Name: paw-dragging: a novel, sensitive analysis of the mouse cylinder test
Uploaded: 2015-04-29T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test at JoVE.com

אנו מודים למר ג&#39;ון קרוול ומר טרי Upshall למומחיותם הטכנית וסיוע בצילום וצילום וידאו ב. עבודה זו נתמכה על ידי הפעלת מענקים לJLV מהמכון הקנדי לחקר בריאות והחברה למחקר ופיתוח של ניופאונדלנד ולב ושבץ הקרן של השותפות הקנדית קנדה למענק Catalyst שחזור שבץ. RBR היה נמען של ושבץ מלגת קרן בוגר קית גריפיתס זיכרון לב.

הצהרת אתיקה: כל הניסויים אושרו על ידי האוניברסיטה ממוריאל של ועדת האתיקה הטיפול בבעלי חיים של ניופאונדלנד בהתאם להנחיות של המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים. 1. עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש עכברים בוגרים. במחקר זה, עכברי FVBN זכר בוגר (n = 10) בין 2-4 חודשים היו בשימוש. עכברי בית בשעה 00:12 להפוך מחזור אור-חושך ולספק אוכל מכרסם סטנדרטי וכרצונך מים. </li></ol> 2. חומרים הדרושים לבדיקת הצילינדר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג שולחן עם ראש שקוף לצלם את מבחן הגליל. הממדים של השולחן הם לא רלוונטיים, העליון חייב להיות פרספקס או זכוכית, ושחייב להיות מספיק מקום כדי למקם מראה מתחת לשולחן. זה מאפשר לעכבר להיות צילם מלמטה. השתמש במראה מתחת לשולחן כדי לשקף את התמונה דרך הגליל. כחלופה, להשתמש מצלמה הפוכה, אם זמין. הממדים של שולחן שימוש בפרוטוקול זה הם 54 x 56 x 66.5cm (wxlxh) עם 51 x 51cm העליון (wxl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג מראה. הממדים של מראה שימוש בפרוטוקול זה הם 34 x 58cm (wxl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג צילינדר שקוף / פרספקס לעכבר כדי לבצע ב. הממדים של הגליל בשימוש בפרוטוקול זה הם 17.5cm גבוה, 8.8cm זיהוי, 9.5cm OD עם עובי דופן של 0.35cm. גליל גבוה עשוי להידרש לזני עכבר פעילים יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הגליל על השולחן ולצלם את ההשתקפות במראה להלן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצלמת וידיאו וחצובה נדרשים. להקליט קטעי וידאו בכ 650Kb / s, שכ הוא 190MB לכל 5 דקות של וידאו גליל. ודא שיש לו את המצלמה פונקציונלי זום על מנת להבטיח שהגליל מקיף את כל שדה הראייה. הערה: מצלמת וידיאו שימוש בפרוטוקול זה הוא Sony DCR-SR42, זום אופטי 40X, זום דיגיטלי 2,000x, 680kpix אשר משתמש הגדרה סטנדרטית, interlaced וידאו NTSC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג תוכנה לניתוח - pl תקשורתAyer עם תמיכת וידאו ואפנון מהירות השמעה. נגן המדיה שימוש בפרוטוקול זה הוא v2.1.2 VLC Media Player. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג מחשב עם מערכת הפעלה מסוגלת להריץ את נגן המדיה וצג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסון אלקטרוני עבור קטעי וידאו נדרש. להוריד קטעי וידאו לדיסק קשיח חיצוני או להעתיק אותו על גבי תקליטורי DVD לאחסון לטווח ארוך. הערה: ב190MB לוידאו, 84 מפגשים יתאימו על כרטיס SD GB 16 ו -168 מפגשים יתאימו על כרטיס SD 32GB. בשל inexpensiveness היחסי של תקשורת SD, וחוסר הוודאות בכמה זמן כמה עכברים דורשים כדי להשלים 20 אחוריים, כרטיס 32 GB מומלץ. במחקר הנוכחי, קטעי הווידאו הועתקו מהמצלמה לדיסק קשיח חיצוני 2TB ולאחר מכן recopied על תקליטורי DVD כגיבוי. </li></ol> 3. התקנה ניסיונית של מבחן הצילינדר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדק מראה מתחת לשולחן בזווית של 45 מעלות לשולחן. האם שני סוגריים תמיכה זו באמצעות מצורף לרגלי השולחן לSupport העליון ותחתון של המראה, בהתאמה. מקומות הסוגר מצוינים בצד וצפה בטבלה (איור 1 א) ונוף פנים על השולחן (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים גליל במרכז השולחן. לצייר ארבעה קווים במרחק שווה הגליל שבי יושב על השולחן עם טוש שחור (נוכל), כך שהגליל יכול להיות הרים וחזר לאותו המצב (איור 2). ציורם בחלק התחתון של השולחן השקוף מאפשר השולחן לנקות בין ניסויים בבעלי החיים ללא המסת דיו הסמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את המצלמה וחצובה. לכוון את המצלמה במראה, כך שהתמונה היא מחפשת ישירות דרך הקנה של הגליל. ודא שהקיר הפנימי המלא של הגליל הוא גלוי וללא הפרעה על ידי הבסיס (איור 3). ראה מבט מצד על של ההתקנה, כולל הזווית היחסית של התקנת המצלמה ומראה, מלמעלה (איור 4 א) ומרמה של השולחן, כולל גידול עכבר (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כרטיסי רמיזה לזהות כל עכבר לפני צילומים. ודא שהכרטיסים כוללים בדרך כלל מספר זיהוי לכל עכבר, נקודת הזמן של הבדיקה (לדוגמא., 3 ימים לאחר טיפול) ומועד פגישת צילומים. אינו כולל את קבוצת הטיפול בכרטיס האות כדי להבטיח את הניסוי הוא עיוור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט בתנאי תאורה פנימיים סטנדרטיים כמו זה ברמה של אור נדרש כדי לראות את תנועות העכבר סביב הגליל בבירור. הערה: אם זמין מצלם בחושך עם מצלמה אור אדומה עשויים להספיק, אולם אחד היה קודם צריך לבדוק אם נגיעות כפה וגורר נראות בבירור לכימות. </li></ol> 4. ביצוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל לצלם. הצג את כרטיס אות העכבר המתאים מול עדשת מצלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את העכבר לתוך הצילינדר מלמעלה הפתוחים מייד לאחר שצילם את כרטיס האות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתחיל לצלם את העכבר. למזער את הרעש בתקופה זו, כמו עכברים עלולים לאבד עניין בחקר אם נבהל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לחלק אחורי העכברים לחקור את הגליל. ללכוד את הווידאו עד העכבר מבצע מינימום של אחוריים עשרים. הערה: אחורית מתרחשת כאשר שני כפות רגליו קדמיות מאבדות מגע עם הרצפה והעכבר עומד על רגליו האחוריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב שולחן וגליל עם תמיסת ניקוי מתאימה בין כל עכבר כדי