigs

Bacillus licheniformis and bacitracin have a huge application market and value in the fields of medicine, chemistry, aquaculture, agricultural, and sideline products. Therefore, the selection of B. licheniformis with high production of bacitracin is of great importance. In this experimental protocol, Bacillus with a high yield of bacitracin was isolated, purified, and identified from the fresh feces of healthy pigs. The inhibitory effect of secondary metabolite bacitracin on Micrococcus luteus was also tested. Thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography were used for the qualitative and quantitative detection of bacitracin. The physiological and biochemical characteristics of B. licheniformis were determined by relevant kits. The phylogenetic relationships of B. licheniformis were determined and constructed using gene sequence detection. This protocol describes and introduces the standard isolation, purification, and identification process of B. licheniformis from animal fresh feces from multiple perspectives, providing a method for the large-scale utilization of B. licheniformis and bacitracin in factories.

<meta charset="utf8"></head><body>בידוד, טיהור וזיהוי של Bacillus licheniformis המייצר בציטראצין מצואה טרייה של חזירים בריאים

This protocol provides a complete and comprehensive description of the detailed process for the isolation, purification, and identification of bacitracin-producing Bacillus licheniformis from healthy pig feces.

בידוד, טיהור וזיהוי של Bacillus licheniformis המייצר בציטראצין מצואה טרייה של חזירים בריאים

Bacillus licheniformis and bacitracin have a huge application market and value in the fields of medicine, chemistry, aquaculture, agricultural, and ...

זיהוי של חומצות שומן ב

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video