La dégénérescence maculaire liée à l’âge est considérée comme l’une des principales causes de perte de vision centrale. La dégénérescence progressive et le dysfonctionnement de la couche EPR sont une caractéristique de la forme précoce de DMLA. Malgré les progrès du traitement des maladies de la rétine, le développement d’une modalité de traitement efficace reste difficile.
L’un des concepts de traitement les plus prometteurs est le remplacement de l’EPR par une culture in vitro de cellules EPR d’origine différente. Les EPR ont généralement été délivrés dans l’espace sous-rétinien sous la forme d’une suspension cellulaire, de la feuille cellulaire autoportante ou d’une monocouche cellulaire soutenue par un support artificiel. Le principal avantage des deux méthodes tardives est qu’après l’implantation, les cellules se trouvent dans un état monocouche différencié dans l’espace sous-rétinien.
Les études précliniques animales réalisées in vivo visent à établir une intervention chirurgicale reproductible et sûre sur un modèle animal à gros œil afin d’obtenir des données qui pourraient être utiles et potentiellement applicables chez l’homme. Avec ce protocole, nous visons à rapporter les principes de la technique chirurgicale sous-rétinienne utilisée pour l’implantation sous-rétinienne in vivo d’un porteur cellulaire dans un grand modèle animal qui pourrait être utilisé pour des études expérimentales in vivo avec implantation de différents types de cellules et de porteurs cellulaires. Avec cette vidéo, nous aimerions présenter un protocole étape par étape de la procédure chirurgicale d’implantation sous-rétinienne du transporteur cellulaire dans les yeux du miniporc Libechov.
Insérez le spéculum du couvercle. Ouvrez la conjonctive sur le côté nasal à deux à trois millimètres du limbe afin d’exposer la sclérotique aux sclérotomies. Insérez les trois trocarts de calibre 25 à trois millimètres du limbe dans la zone du pars plana.
Gardez la cornée humide ou enduit-elle de méthylcellulose pendant toute la chirurgie pour prévenir l’œdème cornéen osmotique. Retirez la partie médiane du corps vitré avec l’approche standard de vitrectomie pars plana à trois orifices. Retirez délicatement le vitré derrière la lentille dans la zone de la future grande sclérotomie.
Utilisez l’injection intravitréenne d’acétonide de triamcinolone pour colorer le vitré postérieur, qui reste généralement adhérent à la rétine afin d’effectuer un décollement du vitré postérieur contrôlé. Après cela, effectuez lentement une injection sous-rétinienne de BSS avec une canule de calibre 41 plus centrale, en évitant la formation du bleb vers la périphérie. Réduire le réglage de la pression intraoculaire du système d’irrigation à 15 millimètres de mercure pendant l’injection sous-rétinienne afin d’éviter l’occlusion vasculaire rétinienne transitoire.
Effectuer une grande endodiathermie linéaire de la rétine avec la sonde d’endodiathermie de calibre 27 près de la base du bulbe nasal. Ensuite, faites une rétinotomie de trois millimètres de large à l’aide d’une lame MVR de calibre 25 ou de ciseaux verticaux avec une pression intraoculaire élevée du système d’irrigation jusqu’à 60 millimètres de mercure pendant trois à cinq minutes. Ensuite, faites une sclérotomie de trois millimètres de large à trois millimètres du limbe à l’aide d’un couteau phaco de 2,75 millimètres.
Faites attention à l’exodiathermie d’un éventuel saignement des vaisseaux scléraux et du corps ciliaire à l’intérieur de la grande sclérotomie. Retirez le corps vitré prolabé du côté de la grande sclérotomie avec le vitrecteur. Insérez ensuite doucement l’injecteur avec une main dominante dans la cavité vitrée par la grande sclérotomie.
Implanter le porteur cellulaire à travers la rétinotomie dans l’espace sous-rétinien. Retirez l’injecteur de l’œil et fermez la grande sclérotomie avec un 8-0 Suture de vicryle pour éviter les complications associées à l’hypotonie intraoculaire. Effectuez un échange fluide-air complet avec la canule à embout en silicone.
Après cela, injectez l’huile de silicone dans la cavité vitrée jusqu’à ce que la pression intraoculaire soit normale. À la fin de la chirurgie, retirez les trocarts et fermez les trois sclérotomies et la conjonctive avec 8-0 Sutures en vicryl. Pour plus de détails, veuillez consulter la section Intervention chirurgicale.
Nettoyez la zone périoculaire. Utilisez les pinces et les ciseaux pour enlever la paupière supérieure et inférieure. Retirez la troisième paupière.
Couper à travers la conjonctive. Coupez les muscles oculaires avec des ciseaux. Procéder à la coupe circulairement de la surface à la profondeur.
Couper le nerf optique. Retirez l’œil de l’orbite. La clarté de la cavité vitrée remplie d’huile de silicone permet de visualiser l’état de la rétine avec un support cellulaire sous-rétinien à tout moment de la période postopératoire.
Les images sans rouge montrent que la réflectivité des cellules EPR humaines cultivées dans le cadre porteur de cellules ne diffère pas de la réflectivité de la couche d’EPR porcine indigène. L’imagerie OCT in vivo révèle que le porteur cellulaire implanté dans l’espace sous-rétinien n’augmente pas significativement toute l’épaisseur rétinienne. La membrane de Bruch semble également rester intacte.
Le cadre de la cellule porteuse ne provoque qu’une ombre mineure du signal OCT. L’étude histologique des coupes cryogéniques post-mortem de la rétine démontre la formation de la couche cellulaire pigmentée continue et irrégulière dans la zone de l’EPR humaine primaire implantée, ce qui prouve la survie de la culture sur les cellules porteuses cellulaires. L’analyse immunohistochimique de la section tissulaire montre les cellules RPE humaines, qui sont présentes dans la zone de l’implantation, et exprime le marqueur RPE typique similaire aux cellules RPE miniporc indigènes.
Malgré cela, les cellules RPE implantées n’apparaissent pas comme une monocouche cellulaire. Pourtant, ces cellules sont situées dans l’espace sous-rétinien défini. Un modèle animal à gros yeux de miniporcs, dans ce cas, les miniporcs Libechov, nous considérons comme l’un des modèles les plus appropriés pour l’application future de nouveaux concepts pour le traitement des maladies dégénératives de la rétine, en raison de leur similitude avec l’anatomie et la physiologie de l’œil humain.
Ces similitudes permettent de développer les techniques chirurgicales et l’instrumentation pour l’implantation sous-rétinienne de porteurs cellulaires, et cette technique pourrait être facilement transférée au traitement des troubles oculaires humains. Il est important de s’assurer que les chirurgies sur les miniporcs sont effectuées avec la même instrumentation, y compris les outils d’administration d’implantation, qui seraient également utilisés dans les chirurgies humaines, rendant ainsi l’application de l’expérience et du savoir-faire acquis aux humains sans difficultés. La description détaillée des procédures de soins chirurgicaux et postopératoires préopératoires pourrait être utile pour les études futures en augmentant la production de données efficaces et normalisées.