לטהר ולהסיר ריחות עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפאה היא כאשר עכברים להפסיק לחקור ולהישאר בשקט יושבים על ארבע לכ 5 דקות. אם עכברים להקפיא לפני אחוריים עשרים להתרחש, זה עשוי להיות נחוץ כדי להסיר אותם מהגליל 10-20 דקות לפני חידוש המבחן. אם עכברים לא לבצע אחוריים עשרים, הם יוסרו מן המחקר. הערה: מניסיוננו, עכברים לא צריכה להיות נכללו עקב אי לחקור את הגליל. </li></ol> 5. הערכת מבחן הצילינדר באמצעות Paw גרירהניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנגן את הווידאו בקצב של בין 0.25x ו0.67x מהירות קבועה תלוי כמה מהר את העכבר בוחן את הגליל. להשתמש בנגן מדיה שמציע מהירויות השמעה איטיות יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את המספר הכולל של נגיעות כפה. נגיעות כפה להתרחש כאשר אחורי העכבר (איור 5 א), נוגעים בצד של הגליל (איור 5), לאחר מכן יורדת מסוס עם שני כפות בו זמנית (איור 5 ג) ואדמות (איור 5D). הכפה יכולה או לא יכולה לפנות לקיר הגליל עם כף מלאה, אבל קשר כלשהו עם קיר הגליל חייב להתרחש. להעריך נגיעות כפה על ידי ספירת מספר הפעמים שהעכבר יוצר קשר (לא משנה כמה קצר) עם קיר הגליל עם אחת או את שני כפות רגליו קדמיות עת שעמד על הרגליים האחוריות שלה במהלך אחורי. שים לב שקשר עם קיר הגליל נספר רק כ&quot; מגע כפה &quot;או&quot; כפת גרירה &quot;אם העכבר נמצא בעמדה אחורית - מעמדעל הגפיים האחורי שלה עם שני כפות רגליו קדמיות מעל השולחן. אם העכבר נשאר בעמדת 3 נקודות - שני גפיים אחוריות וכף אחת על השולחן וממשיך לגעת בקיר עם הכפה החופשית - זה לא נחשב כמגע כף. עכברים עשויים אחוריים ולגעת בקיר הגליל עם כף אחת וזה נחשב כמגע כף. הערה: עכבר עשוי גם להזיז את הגוף שלה ברחבי הגליל במהלך אחורי, עושה יותר משני אנשי קשר. מגעים אלה נספרים - אחד לכל מגע בכפו שמאלי ואחד לכל מגע בכפו ימני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את מספר כפה-שאיפות. התנהגות גרירת כפה שונה מנגיעות כפה נורמליות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אנשי קשר כפת קיר הגליל עם כף יד פתוחה מלאה (איור 6), היא תיפול לאט מהקיר, לעתים קרובות עם רעד קל. התנועה מתחילה בספרות גרירה על קיר הגליל או בכיוון המדיאלי או כלפי מטה, (איור 6 ג) לפני שנפלתי משם completאיליי (איור 6 ד). אז העכבר יהיה לרדת עם הכפה המושפעת (איור 6-ה) לפני שנחת על ארבע (איור 6F). זה נחשב כפת גרירה וצריך לספור במניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הכפה לא לפנות לקיר הגליל עם כף יד פתוחה באופן מלא, זה יהיה לרעות קיר הגליל עם הספרות שלה לפני שנפל מקיר הגליל. באופן דומה, עכבר עשוי לגרור כפתה כנגד קיר הגליל אך לא לשחרר אותו לחלוטין לפני פירוק. אלה שני נחשבים כפה-גוררת כמו גם נגיעות וצריכה להיחשב כשני במספר נקודות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכפה עלולה גם לגרור לאורך קיר הגליל תוך עכבר בוחן את הגליל. במקרה זה, הכפה תעקוב הפיתול של פלג הגוף העליון של העכבר כפי שהוא בוחן שמאלי או ימני של העמדה המקורית שלו (איור 7 א-ד) לפני פירוק (איור 7E). זו אינה נחשבת כפת גרירה, כפי שהוא תלוי בעכבר באופן אקראי בחירהכיוון לחקור ואינו תלוי שבחצי כדור קליפת המוח נפגע. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Paw-שאיפות באות לידי ביטוי כאחוז מכפה-גורר למספר כולל של נגיעות כפה במהלך. הגעה מספר כפה-שאיפות כאחוז מאנשי קשר כפה כוללת עבור כל forelimb בנפרד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגיעות וכתוצאה מכך כף גרירה לספור ככפת גרירה ומגע בו זמנית. לכן, אם עכבר גורר הכפה בכל פעם שהאנשים הקשר שלו כפת קיר הגליל, אחוז גרירה-הכפה מבוטא 100%. </li></ol> 6. הצעות ניסויי עיצוב נוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער את המשתנים חיצוניים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העכברים באותו הזמן בכל יום בדיקה. בדוק את העכברים במהלך המחזור בעקבותיהם. שמירה על עכברים במחזור הפוך אור 12 שעות מאפשרת ביצועים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים יכולים להיות מסרבים לחקור את הגליל אם הדגיש גם על ידי רעש או סביבת רומן. בדיקת עכברים בחדר שלהם בבעלי החיים החזקות או חדר הם been להכיר עם מפחית את הלחץ. זה יכול להתרחש אם החדר רועש, אם העכבר כבר נדחק לפני כניסת הצילינדר או בשל התרגלות. הערה: בדיקה צריכה להתבצע פעם אחת לפני מניפולציה ניסויית לשמש כקריאה בסיסית. לאחר מניפולציה, ימי בדיקה הם בשיקול דעתו של הנסיין, למרות שזה מומלץ להימנע ממספר מופרז של חשיפות לגליל על פני תקופה קצרה של זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים עלולים להיות ששים אחורי אחרי 6-7 חשיפות לגליל. לצורך המחקר הנוכחי, עכברים נבדקו בגליל עבור הסכום כולל של שבע פעמים, לפני איסכמיה ובימים 1, 3, 7, 14, 21 ו -28 לאחר ניתוח. הערה: במחקר זה השתמשנו בזן FVBN העכבר. בדקנו בעבר C57Bl / 6 עכברים בגליל ונצפתה התנהגות גרירה-כפה הבאה פציעת איסכמי ET-1 (מידע לא מוצג). עכברי C57BL / 6 היו פעילים יותר מעכברי FVBN כאשר גידול ולעתים קרובות קפצו על החישוק של הגליללפני הטיפוס החוצה. יש להשתמש בגלילים גבוהים אם עכברים מנסים להימלט בקפיצה. </li></ol></li></ol> 7. מדידות נפח אנדותלין -1 ניתוח והאוטם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח אנדותלין -1 ומדידות נפח אוטם על פי פרוטוקולים שפורסמו בעבר 4. כדי למקד את הקורטקס המוטורי forelimb הקדמי, כל עכבר צריך לקבל שלוש ET-1 זריקות בקואורדינטות הבאות: 0.7 (i) anteriorposterior (AP) /1.5 המדיאלי-צדדיים (מיליליטר) / - 1.2 הגבי-הגחון (DV), ( ii) 0.4 AP / 1.25 מיליליטר / - 1.2 DV וכן (iii) 0.1 AP / 1.75 מיליליטר / -1.2 DV 4. </li></ol> 8. ניתוח סטטיסטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח מדידות חוזרים דו-כיוונית של שונות (ANOVA) מומלץ לנתח אחוזים לכפות המושפעות ותושפענה על פני נקודות זמן שונות גרירה-כפה. </li></ol>

