La mesure in vitro est une mesure appropriée pour inspecter la dissolution des solutions de préparation solide de la médecine chinoise qui tiennent compte des effets de la désintégration du médicament, du comportement de dissolution et de la teneur en ingrédient actif. La détection d’une composante multi-index peut mieux refléter l’influence neutre et la différence de dissolution des différentes composantes. La démonstration de la procédure sera Quinyun Du, un étudiant extraordinaire de mon laboratoire.
Pour commencer, préparer la solution mère de la substance de référence en pesant 10,6 milligrammes de salidrocide, 5,24 milligrammes d’acide gallique et 5,21 milligrammes d’acide éthylgallique séparément sur une balance analytique électronique. Ensuite, ajoutez-les individuellement dans une fiole jaugée de cinq millilitres. Ajoutez ensuite du méthanol de qualité CLHP pour le dissoudre et diluez à cinq millilitres.
Et enfin, bien agiter pour obtenir la solution mère de la substance de référence avec des concentrations massiques de 2,120, 1,048 et 1,042 milligrammes par millilitre, respectivement. Pour préparer la solution de l’échantillon d’essai, extraire 2,8 grammes de granules de rhodiola avec 10 millilitres de méthanol de qualité CLHP, à l’aide d’une machine de nettoyage à ultrasons pendant 30 minutes. Ensuite, filtrez-le avec un filtre de 0,22 micromètre pour le test d’adaptabilité du système.
Ensuite, préparez une solution de référence mélangée qui contient 0,590 milligramme par millilitre de salidrocide, 2,030 milligrammes par millilitre d’acide gallique et 1,930 milligrammes par millilitre de gallate d’éthyle. Pour obtenir la teneur théorique de chaque composant caractéristique des granules de rhodiola, placer 2,8 grammes de granulés de rhodiola dans une fiole conique de 500 millilitres. Ajouter 200 millilitres d’eau ultrapure et extraire par ultrasons pendant 60 minutes.
Ensuite, filtrez-le avec un filtre de 0,22 micromètre. Après avoir déterminé le contenu de la solution d’essai, fixer les conditions chromatographiques pour la chromatographie liquide à haute performance telles que décrites dans le manuscrit. Pour étudier la relation linéaire, diluer les solutions mères de référence d’acide gallique et de gallate d’éthyle, et les solutions mères de référence de salidrocide pour obtenir la solution de concentration de gradient permettant de tracer une courbe étalon.
Injectez ensuite 10 microlitres de la solution de référence mélangée dans le système HPLC six fois par jour et exécutez les échantillons avec les mêmes conditions HPLC, tout en enregistrant la surface de pic de chaque composant de la caractéristique. Ensuite, injectez 10 microlitres de la solution d’échantillon préparée et déterminez les zones de pic de la CLHP en fonction des conditions chromatographiques à différents intervalles de temps. Prélever six échantillons du même lot de granulés de rhodiola pour préparer la solution d’échantillon d’essai comme démontré précédemment, et injecter 10 microlitres de chaque échantillon dans le système CLHP.
Exécutez les échantillons comme indiqué précédemment pour déterminer la reproductibilité. Après avoir préparé six portions du même lot de granulés de rhodiola pour la solution d’essai, ajouter environ 50 % du substrat de référence de chaque composant d’indice. Exécutez ces échantillons dans le système HPLC, comme démontré précédemment, pour calculer le taux de récupération tel que décrit dans le manuscrit.
Pour effectuer le test de dissolution, ajoutez 100 millilitres d’eau ultrapure dans la coupelle de dissolution de l’appareil de dissolution du médicament et maintenez la température à 37 degrés Celsius avec une vitesse de rotation de 100 tr / min. Ensuite, ajoutez 2,8 grammes de granules de rhodiola dans une tasse de dissolution et commencez immédiatement à enregistrer la durée de la dissolution. Prélever un total d’un millilitre de l’échantillon avec un injecteur à différents intervalles de temps et compléter immédiatement le volume dans la coupelle de dissolution avec un milieu de dissolution à la même température.
Remplissez immédiatement les échantillons prélevés à travers une membrane microporeuse de 0,22 micromètre et prenez le filtrat suivant. Après avoir déterminé le contenu de chaque composant, à chaque point temporel par CLHP, calculer la dissolution de chaque point temporel et la dissolution cumulative comme décrit dans le manuscrit. Le chromatogramme de l’échantillon et la solution de référence ont été obtenus.
Trois pics différents correspondant à l’acide gallique, au salidrocide et au gallate d’éthyle montrent que le gradient d’élution avait une bonne résolution pour les trois composants de l’indice dans les granules de rhodiola. Les courbes de dissolution de chaque composant montrent que la dissolution cumulée de l’acide gallique était supérieure à 80% après une minute. Alors que pour le salidrocide et l’acide éthylgallique, il était supérieur à 65% après cinq minutes.
Cependant, la dissolution cumulative de chaque composante de l’indice a diminué après 30 minutes. En ajustant le problème de dilution de la courbe standard, en fonction de l’expérience préliminaire du traitement de l’échantillon, les échantillons doivent être prélevés rapidement pour éviter qu’ils ne manquent un point de temps de collecte spécial.
