Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur l’incitation et l’évaluation de la myopie induite par la lentille chez la souris. Comme la façon de stabiliser les lentilles. La principale étape numéro un de cette technique est que toutes les étapes ont été optimisées et normalisées permettant l’acquisition de résultats précis, reproductibles et comparables entre les laboratoires.
Généralement, les gens nouveaux à cette méthode est la lutte car il est très difficile de coller les lunettes sur les têtes de souris stably sans aucune pratique. Pour chaque souris, préparez ce qui suit. Un bâton de nylon monté sur la tête.
Un cadre en titane plus haut et un cadre inférieur en titane. Deux lentilles avec les pouvoirs appropriés selon le but de l’expérience. Une vis de taille M1.4 de longueur de 10 mm.
Un écrou pour la vis de taille M1.4. 1 laveuse ordinaire pour la vis de taille M1.4 de 0,3 millimètre d’épaisseur. Et deux pointes artificielles d’ongles.
Pour assembler le cadre droit des lunettes, disposez une pointe d’ongle pour faire face à la direction extérieure pour obtenir le meilleur effet protecteur. Et, ajustez l’angle entre la pointe de l’ongle et le cadre à environ 130 degrés pour éviter de masquer le champ de vision de la souris. À l’aide de l’adhésif cyanoacrylate, adhérez à la pointe artificielle de l’ongle vers le cadre et laissez l’adhésif sécher complètement pendant 12 heures.
Utilisez des tondeuses à ongles pour couper la pointe de l’ongle entièrement adhéré à environ une forme d’un par un centimètre et placer la lentille sur le cadre. Injecter l’adhésif cyanoacrylate du bord de la lentille et laisser l’adhésif se propager par tension de surface. Lorsque l’adhésif est sec, serrer la vis dans le bâton de nylon avec la rondelle du côté plat du bâton.
Ensuite, préparez le cadre gauche de la même manière avec le bout des doigts incliné dans la direction opposée de la pointe du cadre droit. Pour la mesure de base de la réfraction dans la longueur axiale, appliquez une goutte d’agent mydriatique, contenant cinq milligrammes par tropicamide millilitre et cinq milligrammes par hydrochlorure milliliter de phényléphrine de chaque côté du globe oculaire pour dilater la pupille. Attendez au moins cinq minutes avant l’anesthésie générale et ajustez la direction de l’un des yeux dans le viseur d’un réfractaire photo infrarouge pour positionner la première image purkinje au centre de la pupille et mesurer la réfraction le long de l’axe optique.
Après avoir mesuré l’autre œil de la même manière, placez la souris dans le système de tomographie optique de cohérence du domaine spectral et définissez la longueur axiaale comme la distance entre le vortex cornéen et la limite la plus brillante près du nerf optique. Pour fixer le cadre de lunettes précédemment préparé sur la souris, appliquez d’abord une goutte de 0,1 % de goutte d’oeil hyaluronate de sodium purifiée à chaque œil et placez le menton de la souris anesthésiée sur une surface inclinée de sorte que le plan initial du crâne soit horizontal. Utilisez un coton-tige trempé avec 70% d’éthanol pour stériliser les cheveux et le cuir chevelu, entre les oreilles et les yeux, et faire une incision de 0,8 cm carré dans la peau, entre les oreilles et les yeux, pour exposer le crâne.
Utilisez du liquide de gravure dentaire dans un coton-tige pour enlever le périoste et utilisez une paire de cadres sans lentilles pour aider à fixer le bâton sur la bonne position, en ajustant soigneusement la position des cadres pour s’assurer que les deux yeux sont au milieu des cadres vides. Utilisez un système d’adhésif dentaire auto-soin pour fixer le bâton sur la tête de la souris et attendre environ cinq minutes avant d’enlever soigneusement le cadre et l’écrou sans changer la position du bâton. Injectez ensuite 0,75 milligramme par kilogramme d’hydrochlorure d’atipamazole intraperitoneally pour aider la souris à se remettre de l’anesthésie plus rapidement et placer la souris dans une cage individuelle jusqu’à ce qu’elle soit complètement récupérée.
24 heures après la chirurgie, saisir le bâton et placer les cadres avec des lentilles sur l’animal pour initier l’induction de myopie. Ensuite, placez un filet entre la souris et le fond de la cage pour filtrer les restes de nourriture et surveiller le poids corporel et le comportement brut quotidiennement, en comparant les souris myopes avec les mêmes souris âgées et intactes pendant tout le processus expérimental. Retirez le cadre et nettoyez les lentilles et la pointe des ongles avec des cotons-tiges au moins deux fois par semaine pour maintenir la transparence des lentilles.
Ici, un ensemble de lunettes complètes est montré. L’angle entre les deux cadres peut être ajusté pour s’adapter aux souris d’âges différents. Après avoir placé les lunettes sur le cadre comme démontré, les deux morceaux de lunettes doivent être assez symétriques.
Pour cette mesure de réfraction dans un œil de souris induite par un objectif négatif de 30 dioptres pendant trois semaines, à partir du jour postnatal 21, le regard a été contrôlé à près de zéro degré dans l’axe x et y, ce qui indique que la souris voyait juste en face de la caméra. Toute cette image oculaire, prise par un système spectral de tomographie optique de cohérence de domaine, accordée pour les souris, permet de définir chaque partie de l’œil. Dans cette expérience représentative, les lentilles négatives de 30 dioptres ont induit un changement myope fort dans les mesures de réfraction et de longueur axiaale, comparées aux lentilles de dioptre zéro.
Le changement dans la réfraction a culminé dans la première semaine et est resté plat pendant les deux semaines suivantes, alors que la différence entre le changement de l’oeil myope et les longueurs axials d’oeil de contrôle était significative de la première semaine et est devenue plus grande et plus grande dans les deux semaines suivantes. Tout en essayant la procédure, il est important de se rappeler de suivre de près les instructions pour mesurer la réfraction et la lentille axiaale, pour permettre au résultat d’être comparable dans les laboratoires expérimentaux. Après son développement, la technique ouvre la voie à des chercheurs dans le domaine de la myopie pour explorer le mécanisme pathogène chez, non seulement les souris ordinaires, mais aussi les souris génétiquement modifiées.