<ol>
	<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Kolb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor-stimulated+generation+of+new+cortical+tissue+and+functional+recovery+after+stroke+damage+to+the+motor+cortex+of+rats.">Growth factor-stimulated generation of new cortical tissue and functional recovery after stroke damage to the motor cortex of rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 983-997 (2007).</li><li>Windle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+four+different+methods+of+producing+focal+cerebral+ischemia+with+endothelin-1+in+the+rat.">An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat.</a> Exp Neurol. 201 (2), 324-334 (2006).</li><li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reproducible+Endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse.">A reproducible Endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li><li>Tennant, K. A., Jones, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+behavioral+effects+of+endothelin-1+induced+small+cortical+infarcts+in+C57BL/6+mice.">Sensorimotor behavioral effects of endothelin-1 induced small cortical infarcts in C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Methods. 181 (1), 18-26 (2009).</li><li>Wang, Y., Jin, K., Greenberg, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+associated+with+endothelin-induced+cortical+infarction+in+the+mouse.">Neurogenesis associated with endothelin-induced cortical infarction in the mouse.</a> Brain Res. 1167, 118-122 (2007).</li><li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice.">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J Neurosci Methods. 129 (1), 87-93 (2003).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse:+functional+recovery+and+the+effects+of+gender.">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Exp Neurol. 187 (1), 94-104 (2004).</li><li>Clarke, J., Ploughman, M., Corbett, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+qualitative+and+quantitative+analysis+of+skilled+forelimb+reaching+impairment+following+intracerebral+hemorrhage+in+rats.">A qualitative and quantitative analysis of skilled forelimb reaching impairment following intracerebral hemorrhage in rats.</a> Brain Res. , 204-212 (2007).</li><li>Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'staircase+test':+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats.">The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36 (2-3), 219-228 (1991).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li><li>Tennant, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vermicelli+and+capellini+handling+tests:+simple+quantitative+measures+of+dexterous+forepaw+function+in+rats+and+mice.">The vermicelli and capellini handling tests: simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li><li>Clarkson, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMPA+receptor-induced+local+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling+mediates+motor+recovery+after+stroke.">AMPA receptor-induced local brain-derived neurotrophic factor signaling mediates motor recovery after stroke.</a> J Neurosci. 31 (10), 3766-3775 (2011).</li><li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke.">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).</li></ol>

יש הסופרים לא אינטרסים כלכליים מתחרים.

נקודות מפתח להקמה כאשר כימות גרירה-כפת התנהגות במבחן הגליל שעוקבים: i) לכמת את מספר הכפה-גורר לעומת נגיעות כפה כוללת עבור כל כפה לפני פגיעה מוחית להקים בסיס; ii) לכמת את מספר כפה-שאיפות לעומת נגיעות כפה כוללת עבור כל כפה הבאה פציעת איסכמי; וiii) להפלות בין כפת גרירה והתנועה לרוחב של כף הרגל לאורך קיר הגליל במהלך סיבוב לרוחב של פלג הגוף העליון של העכבר. Paw גרירת היא התנהגות רומן שמופיעה לאחר פגיעה בקליפת המוח הסנסורית forelimb. המראה של גרירה-כפת התנהגות לכן יכול לשמש כאינדיקציה חיובית שקליפת המוח הסנסורית forelimb נפגעה. התוצאות מראות כי נציג אוטמים קטנים ET-1 כ 2-4 מ&quot;מ 3 בנפח ומקומי לתוצאות הקליפה הסנסורית forelimb בגרירה-כפת התנהגות. זאת בניגוד לforelimb asymניתוח &quot;חג שלא מצליח לזהות את הגירעונות עקביים באחוז נגיעות כפה המושפעות לעומת נגיעות כללי הבא ET-1 פציעות קליפת המוח איסכמי 4-6. ניתוח של גרירה-כפת התנהגות לכן הוא יותר רגיש בגילוי נזק לקליפת המוח הסנסורית forelimb. יתר על כן, כי כפת גרירת נשמרה עד ארבעה שבועות לאחר פציעה זה יכול להיות גם מתאים לניתוח שחזור של פונקציה. כפי שהראינו בעבר כי גרירה-כפת התנהגות בקורלציה עם נזק לקליפת המוח הסנסורית forelimb 4, כל מספר של דגמי פציעה עשוי להועיל שבניתוח זה של מבחן הגליל. למרות פציעות גדולות, כגון עורקים התיכון ספיגה מוחין ומוח פציעת 7,8 גירעונות מופע טראומתיים על ניתוח א-סימטריה forelimb הקלאסי של מבחן הגליל, גירעונות אלה לעתים קרובות לפתור לאורך זמן. במקרים אלה, כפה-גרירה, להיות מדד רגיש יותר לנזק לקליפת המוח הסנסורית forelimb תהיה useful באיתור גירעונות כרוניים, עדינים יותר. כמו כן בדגמי פציעה אשר מראים תוצאות פחות בקנה אחד עם ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי, ניתוח גרירה-כפה יהיה שימושי באיתור גירעונות התנהגות עקביים יותר. יש כפת גרירה-אנליזה של מבחן גליל יישומים רחבים עבור מגוון רחב של דגמי פציעת איסכמי כוללים עורקים התיכון ספיגה מוחין, photothrombosis, הפשטת pial וET-1, כפי שמודגם כאן. יש מגוון של בדיקות התנהגותיות המשמשות לניתוח מנוע forelimb וגירעונות חושיים הבאים פגיעה בקליפת המוח הסנסורית. מבחן מדרגות מונטויה מעריך forelimb להגיע ולתפוס התנהגויות 9,10. כמו גלולה אחת להגיע ואכילת פסטת בדיקות לנתח את הפעילות המוטורית העדינה של כפות וספרות 11,12. ניתוח הסימטריה forelimb של מבחן הגליל מזוהה עם תמיכה ביציבה כאשר סמן העכבר נמצא על הגפיים האחורי שלה 1. רק המספרמאנשי קשר של כל כפה עושה עם קיר הגליל הוא לכמת. איך הכפה יוצרת קשר לא נבדק ועלול להוות אינדיקציה נוספת של נזק. מחקרים קודמים לכמת את משך התמיכה של כל כף מגע ומצאו יותר גירעונות עקביים בעכברים לאחר שבץ photothrombotic 13,14. התוצאות שלנו מראות כי בגליל גרירה-הכפה מופיעה בעקבות פציעה לקליפת המוח הסנסורית forelimb ועשויה להיות קשורה ליכולת מופחתת כדי לתמוך במשקל שלה עם הכף המושפעת ו / או עקב אובדן של קליטה חושית בכפה. הכפה הוא ציין ליצור קשר עם הקיר אך אינו מופיעה כדי לשמור על עמדה תומכת או לסייע בדחיפה מהקיר אלא מחליקה את מה שאנו מכנים בכפת גרירה. ראינו כי גרירה-כפת התנהגות מתרחשת כמעט בכל בעלי חיים עם פגיעה בקליפת המוח הסנסורית forelimb וכרוך דפוס ייחודי מאוד של התנהגות, מה שהופך את זה די חזק בניבוי פגיעה בקליפת המוח בr שלהight. במובן זה, כפת גרירת היא כלי שימושי בסוללה של ניתוחי התנהגות. זה שילוב של עלות הזנק נמוכה, קלות ניהול של הבדיקה, והאמינות של ניתוח גרירה-הכפה שעושה ניתוח גרירה-כפה של מבחן גליל בחירה אטרקטיבית כגון בניבוי פגיעת איסכמית מוקדי בעכבר .

המטרה של אסטרטגיות התחדשות עצביות היא להדגים שני תיקון רקמות והחלמה תפקודית. התאוששות תפקודית מוערכת בדרך כלל עם בדיקות התנהגותיות המודדות גירעונות תפקודיים, במקרה זה כרוך בכישורים מוטוריים הקשורים לפגיעה באזורים הספציפיים במוח. פגיעה מוחית טראומטית או נזק איסכמי לאזור forelimb הסנסורית של הקליפה ניתן להדגים על ידי מספר הבדיקות התנהגותיות. מבחן אחד כזה, במבחן הגליל נעשה שימוש נרחב בחולדות להעריך גירעונות תפקודיים בפעילות forelimb 1. יש מבחן עלות הקמה נמוכה הדורשת רק צילינדר, מצלמה ושולחן עם ראש שקוף. זה קל לניהול כפי שהוא מבוסס על התנהגות הגישוש הטבעית של מכרסמים, כך שלפני אימון ומניעת מזון או תגמולים אינם נדרשים. למרות יתרונות רבים אלה, מבחן הגליל מנוצל תחת להעריך גירעונות forelimb בעכברים הבאים פציעות מוקד לים forelimbensorimotor קליפה, שאנו מייחסים לניתוח התנהגות עכבר במבחן הגליל. הסימטריה forelimb היא המדד הקלאסי של ניתוח לבדיקת הצילינדר. כאשר הניחו בגליל, מכרסמים באופן טבעי לחקור את הקירות של הגליל על ידי גידול על הגפיים האחורי שלהם ולגעת בקירות הצילינדר בכפות forelimb לאיזון יציבה. מספר נגיעות כפה עם הקיר אחד עם forelimb הוא לכמת בקלות על ידי צילומי מכרסמים במהלך חקירה זו של הגליל. הסימטריה forelimb מתרחשת כאשר כפת forelimb המושפעת עושה פחות נגיעות בקיר מכפת forelimb מושפעת ומעידה על נזק לקליפת המוח הסנסורית הנגדית. בחולדות, זריקות תוך-המוחיית של סוכן vasoconstrictive, אנדותלין (ET-1), לקליפת המוח הסנסורית forelimb גורם נגע איסכמי מוקדי שתוצאת גירעונות התנהגות בforelimb הנגדי. גירעונות בשימוש forelimb נגדי מזוהים בקלות שינויים בForelimb חוסר סימטריה במבחן הגליל בחולדות 1-3. בניגוד לחולדות עם זאת, שינויים בסימטרית forelimb משתנים ופחות עקביים בעכברים הבאים זריקות ET-1 דומה 4-6. כאן אנו מדגימים ניתוח רומן של forelimb התנהגות במבחן הגליל - ניתוח של גרירה-כפת התנהגות. הראינו בעבר כי ניתוח גרירה-כפה הוא מדד רגיש יותר לנזק לקליפת המוח הסנסורית forelimb בעכברים מאשר ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי ולכן חל על מגוון רחב של דגמי פציעת קליפת המוח מוקד. בדיקה של כמה אנשי הקשר בכפו קיר הצילינדר הבאים נזק איסכמי לקליפת המוח הסנסורית forelimb חשף התנהגות רומן בעכברים - כפה-גרירת 4. גרירת כפה מתרחשת כאשר עכבר עומד על רגליו האחוריות כדי לחקור את קיר הגליל אז גורר את כפתה המושפעת (קונטרה-lesional) לאורך קיר הגליל לכיוון קו האמצע שלה או את הקיר בזמן שבכפו לא נפגע מספקת תמיכה יציבה על הקיר. Paw-גורר לעתים רחוקות מתרחש בעכברים ללא כל פגע לכן את המראה של כף גרירה הוא אינדיקטור חיובי של פגיעה בקליפת המוח הסנסורית forelimb 4. יש לנו לכמת בעבר גרירה-כפת התנהגות בעכברים הבאה ET-1 נזק איסכמי לקליפת המוח הסנסורית forelimb והראו שנגרמה התנהגות גרירה-כפה בעכברים עד שבועיים שבץ-פוסט 4. כאן אנו מראים כי גרירה-כפת ההתנהגות מתמשכת עד שבץ-פוסט ארבעה שבועות. ניתוח של גרירה-כפת התנהגות מספק כלי חדשני ורגיש להערכת נזק איסכמי מוקד לקליפת המוח הסנסורית forelimb בעכברים. ההגדרה שלה זולה, קל ממשל ובקיע להפוך את זה לכלי פשוט, עדיין שימושי כדי להעריך במהירות את גירעונות התנהגות forelimb בעכברים.

<table><tbody><tr><td>Plexi-glass cylinder</td><td></td><td></td><td>17.5 cm high, 9.5 cm outer diameter, 8.8 cm inner diameter, wall thickness 0.35 cm (or 3.5 mm)</td></tr><tr><td>viewing table</td><td></td><td></td><td>54x56x66.5 cm (width x length x height), top of table is a 51x51 cm sheet of plexiglass.</td></tr><tr><td>mirror</td><td></td><td></td><td>34x58 cm mirror</td></tr><tr><td>video camera</td><td>Sony</td><td>DCR-SR42</td><td>Video camera with onboard storage, SD functionality, 40x optical zoom</td></tr><tr><td>computer</td><td>Dell</td><td>Optiplex 760</td><td>Processor: Intel, 3.0 GHz, Memory 4.00GB (RAM)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>computer monitor</td><td>Samsung</td><td>S22C350H</td><td></td></tr><tr><td>Excel (Microsoft Office Professional Plus)</td><td>Microsoft</td><td>v14.0.7106.5003</td><td></td></tr><tr><td>VLC Media Player</td><td>Video LAN</td><td>v2.1.2</td><td>Media player with playback speed modulation and video support</td></tr><tr><td>External Hard Drive</td><td>Western Digital</td><td>WDBAAU0020HBK-01</td><td>2 TB</td></tr></tbody></table>

paw-dragging: a novel, sensitive analysis of the mouse cylinder test

מבחן הגליל משמש באופן שגרתי כדי לחזות נזק איסכמי מוקד לקליפת המוח המוטורי forelimb במכרסמים. כאשר הניחו בגליל, מכרסמים לחקור על ידי גידול ולגעת בקירות של הגליל בכפות forelimb לתמיכה ביציבה. בעקבות פציעת איסכמי לקליפת המוח הסנסורית forelimb, חולדות להסתמך יותר בכבדות על כפת forelimb המושפעת לתמיכה ביציבה וכתוצאה מכך פחות נגיעות בכפה המושפעת שנקראת סימטריה forelimb. לעומת זאת, נזק איסכמי מוקדי במוח העכבר לא מצליח לגרום לגירעונות עקביים דומים בסימטרית forelimb. בעוד גירעונות הסימטריה forelimb הם נצפו לעתים רחוקות, עכברים אין להפגין התנהגות פוסט שבץ רומן נקרא &quot;כפת גרירת&quot;. Paw גרירת היא הנטייה לעכבר כדי לגרור כפתה המושפעת לאורך קיר הצילינדר ולא ישירות מלדחוף את הקיר כאשר פירוק מאחורי לעמדת ארבעה רגליים. אנחנו הוכחנו בעבר שהתנהגות גרירת כפה היא רגישה מאוד לפציעות איסכמי בקליפת המוח קטנות לקליפת המוח המוטורי forelimb. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט לניתוח גרירה-כפה. אנו מגדירים מה היא כפת גרירה ולהדגים כיצד לכמת גרירה-כפת התנהגות. מבחן הגליל הוא בדיקה פשוטה ולא יקרה לניהול ואינו דורש מראש הכשרה או אסטרטגיות מניעת מזון. בשימוש בניתוח גרירה-כפה עם מבחן הגליל, זה ממלא נישה לניבוי פציעות איסכמי קליפת המוח כגון photothrombosis ואנדותלין-1 (ET-1) איסכמיה -induced - שני דגמים שהולכים וגוברים בפופולריות ולייצר פציעות מוקדי קטנות יותר מחסימת עורק המוח אמצעית. לבסוף, מדידת גרירה-כפת התנהגות במבחן הגליל תאפשר מחקרים של החלמה תפקודית לאחר פגיעה בקליפת המוח באמצעות עוקבה רחבה של זני עכבר מהונדסים שבי ניתוח הסימטריה forelimb קודם לא הצליח לזהות את גירעונות עקביים.

אנחנו הוכחנו בעבר כי התנהגות גרירה-כפה מופיעה הבאה פציעת איסכמי מוקד לקליפת המוח הסנסורית forelimb והוא אינדיקטור חיובי של נזק 4. זריקות תוך-המוחיית של ET-1 לקליפת המוח הסנסורית forelimb שמשו כדי לגרום לפגיעת איסכמית (איור 8 א &#39;, ב&#39;). מחקר זה בדק האם גרירה-כפת ההתנהגות הוארכה ליותר מ -14 ימים לאחר פציעה לשימוש הפוטנציאל שלה כדי להעריך את ההחלמה תפקודית. עכברים נבדקו במבחן הגליל ביום לפני ET-1 זריקות לנקודת הזמן מראש ניתוח, ובימים 1, 3, 7, 14, 21 ו -28 לאחר פציעה. בכל נקודת זמן, מספר נגיעות כפה וגורר את הכף היה לכמת עבור שתי כפות המושפעות ותושפענה. שני צעדים בדרך חוזר ונשנה ANOVA על מספר נגיעות כפה גילו השפעות משמעותיות עיקריות של זמן [F (6108) = 3.59, P = .0028] ונושאים [F (18108) = 2.38, P = .0032] אבל אין כל השפעה של טיפול(טבלה 1). ואילו, באמצעות הניתוח הסטנדרטי של הסימטריה forelimb למבחן הגליל אשר מכמת נגיעות כפה מושפעות לעומת סך נגיעות כפה חשף גירעונות התנהגות forelimb עולה בקנה אחד. צעדים בכיוון אחד חזרו ANOVA על אחוזים שימוש כפה המושפע חשפו השפעה העיקרית משמעותית של זמן (p = 0.015) שאחריו מבחן הפוסט הוק של Dunnett הראה ירידה משמעותית בשימוש כפה המושפע אחוזים בשעה 7, 14 ו -21 ימים לאחר -surgery והתאושש ב -28 ימים שלאחר הניתוח (איור 8C). לעומת זאת, שני צעדי דרך חוזרות ונשנות ANOVA על מספר הכפה גוררים חשפו השפעות עיקריות משמעותיות של זמן [F (6108) = 7.09, P &lt;0.0001], טיפול [F (1,108) = 33.02, P &lt;0.0001], אינטראקציה [ F (6108) = 9.89, P &lt;0.0001] ונושאים [F (18108) = 4.84, P &lt;0.0001]. ניתוח Bonferroni נוסף פוסט הוק הראה עלייה משמעותית במספר הכפה גורר בכל נקודת זמן לאחר ניתוח (טבלת 1). כמו כן, שתי בדרך חזרו אמצעי ANOVA השוואת מספר מושפע הכפה-גורר לעומת סך נגיעות כפה מושפעות גילה השפעות משמעותיות עיקריות של זמן [F (6108) = 6.63, p &lt;0.0001], טיפול [F (1,108) = 20.46, p = 0.0003], אינטראקציה [F (6108) = 8.21, p &lt;0.0001] ונושאים (התאמה) [F (18108) = 7.35, p &lt;0.0001]. ניתוח Bonferroni נוסף פוסט הוק הראה משמעותית גרירה-כפת התנהגות עד לאחר ניתוח 28 ימים (איור 8D). התנהגות גרירה-הכפה הייתה ספציפית לאיבר הפגוע כמו שאף עלייה או שינוי בכפת גרירת נצפתה עם האיבר מושפע. התנהגות עם הכף המושפעת גרירה-הכפה הייתה גבוהה באופן משמעותי בבית 1, 3, 7, 21 ו -28 ימים שלאחר הניתוח (איור 8D). התנהגות גרירת כפה הגיעה לשיא של פוסט-ניתוח יום 1 ב&gt; 30% מכל נגיעות הכפה עם forelimb המושפע וכתוצאה מכך כף גרירה אז ירד ל ~ 15% ב -3 ימים לאחר ניתוח שבו נשאר עד וכולל 28 ימים לאחר ניתוח. בשעת 28 ימים לאחר ניתוח, עכברים מורדמים וכרכי אוטם העריכו. נפח האוטם הממוצע לקבוצה היה 3.2 ± 0.4 מיקרומטר 3 (n = 10 עכברים). תוצאות אלו מראות כי אוטמים בקליפת המוח קטנים יכולים לגרום לגירעונות התנהגות משמעותיים ומתמשך, כפי שנמדדו במבחן הגליל. לסיכום, נתונים אלה מראים כי לא רק הוא תגובה מאוד לניזק לקליפת המוח הסנסורית forelimb גרירה-כפה, אבל שכפת גרירת גם נמשכת לאורך זמן וניתן להשתמש בו כדי להעריך את ההחלמה תפקודית. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig1.jpg" /> מקומות תושבת איור 1. להדק מראה במקום מתחת לשולחן. (א) להציג חזית שולחן מראה מקומות הסוגר על רגליים הקדמיות של השולחן. הגדלה גבוהה של הבלעה במיקום מראה בסוגריים על רגליים הקדמיות (א &#39;). מבט אחורי של הצג שולחן (ב)<html> ing מקומות תושבת רגל אחוריים. הגדלה גבוהה של הבלעה בB מציינת מיקום תושבת על רגליים האחוריות של שולחן (ב &#39;). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig2.jpg" /> איור 2. סימון המיקום למיקום גליל על השולחן. תמונה של השולחן מציין מיקום של הגליל עם קווים שחורים נמשכים סביב ההיקף של הבסיס. חצים מצביעים על הקווים השחורים נמשכים בחלק התחתון של פרספקס משמש למרכוז הגליל על השולחן. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig3.jpg" /> מבט מלפנים איור 3. של מצלמה והגדרת שולחן. תמונה של השולחן מפגין קו הראיה ישיר דרך קנה הגליל (חץ אדום). <html> דק-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig4.jpg" /> איור 4. מבט מצד של הגדרת המצלמה ושולחן. המצלמה מיועדת ישירות בבסיס של הגליל. טבלה () והתקנת מצלמה נלקחו מלמעלה. טבלה (B) והתקנת מצלמה נלקחו ברמה של השולחן, מראים גידול עכבר בגליל. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig5.jpg" /> איור 5. רצף של תמונות מפגינות גידול עכבר וללא כל פגע. (א) תמונה של עכבר לפני אחורי. (ב) העכבר נוגע בקיר הגליל עם שני כפות. (ג) כדי לרדת, עכבר ידחוף על קיר הגליל באמצעות שני כפות, ואדמה (ד) בכל ארבע כפות. הכפה של לוטננט = העכבר השמאלי, הכפה הימנית של RT = העכבר. ntent &quot;FO: לשמור-together.within עמודים =&quot; תמיד &quot;&gt; <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig6.jpg" /> איור 6. רצף של תמונות מפגינות כפת גרירת עכבר פצועה. (א) תמונה של עכבר לפני אחורי. (ב) העכבר לגעת בקיר הגליל עם שני כפות; (ג) אז תן לאט את הספרות על גרירת הכפה המושפעת בצורה אנכית במורד קיר הגליל; (ד) לפני שנותן לי הכפה נופלת מהקיר. (ה) העכבר ואז לרדת ברגלם לא נפגעה ואדמה (F) בכל ארבע כפות. ריבועי בהגדלה גבוהים בB, C ו- D להדגים כיצד אנשי הקשר בכפו המושפע קיר הגליל. הכפה השמאלית של לוטננט = העכבר. <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig7.jpg" /> איור 7. &quot;כפת גרירה שאינה&quot;. </stRong&gt; תנועת גישוש רוחב במהלך אחורי לא נחשבת כפת גרירה. () העכבר נוגע בקיר הגליל עם שני כפות. (ב) העכבר מסובב את הגוף שלה רוחבי לחקור את קיר הגליל. (ג) העכבר מחדש עמדות הכף המובילה שלה למיקום חדש רוחבי וגורר את הכפה נגררת שלה באותו הכיוון. הכפה נגררת (ד) נטועה עמוקה במיקומו החדש, ושני כפות משמשות ללרדת (E) כדי לחזור לכל ארבעת כפות. ראשי החץ אדומים מצביעים על מיקום של כפות במיקומי התחלה וסיום. חץ אדום מציין תנועה של כף נגרר לאורך קיר הגליל. <img alt="איור 8" src="/files/ftp_upload/52701/52701fig8.jpg" /> () PH 8. התנהגות Paw-גרירת הדמות ספגה במשך 4 שבועות הבאים בקליפת המוח מוקדי, נגע איסכמי. נציג<html> otomicrograph של סעיף מוכתם סגול cresyl עטרה מוח דרך נגע איסכמי ET-1 ב 28 ימים שלאחר ניתוח. הגדלה גבוהה של נגע ET-1 של אזור התאגרף ב( B). ניתוח (C) של א-סימטריה forelimb במבחן הגליל הבא פציעת איסכמי ET-1 להסנסורית forelimb תערוכות גירעונות התנהגות משתנים. הנתונים מבוטאים כממוצע ± SEM. אמצעים נותחו על ידי מדידות חוזרות בכיוון אחד ANOVA חושף השפעה העיקרית משמעותית של זמן (p = 0.015) ואז אחרי בדיקת הפוסט הוק של Dunnett השוואה בכל האמצעים לאמצעים לפני הטיפול. (ד) ניתוח של גרירה-כפת התנהגות במבחן הגליל חושף גירעון התנהגות forelimb מתמשך עד ארבעה שבועות הבאים פציעת איסכמי מושרה ET-1. אמצעים נותחו על ידי אמצעים דו-כיווניים חזרו ANOVA ואחריו מבחן posthoc Bonferroni. (N = 10) * P &lt;0.05, ** P &lt;0.01, *** P &lt;0.001.f = יעד &quot;https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52701/52701fig8large.jpg&quot; = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Watch this Scientific Journal Video about Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test at JoVE.com

Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי של מבחן הגליל משמש באופן שגרתי כדי להעריך גירעונות התנהגות בחולדות הבאים פגיעה מוחית או שבץ; עם זאת, זה לא מצליח לזהות את הגירעונות עקביים בעכברים. מחקר זה מוכיח כי כימות כפת גרירת התנהגות הוא ניתוח רגיש יותר של פגיעה מוחית בעכברים.

Paw-גרירה: רומן, ניתוח רגיש של מבחן צילינדר העכבר

The cylinder test is routinely used to predict focal ischemic damage to the forelimb motor cortex in rodents. When placed in the cylinder, rodents explore ...

paw-dragging-a-novel-sensitive-analysis-of-the-mouse-cylinder-test

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

23.4K Views.  Memorial University of Newfoundland.  ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי של מבחן הגליל משמש באופן שגרתי כדי להעריך גירעונות התנהגות בחולדות הבאים פגיעה מוחית או שבץ; עם זאת, זה לא מצליח לזהות את הגירעונות עקביים בעכברים. מחקר זה מוכיח כי כימות כפת גרירת התנהגות הוא ניתוח רגיש יותר של פ?...

Video: Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

Assessment of Sensorimotor Function in Mouse Models of Parkinson's Disease

Sensitive and reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of potential therapeutic treatments in preclinical trials for many neurodegenerative diseases. In Parkinson's disease, sensorimotor tests sensitive to varying degrees of nigrostriatal dysfunction are fundamental for testing the efficacy of potential therapeutics. Reliable and quite elegant sensorimotor measures exist for rats, however many of these tests measure sensorimotor asymmetry within the rat and are not entirely suitable for the newer genetic mouse models of PD. We have put together a battery of sensorimotor tests inspired by the sensitive tests in rats and adapted for mice. The test battery highlighted in this study is chosen for a) its sensitivity in a wide variety of mouse models of PD, b) its ease in implementing into a study, and c) its low expense. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of PD as well as in testing potential disease-modifying therapies.

In Parkinson's disease and movement disorders in general, sensitive and reliable behavioral assays are essential for testing novel potential therapeutics. Here, we describe a manageable battery of sensorimotor tests for mice that are sensitive to varying degrees of injury to the nigrostriatal system and useful for preclinical studies.

הערכת התפקוד הסנסורית בעכברי מודל של מחלת פרקינסון

Sensitive and  reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of  potential therapeutic treatments in preclinical trials for many  ...

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

אטריה ו בדיקות Capellini טיפול: מדדים כמותיים פשוט פונקציה של מיומנות בכפו אצל חולדות ועכברים

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Neuroscience

Assessing Functional Performance in the Mdx Mouse Model

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe and progressive muscle wasting disorder for which no cure is available. Nevertheless, several potential pharmaceutical compounds and gene therapy approaches have progressed into clinical trials. With improvement in muscle function being the most important end point in these trials, a lot of emphasis has been placed on setting up reliable, reproducible, and easy to perform functional tests to pre clinically assess muscle function, strength, condition, and coordination in the mdx mouse model for DMD. Both invasive and noninvasive tests are available. Tests that do not exacerbate the disease can be used to determine the natural history of the disease and the effects of therapeutic interventions (e.g. forelimb grip strength test, two different hanging tests using either a wire or a grid and rotarod running). Alternatively, forced treadmill running can be used to enhance disease progression and/or assess protective effects of therapeutic interventions on disease pathology. We here describe how to perform these most commonly used functional tests in a reliable and reproducible manner. Using these protocols based on standard operating procedures enables comparison of data between different laboratories.

Assessing Functional Performance in the Mdx Mouse Model

The primary outcome measure in clinical trials for neuromuscular disorders is generally improved muscle function. Therefore, assessing the effect of potential therapeutic compounds on muscle performance pre clinically in mouse models is of great importance. We here describe several functional tests to address this.

הערכת ביצועים תפקודיים ב<em&gt; MDX</em&gt; עכבר דגם

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe and progressive muscle wasting disorder for which no cure is available. Nevertheless, several potential ...

Measuring Motor Coordination in Mice

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such as emotionality or cognition can be assessed, however, it is vital to determine whether the motor capabilities of e.g. a mutant or lesioned mouse allow such an assessment. Performance on a maze task requiring strength and coordination, such as the Morris water maze, might well be impaired in a mouse by motor, rather than cognitive, impairments, so it is essential to selectively dissect the latter from the former. For example, sensorimotor impairments caused by NMDA antagonists have been shown to impair water maze performance2. 
Motor coordination has traditionally been assessed in mice and rats by the rotarod test, in which the animal is placed on a horizontal rod that rotates about its long axis; the animal must walk forwards to remain upright and not fall off. Both set speed and accelerating versions of the rotarod are available.
The other three tests described in this article (horizontal bar, static rods and parallel bars) all measure coordination on static apparatus. The horizontal bar also requires strength for adequate performance, particularly of the forelimbs as the mouse initially grips the bar just with the front paws. 
Adult rats do not perform well on tests such as the static rods and parallel bars (personal observations); they appear less well coordinated than mice. I have only tested male rats, however, and male mice seem generally less well coordinated than females. Mice appear to have a higher strength:weight ratio than rats; the Latin name, Mus musculus, seems entirely appropriate. The rotarod, the variations of the foot fault test12 or the Catwalk (Noldus)15 apparatus are generally used to assess motor coordination in rats.

Protocols are presented for two established motor coordination tasks, the accelerating rotarod and horizontal bar, also two tests developed in Oxford recently, the static rods and parallel bars. These tests can detect motor impairments potentially of interest in their own right, as well as being possible variables in tests of other areas of behavior.

מדידת קואורדינציה מוטורית בעכברים

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such ...

Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important behavioral test to determine whether the mice mimic the symptoms of patients. Motor deficits are often induced by stress when no spontaneous motor phenotype is observed in the mouse models. Therefore, gait analysis followed by stress loading would be a sensitive method for evaluating the motor phenotype in mouse models. However, researchers face the requirement of an expensive apparatus to obtain quantitative results automatically from gait analysis. For stress, stress loading by simple methods without expensive apparatuses required for electric shock and forced running is desirable. Therefore, we introduce a simple and low-cost protocol consisting of footprint analysis with paper and ink, hanging box test to evaluate motor function, and stress loading defined by restraint with a conical tube. The motor deficits of mice were successfully detected by this protocol.

The low-cost protocol consisting of footprint analysis and hanging box test after restraint stress is useful for evaluating the movement disorders of mouse model.

פרוטוקול נמוכים של ניתוח טביעת רגל ותלייה תיבת הבדיקה עבור עכברים חלה הלחץ איפוק כרונית

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain perception in rodents. Withdrawal thresholds can be measured first at baseline and then following drug, venom, injury, allergen,&#160;or otherwise evoked inflammation by applying an accurate force on very specific areas of the skin. An electronic von Frey apparatus allows precise assessment of mouse hind paw withdrawal thresholds that are not limited by the available filament sizes in contrast to classical von Frey measurements. The ease and rapidity of measurements allow for incorporation of assessment of tactile sensitivity outcomes in diverse models of rapid-onset inflammatory and neuropathic pain as multiple measurements can be taken within a short time period. Experimental measurements for individual rodent subjects can be internally controlled against individual baseline responses and exclusion criteria easily established to standardize baseline responses within and across experimental groups. Thus, measurements using an electronic von Frey apparatus represent a useful modification of the well-established classical von Frey filament-based assays for rodent mechanical allodynia that may also be applied to other nonhuman mammalian models.

Electronic von Frey measurements are an effective and improved alternative to classical von Frey filaments, as they allow rapid and precise measurement of changes in rodent mechanical withdrawal thresholds to continuously applied pressure stimuli before and after an inflammatory event.

מדידת שינויים במגע רגישות בכף הרגל האחורית של עכברים באמצעות מנגנון אלקטרוני פון פריי

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Assessment of Mouse Judgment Bias through an Olfactory Digging Task

Judgment biases (JB) are differences in the way that individuals in positive and negative affective/emotional states interpret ambiguous information. This phenomenon has long been observed in humans, with individuals in positive states responding to ambiguity 'optimistically' and those in negative states instead showing 'pessimism'. Researchers aiming to assess animal affect have taken advantage of these differential responses, developing tasks to assess judgment bias as an indicator of affective state. These tasks are becoming increasingly popular across diverse species and fields of research. However, for laboratory mice, the most widely used vertebrates in research and a species heavily relied upon to model affective disorders, only one JB task has been successfully validated as sensitive to changes in affective state. Here, we provide a detailed description of this novel murine JB task, and evidence of its sensitivity to mouse affect. Though refinements are still necessary, assessment of mouse JB opens the door for answering both practical questions regarding mouse welfare, and fundamental questions about the impact of affective state in translational research.

This article provides a detailed description of a novel mouse judgment bias protocol. Evidence of this olfactory digging task's sensitivity to affective state is also demonstrated and its utility across diverse research fields is discussed.

הערכה של הטיית שיפוט עכברים באמצעות משימת חפירת חוש הריח

Judgment biases (JB) are differences in the way that individuals in positive and negative affective/emotional states interpret ambiguous information. This ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, standardized battery of neonatal mouse motor tests. These tests can validate injury or disease models, determine treatment efficacy and/or assess motor behaviors in new transgenic strains. This paper presents a series of neonatal motor tests to evaluate general motor function, including ambulation, hindlimb foot angle, surface righting, negative geotaxis, front- and hindlimb suspension, grasping reflex, four limb grip strength and cliff aversion. Mice between the ages of post-natal day 2 to 14 can be used. In addition, these tests can be used for a wide range of neurological and neuromuscular pathologies, including cerebral palsy, hypoxic-ischemic encephalopathy, traumatic brain injury, spinal cord injury, neurodegenerative diseases, and neuromuscular disorders. These tests can also be used to determine the effects of pharmacological agents, as well as other types of therapeutic interventions. In this paper, motor deficits were evaluated in a novel neonatal mouse model of cerebral palsy that combines hypoxia, ischemia and inflammation. Forty-eight hours after injury, five tests out of the nine showed significant motor deficits: ambulation, hindlimb angle, hindlimb suspension, four limb grip strength, and grasping reflex. These tests revealed weakness in the hindlimbs, as well as fine motor skills such as grasping, which are similar to the motor deficits seen in human cerebral palsy patients.

Presented is a concise battery of mouse neonatal motor tests. Using these tests, neonatal motor deficits can be demonstrated in a variety of neonatal motor disorders. By having a standardized set of tests, results from different studies can be compared, allowing for better and accurate reporting between groups.

סדרת מבחנים Motor במודל של עכברים ילודים של שיתוק מוחין

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Medicine

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...